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鸡γ-干扰素基因的克隆及其在原核和真核系统中的表达

干扰素 (Interferon ,IFN)是在特定的诱生剂作用下 ,由细胞分泌的一族具有一定的抗病毒、影响细胞生长分化、抗肿瘤和调节免疫功能等活性的糖蛋白 ,是最早发现、研究最多的细胞因子。根据IFN蛋白的氨基酸结构、抗原性和细胞来源 ,可将IFN分为两类即I型IFN和Ⅱ型IFN。Ⅰ型IFN又分为α、β两个亚型 ,分别由白细胞和成纤维细胞产生 ,它们作用于同一受体 ,可抑制病毒DNA和蛋白质合成 ,活化NK细胞 ,促进MHCI类分子提呈抗原。Ⅱ型干扰素又称为γ_干扰素 ,主要由T细胞和NK细胞产生 ,与I型干扰素相比有着多种免疫学和生物学活性[1 ] ,它具有促进MHCⅡ类抗原表达、增强APC细胞与T细胞的相互作用、增强T细胞辅助抗体产生和细胞毒性T细胞产生的能力等诸多免疫调节活性 ,可单独作为生物制剂应用于一些疾病的防治 ,又可作为免疫佐剂 ,增强疫苗的免疫效果 ,还可与一些病原微生物的保护性抗原基因共表达 ,从而加强和改善疫...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中南药学》2014年07期
中南药学

γ-干扰素释放试验在辅助诊断活动性肺结核中的临床意义

一般资料选取本院2012年5月到2013年10月期间收治的94例活动性肺结核疑似患者,其中男51例,女43例;年龄最大75岁,最小19岁,平均(45.6±7.4)岁。选取同期进行体检50例健康志愿者作为对照组,其中男27例,女23例,年龄最大73岁,最小20岁,平均(44.9±5.8)岁。2组在性别、年龄等方面的差异均不具有统计学意义(P0.05),具有可比性。2方法2.1处理方法所有疑似患者在入院72 h内采集5 mL静脉血,在血样中加肝素进行抗凝处理,同时采取对照组的静脉血。γ-干扰素释放试验在采集血样后2 h内进行,首先采用Ficoll液分离外周血单个核细胞,并用无血清细胞培养液将其重悬,将细胞浓度调整至2.5×105个·mL-1,随后使用酶联免疫斑点法检测,检测方法按照T-SPOT试剂盒(英国Oxford Immunotec公司)说明书操作。采用BACTEC MGIT仪(美国BD公司)进行结核菌培养。2.2统计学方法采用...  (本文共2页) 阅读全文>>

《长江大学学报(自科版)》2014年18期
长江大学学报(自科版)

γ-干扰素释放试验在肺外结核诊断上的价值探讨

近年来,结核病免疫诊断技术的取得了很大进展。γ-干扰素释放试验由于其高敏感性与特异性,对痰结核菌涂片阴性或痰结核菌培养阴性的肺结核、肺外结核提供了早期无创诊断的重要途径之一。本研究通过对肺外结核、肺结核、肺部感染患者外周血T细胞致敏后分泌γ-干扰素,探讨干扰素释放试验对临床医生诊断肺外结核的指导意义。1对象与方法1.1对象我院2012年1月至2013年7月肺外结核患者43例,其中淋巴结核18例,结核性腹膜炎7例,结核性脑膜炎5例,腰椎结核4例,子宫内膜结核5例,盆腔结核4例,均通过病理诊断确诊,该组病例已作胸部CT排外肺结核、肺部感染。并选取本科门诊及住院肺结核患者37例,通过胸部CT、痰找结核菌、支气管镜检查确诊。并选肺部感染患者41例,通过胸部CT、痰培养确诊做对照。1.2样本采集及实验室检测QFT-GIT试剂盒购自澳大利亚Cellestis公司。按照说明书要求完成样本的采集、刺激培养和检测。所有标本均于室温下瞬时离心,取上...  (本文共2页) 阅读全文>>

《安徽农业科学》2008年17期
安徽农业科学

鸡γ-干扰素的克隆·表达和序列分析

近年来,随着病原菌新毒株、变异株的不断出现,我国动物疾病的防治面临严峻的挑战,目前的预防和治疗措施已不能经济而有效地控制疫病的发展,尤其是病毒性疾病的危害日益严重,因此需要一种有效的防治措施。自1957年Isaacs和Lindenmann发现干扰素以来,干扰素已经显示出了极强的抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节活性和应用前景。目前,动物干扰素研究主要集中在基础研究和临床试验阶段,且大多数研究关于人和哺乳动物,而对鸡γ!干扰素(ChIFN!γ)的研究相对滞后。自1995年GigbyMR等[1]成功克隆了鸡γ!干扰素基因以后,许多学者从分子水平对鸡γ!干扰素作了大量研究。在我国,对鸡γ!干扰素基因的研究甚少,笔者根据国外报道的资料,从ConA刺激的鸡脾脏淋巴细胞里面克隆了鸡γ!干扰素基因,并在IPTG诱导下表达了鸡γ!干扰素重组蛋白,以期为鸡γ!干扰素的进一步研究奠定基础。1材料与方法1.1材料试验鸡为20日龄SPF鸡,购自蒙自鸡场;质粒p...  (本文共3页) 阅读全文>>

《红河学院学报》2007年02期
红河学院学报

鸡γ-干扰素的克隆和序列分析

与人类和哺乳动物相比,鸡γ-干扰素基因的克隆相对滞后,1995年,G idby等[1]成功克隆了鸡γ-干扰素基因,此后,许多学者对鸡γ-干扰素从分子水平做了大量的研究,在我国,对鸡γ-干扰素基因的研究甚少,我们根据国外报道的资料,从ConA刺激的鸡淋巴细胞里面克隆了鸡γ-干扰素基因,并在IPTG诱导下表达了鸡γ-干扰素重组蛋白,以期为鸡γ-干扰素的进一步研究奠定基础·1材料与方法1.1试验鸡20日龄SPF鸡,蒙自某鸡场购买·1.2质粒和菌种pET32(a)和DH5α、BL21由红河学院分子生物学实验室保存1.3工具酶和试剂Trizol试剂购自Invitrogen公司,M-MLV、Rnasin、Taq DNA聚合酶、DNA连接酶购自MB I公司,T载体、胶回收试剂盒购自大连宝生物公司·1.4引物设计根据GenBank发表的鸡γ-干扰素核苷酸序列[2],使用Primer引物设计软件设计一对特异性引物,由大连宝生物公司合成,引物设计如...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国外医学(肿瘤学分册)》1987年05期
国外医学(肿瘤学分册)

癌症患者用人重组γ-干扰素治疗后血中单核细胞的杀癌细胞特性

本研究目的是评价癌症病人经系统的人重组Y一干扰素(rIFN一:)治疗后血中绝核细胞的抗肿瘤友应。研究证明。单核巨噬细胞系在宿主抵抗癌转移方面具有重要作用。在体内,这些细胞被淋巴因子或胞壁酞二肤(MDP)激活后与啮断动物自生性转移癌的消失有关。这促使作者对癌症病人使用r1FN一丫,并就用药剂量和用药方式对血中单核细胞抗肿瘤特性进行比较. 将31例各种恶性肿瘤患者分为三个治疗组。第一组10例,每日静滴rIFN一Y6小时共1。天,剂量为。.01、。.25Ing/m盆/天。包括2例肾细胞癌,3 盆_例乳腺癌,3例淋巴瘤,1例基底细胞癌,工例软组织肉瘤.在输...  (本文共1页) 阅读全文>>