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45S rDNA在不同倍性沙田柚染色体上的荧光原位杂交分析

沙田柚(Citrus grandisOsbeck.‘Shatianyou’)是我国柚类中的名优品种,但由于其种子多,影响了在国内外市场上的竞争力。国内许多学者开展了无核沙田柚培育研究,但由于产量与品质等原因,至今仍未见大面积无核沙田柚商业化生产。鉴于此,作者通过秋水仙碱离体诱导获得多个沙田柚同源四倍体单株(向素琼等,2004),这些四倍体新种质的获得为今后培育三倍体无核品种提供了亲本材料,而了解这些材料的遗传背景和遗传差异就显得极为重要。近年来,在植物多倍体基因组的起源和多倍化的分子和遗传学效应等方面进行了较多探讨(杨继,2001),但目前主要是针对自然形成的多倍体的进化动态进行研究,对人工加倍后获得的柑橘同源四倍体遗传变异方面研究主要集中在形态学变异和细胞水平变异,分子水平的研究则少有报道。高等植物中,核糖体是合成蛋白质的场所,构成核糖体的主要成分是rRNA和蛋白质的复合物。编码rRNA的基因有两种,即45S rDNA和5S ...  (本文共6页) 阅读全文>>

《安徽农学通报(上半月刊)》2012年01期
安徽农学通报(上半月刊)

固体样品的荧光原位杂交方法

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。荧光原位杂交技术(FISH)最初是由Pardue[1]和John[2]两个研究小组在1969年建立的,该技术可以在保持细胞形态的完整的同时检测出细胞内特定的核酸序列。1988年,Giovannoni[3]等首次将FISH技术引入细菌学的研究。1989年,Delong[4]首次使用荧光标记寡核苷酸探针检测单个微生物细胞。荧光原位杂交(FISH)技术结合了分子生物学的精确性和显微镜的可视性信息,可以在自然或人工的微生物环境中监测和鉴定不同的微生物个体,同时对微生物群落进行评价[5]。近年来,由于FISH技术灵敏、快速、使用安全、特异性好等优点,医学、生态学、遗传学、环境微生物学都将其作为研究的的有力...  (本文共2页) 阅读全文>>

《生命科学》2002年03期
生命科学

荧光原位杂交技术(FISH)及其在环境微生物学中的应用

微生物对整个生态系统具有重要的影响。微生物不仅是自然界的分解者,而且有些微生物也是食表1 不同环境中可培养的细菌细胞数占细胞总数的百分比生 境7一“按 CFU测定的百分比可培养细胞百分比(%)“0刀of~0.1。777。工 二 二、二 丑ytorpedtory物链中的初级生产者,同时在自然界的元素转化中微生物也是一个不可缺少的成员,因此,了解和检测微生物的种类和作用具有十分重要的意义。检测微生物的常规方法是培养法;不同类群的微生物需要特殊的培养基。这种方法不但费时费力,而且绝大多数细菌不能或很难培养。据统计通常环境中可培养的细菌不到细菌总数的二%(表1)山。仅依赖培养方法极大地阻碍了微生物生态学和第3期梁 威,等:荧光原位杂交技术(FISH)及其在环境微生物学中的应用87环境微生物学的研究,而且这种方法所得出的结果肯定不能反映自然条件下微生物的多样性、丰度和分布。因此必须建立起不依赖于培养的微生物检测方法。到现在为止,陆续建立的...  (本文共3页) 阅读全文>>

《国外医学(微生物学分册)》1998年01期
国外医学(微生物学分册)

用荧光原位杂交法测定慢性人类免疫缺陷病毒1型感染

测定Hlv不同感染类型细胞及染色体内HIV前病毒整合部位方面,由于HIV’DNA序列短(9.7kb),其敏感性低,阻碍了这一方法在HIV研究中的应用。本文作者以生物素标记的DNA探针与细胞染色体中DNA靶序列进行杂交,再将过氧化酶一链霉亲和素与其结合,用与生物素连接的tyramide与酶结合,最后用荧光素标记的亲和素与结合于过氧化物酶上的生物素反应,利用荧光显微镜观察原位杂交结果,建立一高敏感FISH法,并以此法检测了两株HIV慢性感染细胞株. 结果显示,UI/HIV一l细胞的两个(含两个Hlv一l整合型DNA拷贝的两个Hlv一1前病毒DNA的整合位点分别位于X染色体短臂的21区带和重排的第6号染色体上。8E5/L...  (本文共1页) 阅读全文>>

《实用临床医药杂志》2006年09期
实用临床医药杂志

多重荧光原位杂交检测慢性淋巴细胞白血病复杂核型异常

慢性淋巴细胞白血病(CLL)是以淋巴细胞克隆性增殖为特征的高度异质性的恶性血液病。随着培养刺激剂的应用及荧光原位杂交技术的出现,CLL的核型异常检出率逐步提高。其中部分CLL发现存在复杂核型异常(CCA),常规细胞遗传学(CC)技术不能详细并准确描述CCA,常规荧光原位杂交(FISH)技术用特异性的探针检测已知的染色体异常,1次只能检测1个或几个候选位点,难以满足对复杂核型分析的需要。多重荧光原位杂交(M-FISH)可以在1次杂交中,同时以24种颜色显示所有染色体,克服了核型分析的局限。作者采用M-FISH技术对6例CC显示CCA的CLL核型进行了详细分析,现报告如下。1研究对象2000年1月~2006年3月6例具有CCA的CLL患者9例,男3例,女3例,年龄36~64岁,平均年龄51岁。2方法2.1 CC分析采用骨髓细胞24 h短期培养法,按常规制备染色体。应用R显带技术核型分析,核型异常按《人类细胞遗传学国际命名体制(ISC...  (本文共3页) 阅读全文>>

《氨基酸和生物资源》2004年02期
氨基酸和生物资源

莲藕染色体上荧光原位杂交方法的初探

莲(Nelumbo nuc诉ra L.)属于睡莲科莲属,广泛分布于世界各地。莲经过上千年的栽培驯化,已经拥有几百个品种。从栽培学的角度通常把莲分为花莲、藕莲和籽莲川。对于莲的基础研究多集中在细胞学上的核型分析〔2]、栽培及加工工艺等方面〔’〕,对于分子细胞遗传学上的研究几乎是空白。DNA荧光原位杂交技术是一项利用标记的DNA为探针直接在染色体、细胞或组织水平定位特定的靶核酸序列的分子细胞遗传学技术〔‘]。该技术为宏观的细胞学与微观的分子生物学研究架起了一座桥梁。本研究旨在探索一种适合于莲藕的荧光原位杂交技术,为莲的分子细胞遗传学研究提供技术上的帮助。1材料与方法1.1试剂纤维素酶、果胶酶(Serva公司),小量质粒快速提取试剂盒(基因公司),随机引物标记试剂盒(Pro-mega公司),甲酞胺、DApl(Sigma公司),硫酸葡聚糖钠盐(上海化学试剂公司),链亲和素一Cy3,即streptavidin一Cy3(Kirkegaard...  (本文共3页) 阅读全文>>