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CD34~+细胞的体外定向诱导分化

目的 :研究CD34+ 细胞的体外定向诱导分化。方法 :利用吸附单克隆抗体 磁珠分离系统 (MACS)从外周血中分离CD34+ 细胞 ,加入白细胞介素 3(IL 3)、粒细胞 单核巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)及G CSF培养 3天及 7天后取出用于细胞总数 ,CD34+ 细胞比例及粒系祖细胞检测。结果 :CD34+ 细胞在IL 3、G CSF、G  (本文共2页) 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

人nthESC向HSC诱导分化和胚胎造血标志物表达研究

造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)是近年来研究较多的一类组织干细胞,目前发现卵黄囊、胎肝、主动脉-性腺-中肾区(AGM)、胎儿血液以及胎盘中均存在具有高度扩增能力的HSC。本论文主要进行了具有课题组专利的人自体基因胚胎干细胞(nthESC)向造血干细胞的诱导分化、人胚胎发育过程中卵黄囊、胎肝和胎盘中的造血发育以及胎盘贴壁细胞的分离培养、向神经细胞诱导分化的研究,为nthESC 和HSC的临床应用提供了理论依据和技术方法。1. 探讨了人胚骨髓间充质干细胞(MSC)的体外分离、扩增、冻存、复苏、转GFP基因和向成骨和神经细胞的诱导分化条件,结果发现MSC有60%可转染GFP基因,表达CD29、CD13、CD59,而CD34、CD45和CD38表达阴性。Vimentin染色阳性,mallory染色显示胶原存在,分离的细胞可在神经诱导体系和成骨诱导体系下进一步向神经细胞和成骨细胞分化。表明MSC在体外能...  (本文共175页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

造血干/祖细胞的体外定向诱导分化的临床前研究

造血干细胞为人类最早发现的一种干细胞也是目前为止研究最多的一种干细胞。进入90 年代后,随着分子生物学、免疫学、细胞生物学、激光、纳米材料和电子计算机等学科和技术的高速发展,使纯化造血干/祖细胞成为现实,也为造血干/祖细胞的体外扩增、定向诱导分化、基因治疗、生物免疫治疗、建库和移植奠定了基础。造血干细胞具有自我更新和多向分化的性能特征,过去的相当长的一段时期内,造血干细胞的来源还仅限于骨髓,近几年的研究表明,人们可从脐带血及动员的外周血获得大量的造血干/祖细胞,从而为造血细胞的基础及应用研究提供充足的细胞资源。对于造血干细胞,以往研究的重点在其体外扩增以满足临床患者移植的需要。而随着对于细胞性能的更深的认识,使人们意识到可利用造血干细胞多向分化的能力,利用体外操作技术,使我们获得足够数量的需要的细胞。从而完成“体外造血”,为细胞治疗提供应用手段。脐带血中富含造血干/祖细胞,且具有来源丰富,对供者无任何影响等优点,是极具潜力的造血...  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京协和医学院
北京协和医学院

人多能干细胞来源的红细胞体外3D培养条件的建立

目的:我们将人多能干细胞(hESCs)与小鼠主动脉-性腺-中肾区基质细胞(AGM-S3)共培养获得造血干/祖细胞,利用微球、胶原蛋白、透明质酸、多肽、纤维蛋白等构建的三维(以下简写为3D)材料在体外模拟造血微环境,定向诱导体外获得的造血干/祖细胞向成熟红细胞分化,并通过MGG染色、流式细胞术、免疫染色、PCR等手段分析诱导后收获的细胞,建立体外运用3D手段培养红系细胞的方法。方法:一、材料选择:选取魔芋葡聚糖微球、胶原微球、甲基纤维素、透明质酸、胶原蛋白、多肽、纤维蛋白等构建3D材料,进行红细胞体外定向诱导分化实验,筛选出本实验室条件下最佳的红细胞体外3D培养条件。二、细胞培养:本实验所用的胚胎干细胞系为H1细胞系。我们将H1与AGM-S3基质细胞共培养14天后收集细胞并进行CD34+磁珠分选实验,随后在无血清培养基SF-HSC[SFEM-2,SCF(50 ng/ml),FLT-3(50 ng/ml),TPO(50 ng/ml)...  (本文共57页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

与OP9细胞共培养诱导人ES细胞向造血分化体系的研究

背景:造血干细胞(HSC)是所有脊椎动物造血细胞形成的中心环节,移植后可完全重建造血功能,因此,同种异体造血干细胞移植(allo-HSCT)是治疗许多血液疾病(如白血病、地中海贫血、血液肿瘤)的关键。临床上,成体造血干细胞主要来源于骨髓及脐带血,而由于来源受限及免疫排斥极大地阻碍了造血干细胞的临床应用。胚胎干细胞(ES)为一类多能干细胞,在体外可无限扩增,且在特定条件下具有向造血干细胞分化的潜能,解决了细胞来源受限、免疫排斥等问题,为人类再生医学和个体化细胞替代疗法提供了无限的细胞来源。ES细胞体外诱导造血分化的研究是较为深入的领域之一。其中,OP9细胞是常用的用于诱导造血分化的基质细胞系,传统的共培养诱导周期约为2-3周,耗时长,本实验选用该诱导方法进行实验,通过探究最佳OP9细胞的接种密度,以达到缩短诱导分化周期的目的,优化体外造血分化体系。通过体外诱导造血分化的技术,建立人胚胎干细胞体外诱导造血分化的平台,为干细胞治疗奠定...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

济南大学
济南大学

人诱导性多能干细胞体外诱导分化为造血干/祖细胞及低氧对分化过程的影响

背景造血干/祖细胞可重建骨髓的造血及免疫功能,在重建患者的短期造血功能及长期造血功能方面均具有明显作用。临床上造血干/祖细胞移植现在多来源于脐血,然而由于脐血的数量有限,而且存在免疫排斥的风险,因此,造血干/祖细胞的体外诱导分化提供了一种崭新的来源。诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS细胞)因其具有多能干细胞的特性,而且具有多种分化潜能,使其成为近年来的研究热点。iPS细胞能够在体外分化为各种体细胞,并且因为iPS细胞是自身体细胞重编程而来的,不存在免疫排斥的问题,在伦理上也更能够被大家所接受,体外诱导能够得到患者自身的造血干/祖细胞进行骨髓移植。所以如何在体外将iPS细胞高效的分化为造血干/祖细胞成为大家关注的焦点。多能干细胞已经证实可以分化为造血干/祖细胞,诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法目前可以分为三种:一、细胞因子单层诱导,二、iPS细胞与基质细胞共培养,三、EB(拟胚...  (本文共59页) 本文目录 | 阅读全文>>