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转基因抗虫玉米Bt蛋白表达量的研究

玉米螟是我国玉米的主要害虫之一,每年都造成很大的经济损失,近年来,玉米螟的危害日趋严重。种植转基因抗虫玉米是防治玉米螟危害的有效手段之一。目前转基因产品的检测主要有PCR(聚合酶链式反应)和ELISA(酶联免疫吸附法)等方法。ELISA检测法是一种利用免疫学原理检测抗原或抗体的技术,在生物医学等领域已得到了广泛应用,ELISA方法检测外源基因表达蛋白的灵敏度高于0.1%,而且可定量进行检测,因此在转基因产品检测中ELISA方法是比较可靠的检测手段之一。本实验利用ELISA方法对转基因抗虫玉米生长发育4个时期的12个部位Bt蛋白含量进行实时检测,研究转基因抗虫玉米的抗虫性。1材料与方法1.1实验材料阳性和阴性玉米样品由瑞士先正达公司提供;阳性材料是转CryⅠA(b)基因的玉米;ELISA试剂盒购自美国agdia公司。1.2实验方法1.2.1取样分抽雄前、抽丝、灌浆初期和乳熟末期4个时期取样。取样部位:第10叶、第15叶、第21叶、...  (本文共2页) 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

转Bt基因抗虫玉米田间试验与遗传稳定性分析

近20年来,人们采用基因工程手段成功培育了一批抗虫、抗病、耐除草剂和高产优质的农作物新种质,取得了令人瞩目的成就。而一个转基因的植株获得后,通常还要对其后代进行一系列基因纯合鉴定、遗传稳定性的研究、农艺和经济性状的筛选、产业化过程中的种性保持等工作,所有这些过程都需要对目的基因进行跟踪调查,需要对大量的转基因后代进行筛选、鉴定。因此在转基因作物研究继续深入的同时,科学家们越来越重视转基因与常规育种技术的结合,并加强了对转基因作物后代性状的大田遗传表达与变异研究试验,为利用转基因技术进行作物种质创新,改良现有作物品种,最终实现作物转基因植株从实验室走向大田生产奠定坚实的基础。而基因转入宿主后的有效表达及其稳定遗传,则成为转基因植物实用化中的关键问题。国内关于玉米转Bt基因及Bt玉米遗传稳定性有一些报道,但多数是在转基因株系的早期世代,以转化植株的性能和基因功能的分析以及对国外Bt玉米的利用效果评价为目的,以国内具有自主知识产权的基...  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

西南科技大学
西南科技大学

转Bt cry1Ah基因抗虫玉米的遗传稳定性分析及农艺性状观察

在前期工作中,将Bt cry1Ah基因转入玉米自交系综31中,选取其中一株对亚洲玉米螟有显著抗性的玉米植株,命名为HGK60。分别从DNA水平和转录翻译水平对HGK60事件的T4代和T5代植株进行遗传稳定性分析。通过PCR、Tail-PCR、Southern Blot分析表明外源基因整合到了玉米基因组中并可以稳定遗传给后代,且明确了外源基因是按单插入双拷贝的方式插入到玉米1号染色体上,分析得到了玉米插入序列的侧翼序列。通过RT-PCR、Western Blot、ELISA、试纸条分析表明外源基因可以在玉米的根、茎、叶等组织中正常高效表达。在室内和田间分别用亚洲玉米螟、棉铃虫和黏虫幼虫对HGK60玉米的杀虫效果进行检测。室内生物活性检测结果表明,取食HGK60玉米心叶的亚洲玉米螟幼虫在3天后死亡率达100%;HGK60玉米对棉铃虫幼虫有毒杀作用,玉米不同部位对棉铃虫幼虫的杀虫效果存在差异;与综31相比,取食HGK60玉米叶片一周后...  (本文共83页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

转基因抗虫玉米次生代谢物质的变化及对亚洲玉米螟寄生性天敌腰带长体茧蜂的影响

随着转基因作物商业化种植的迅速推广,在给人们带来巨大经济效益的同时,对生态环境可能带来的风险已得到越来越多的关注。转基因作物田中,除靶标生物外,还有许多非靶标生物,包括非靶标害虫、中性昆虫、天敌昆虫和其它节肢动物。转基因抗虫作物对非靶标生物,尤其是对捕食性天敌和寄生性天敌的影响是评价其生态安全的重要内容之一。捕食性和寄生性节肢动物在生物防治中是控制害虫的重要因子,转基因抗虫作物对天敌昆虫是否有不利影响,将直接影响到转基因抗虫作物田害虫的发生以及转基因抗虫作物本身的应用前景。本论文针对转基因抗虫玉米主要次生代谢物质的变化以及转基因抗虫玉米对靶标害虫亚洲玉米螟幼虫寄生性天敌腰带长体茧蜂的可能影响,采用气-质/液-质联用仪、生物测定等技术手段,重点开展对转基因抗虫玉米与非转基因玉米植株中α-衣兰烯、β-石竹烯、丁布、异荭草苷和黄酮苷等几种次生代谢物质相对含量的研究,以及Bt玉米对亚洲玉米螟幼虫寄生性天敌腰带长体茧蜂寄生行为、生长发育、...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

复合Bt cry1Ac和cry1Ie抗虫玉米抗螟性及其在IRM中的作用

亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)是我国玉米上的重要害虫之一。分子生物学的发展与基因工程技术的应用,使能够高效控制靶标害虫的Bt作物得到推广。但大面积种植转单一Bt基因作物可引发靶标害虫产生抗性,避免和延缓抗性是保障转基因抗虫作物持续应用所面临的一项巨大挑战。“多基因”策略能有效延缓抗性产生,且更适宜于小农户种植模式,但要求所表达的毒素间不存在交互抗性或交互抗性很低。本研究通过田间抗螟性鉴定、组织生测、Elisa等方法,系统评价了cry1Ac/cry1Ie双价抗虫基因玉米组织蛋白表达量,田间抗虫效果,室内对于亚洲玉米螟敏感品系ACB-BtS和以Cry1Ac、Cry1Ie、Cry1F分别连续筛选多代的抗性品系ACB-AcR、ACB-IeR、ACB-FR的杀虫活性及其在抗性治理中的应用潜力,并结合不同配比的蛋白浓度毒力生测,模拟蛋白在组织中的表达,探索其功能和规律,以期为抗性治理和新基因的挖掘及应用提供...  (本文共51页) 本文目录 | 阅读全文>>

《安徽农业大学学报》2014年05期
安徽农业大学学报

转基因抗虫玉米转育株Bt蛋白的表达特性分析

玉米是世界上最重要的粮食和饲料作物之一,目前其种植面积仅次于小麦和水稻。并且这几年有上升的势头,是我国北方和西南山区及其他旱谷地区人民的主要粮食之一[1-2]。但是每年由于病虫害的侵染给人类带来了巨大经济损失,虽然田间管理以及药剂防治等传统方法在一定程度上抑制了病虫害的威胁,但费时费力且污染环境,存在很大的局限性。随着人类环保意识的加强和基因工程技术的发展,怎样利用生物技术培养稳定的高效抗病虫品种成为一种趋势[3-6]。目前基因工程技术快速发展,已有数家机构获得了具有商品化价值的抗虫转基因玉米[7]。国内外许多文献报道转Bt基因玉米品系均存在抗虫性的时空差异,在田间Bt玉米的整个生育期期间植株体内的杀虫蛋白并不是一直处于高表达水平[8-10]。在Bt转基因植株的抗性治理策略中一个重要的前提条件就是高表达[11-13],因此有必要对Bt玉米整个生育期杀虫蛋白的表达进行定量检测,为转基因生物安全监管和安全性评价提供技术支撑。目前,转...  (本文共6页) 阅读全文>>