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钾依赖钠钙交换蛋白-6(SLC24A6)的基因克隆与蛋白表达

钠钙交换蛋白是广泛存在于动物细胞膜上的一种离子转运蛋白,作为一个双向转运体,钠钙交换蛋白通过将细胞内的Ca2+泵出和将细胞外的Ca2+泵入两种相反的作用,维持细胞内Ca2+浓度的稳态,从而满足细胞功能活动对Ca2+的需求。Nicoll等[1]于1990年从狗的心肌细胞中克隆出第一个钠钙交换蛋白基因,在此之后,其它不同的钠钙交换蛋白被相继克隆得到,对其结构和功能的研究也得到了快速发展,有研究[2]发现钠钙交换在胰腺β细胞Ca2+平衡和胰岛素释放过程中发挥了一定的作用。Cai等[3]在2004年又发现NCKX家族的第六大成员SLC24A6,功能显示它是一种钾依赖的钠钙交换蛋白。本课题组完成了人胰岛素瘤组织的基因表达谱的研究[4],并同步克隆到SLC24A6[5]。为进一步研究SLC24A6与胰岛素分泌的关系,我们拟构建SLC24A6的原核表达与真核表达载体,并在大肠杆菌和哺乳细胞中进行了表达。材料和方法1材料1·1生化试剂载体pET...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国应用生理学杂志》1960年20期
中国应用生理学杂志

膜钠钙交换蛋白和过氧化氢交互作用对细胞内钙稳态调控

膜钠钙交换蛋白和过氧化氢交互作用对细胞内钙稳态调控方琰,戎明阳JohnP.Reeves(上海医科大学中山医院麻醉科,上海医科大学中山医院医学仪器厂上海200032;美国医学牙科大学新泽西医学院生理系摘要本研究旨在阐明过氧化氢(H_2O_2)和膜钠钙交换蛋白相互作用对胞浆钙〔Ca ̄2+〕_i的调控。在稳定表达钠钙交换蛋白CK1.4细胞上,用 ̄(45)Ca同位素液闪计数法测定钠钙交换蛋白的活性;用fura─2荧光探针和340/380nm双兴奋波长荧光影像技术测定钙释放和〔Ca ̄2+〕i。两因素两水平和三因素两水平正交分析表明10mmol/LH_2O_2与150mmol/L细胞外钠〔Na ̄+〕o、1mmol/L细胞外钙〔Ca ̄2+〕。相互作用或10mmol/LH_2O_2分别与150mmol/L〔Na ̄+〕。或1mmol/L〔Ca ̄2+〕。相互协同,均增加钠钙交换蛋白的活性,抑制钙内流。140mmol/L〔Na ̄+〕。激活钠钙交换蛋白...  (本文共5页) 阅读全文>>

中国人民解放军医学院
中国人民解放军医学院

线粒体钠钙交换蛋白NCLX对血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

研究背景:血管内皮功能障碍是糖尿病大血管病变的基础,高血糖导致的线粒体功能障碍是血管内皮损伤的主要机制之一。线粒体钠钙交换蛋白NCLX(mitochondrial Na+/Ca2+exchanger,NCLX)是最新发现的钠钙交换蛋白。2010年NCLX蛋白正式命名,随后发现在心肌、胰腺、神经元等组织都有表达并发挥很重要的作用。NCLX定位在线粒体嵴上,其功能是调控线粒体钙外排。内皮细胞中NCLX的表达,定位,以及功能暂无相关研究。方法:PECAM-1(CD31)标记大鼠主动脉内皮,MitoTracker?标记原代大鼠主动脉内皮细胞(RAECs)线粒体,皮尔逊共存系数(Pearson,s co-localization coefficient)计算MitoTracker?和NCLX蛋白荧光定位的重合率。注射STZ诱导糖尿病大鼠模型。体外培养原代大鼠主动脉内皮细胞,siRNA抑制NCLX表达。在大鼠主动脉内皮细胞株(RAECs l...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

南昌大学
南昌大学

钠钙交换蛋白与远处后适应心肌保护作用相关性研究

研究背景:冠心病作为对人类最具威胁的疾病之一,尽快使闭塞的冠脉血供恢复仍是当前主要治疗措施,尽管多数情况下能够使患者病情好转康复,但有时伴随着血管再通,心肌恢复供血后反而出现心率失常及器质性损伤等,对机体造成第二次打击,引起再灌注损伤。钙离子(Ca2+)在再灌注损伤中发挥重要作用,找到一种能够有效减轻缺血-再灌注损伤的方法已经是当今相关领域主要研究方向。远处后适应(RIP)具有可操作性强、对靶器官损伤小的优点,一经发现后便迅速受到研究人员的关注,但其确切机制十分复杂,目前尚不特别清楚,有研究表明其主要机制是激活细胞内PI3k-AKt-eNOS通路进而激活下游靶分子,这些靶分子具有保护心肌细胞功能的作用。另有研究表明,钠钙交换蛋白(NCX)在再灌注过程中承担着将钙离子转运入细胞内的角色,远处后适应过程中亦存在NCX逆向转运的抑制。在远处后适应期间,PI3k-AKt-eNOS通路与钠钙交换蛋白的抑制是否存在联系,尚无相关报道。目的:...  (本文共50页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华麻醉学杂志》1998年01期
中华麻醉学杂志

钠钙交换蛋白和药物交互作用及其脑复苏潜能

心脑缺血或低氧和多器官功能衰竭等临床重危疾病的发生机制迄今尚未阐明。新近研究揭示钙信号转导异常是其基本诱因之一〔,〕。阳离子川、浆膜钠钾一ATP酶和钠钙交换蛋白〔卜‘〕、线粒体膜或内质网上的钙一ATP酶〔5〕及其P:一嗓p令受体、1,4,5一磷酸肌醇(IP3)受体、钙通道是调控钙内流、钙释放、胞浆游离钙[CaZ斗」i信号跨膜转导的功能环节〔‘,6〕。本研究用L;。(2)‘5配对多因素随机对照数理统计模式,钠钙交换蛋白的转基因对照细胞系列和PTI荧光实时影像微量分析新技术‘们,阐明钠中华麻醉学杂志1998年1月第18卷第1期钙交换蛋白与药物交互作用,探讨缺血或贫氧心脑血管损害机制和重要器官功能复苏新对策。材料与方法 制备配对孵育的转基因CKI.4和Cl细胞悬液〔‘二一。按L,。(2)‘5正交数理统计模式,在300胖1细胞悬液中加入终浓度5拌mol/Lfura-2/AMDMSO荧光探针、0.25mmol/L磺毗酮(sulfinpyr...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国分子心脏病学杂志》2009年02期
中国分子心脏病学杂志

钾依赖钠钙交换蛋白6对人胚胎肾细胞钙离子浓度的影响

钠钙交换蛋白是广泛存在于动物细胞膜上的一种离子转运蛋白,作为一个双向转运体,钠钙交换蛋白通过将细胞内的CaZ+泵出和将细胞外的CaZ+泵人两种相反的作用,维持细胞内CaZ+浓度的稳态,从而满足细胞功能活动对Ca,‘的需求。Nicou等〔‘]于1990年从狗的』合肌细胞中克隆出第一个钠钙交换蛋白基因,在此之后,其它不同的钠钙交换蛋白被相继克隆得到,对其结构和功能的研究也得到了快速发展。Lytto。等川在2004年又发现NcKx家族的第六大成员NCKX6,功能显示它是一种钾依赖的钠钙交换蛋白。我们在糖尿病大血管并发症的研究中发现NCKX6主要表达在人血管内皮细胞,高血糖可上调NcKX6在内皮细胞中的表达〔’},它可能通过改变细胞内caZ十浓度来影响血管内皮细胞功能,从而参与了糖尿病大血管病变的发生和发展。本研究进一步构建NCKX6真核表达载体,转染人胚胎肾细胞(HEK293细胞),通过荧光分光光度计观察细胞caZ+浓度变化,为深人研...  (本文共3页) 阅读全文>>