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成骨生长肽对体外培养成骨细胞样细胞的促成骨作用

成骨生长肽 (osteogenicgrowthpeptide ,OGP)是近期发现的促成骨、促造血的多肽类生长因子 ,研究其对成骨细胞增殖成熟过程中形态功能的影响 ,将有助于探索骨折愈合、骨病防治的新途经。材料与方法1.细胞来源 :由上海市放射医学研究所提供新生 2 4h内的SD胚鼠 ,无菌取出胚鼠头部的颅盖骨 ,用精细镊刮除表面膜层和脑组织 ,Hank液清洗 3次 ,剪碎 ,用 2 .5g/L的胰酶预消化后液体弃之 ,再消化后用滤膜去除组织 ,离心 ,制成成骨细胞样细胞悬液 ,分装于 75ml无菌塑料瓶内培养 ,待细胞长满瓶底再作消化 ,以 1× 10 6细胞 /瓶接种于 2 5ml玻璃瓶内。做染色用的瓶内放入 2块洁净无菌的玻璃片。OGP用药与对照两组各 5 0瓶 ,均用含体积分数为 10 %胎牛血清的DMEM培养液培养 ,OGP组中加入OGP 10 -10 mol/L ,置于37℃、体积分数为 5 %的CO2 培养箱内 ,...  (本文共4页) 阅读全文>>

华中农业大学
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成骨生长肽对体外培养的奶牛成骨细胞骨形成的影响

目的:观察不同浓度OGP对体外培养的奶牛成骨细胞成骨活性的影响。方法:无菌取出新生奶牛的肋骨采用组织块培养法获取成骨细胞进行原代、传代培养,取第二代细胞通过形态学观察、碱性磷酸酶染色等方法鉴定为较纯的成骨细胞后作为试验模型,将含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养液配制成含4%牛血清白蛋白的不同浓度的OGP与第二代奶牛的成骨细胞共培养。采用MTT法观察OGP对成骨细胞增殖功能的影响(用波长490nm处的OD值表示);氨基安替吡啉测酚法(金氏法)观察对成骨细胞分化功能的影响(用碱性磷酸酶活性表示);放射免疫法观察对成骨细胞分泌骨钙素的影响(用放免活性单位-ng/mL表示)。RT-PCR法观察OGP干预下相关因子-骨钙素mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达影响。结果:采用组织块培养法,获得的细胞具有典型成骨细胞的形态特征,细胞碱性磷酸酶染色呈阳性率达94%以上,符合成骨细胞的生物学特性,表明培养的细胞为高纯度的成骨细胞。加OGP培养后测定细...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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OGP对奶牛成骨细胞、骨髓基质干细胞的作用及其微囊化研究

成骨生长肽(Osteogenic growth peptide,OGP)是一种高效促成骨及造血刺激因子。普遍存在于哺乳动物的血液中,对促进骨形成、松质骨密度及骨折的愈合具有重要的意义。有研究发现,OGP通过自分泌及旁分泌途径,促进人及啮齿目动物的成骨细胞及骨髓基质干细胞分化、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性及基质矿化。本试验从以下五个方面探讨了OGP对奶牛骨髓基质干细胞及成骨细胞作用及调控机制,并对OGP转基因细胞微囊生物学特性进行研究。1.奶牛骨钙素抗体制备以奶牛骨组织提取的RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出奶牛骨钙素(Bonecalcium protein,BGP)全长cDNA,然后将扩增产物重组到PMD-18T载体中,测定了全基因的核苷酸序列。序列分析表明,奶牛骨钙素全长cDNA为303bp,编码100个氨基酸,与GenBank中的X53699的序列完全相同。通过重叠延伸PCR技术连...  (本文共150页) 本文目录 | 阅读全文>>

内蒙古大学
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乳酸菌发酵骨粉产品的研发及其补钙成骨作用的研究

响应自治区提出的绿色农畜产品输出基地建设与转型升级的需要,开发绿色无污染的高科技高端产品、增加畜产品附加值已成为当务之急。以牛羊鲜骨为原料通过发酵研发补钙又促成骨的纯天然高端产品,提高畜牧资源的附加值,为民生健康做出贡献。选用三种乳酸菌发酵牛羊鲜骨粉,使羟磷灰石的钙以乳酸钙形式释放。经牛羊鲜骨—粉碎—灭菌—发酵—总混—冻干—干法制粒—压片制成生物活性制剂(产品),并在细胞,组织和动物水平上验证了产品的功效。用湿灰法消化骨粉用EDTA滴定方法测定总钙含量,用EDTA滴定方法测定游离钙,以平板倾注法测定活菌数。培养人成骨细胞hFOB并用产品刺激12 h后提取RNA在以荧光定量PCR检测COLLAGEN,RANKL,OPG三种基因的表达。以切除卵巢的方法制作了骨质疏松模型动物,并用全自动生化仪测定血清指标,取股骨制作病理切片经HE染色观察大鼠骨质疏松程度。灌胃给药法研究个体水平上的功效,灌胃两个月后动脉取血测定血清生化指标,再处死大鼠...  (本文共57页) 本文目录 | 阅读全文>>

《吉林大学学报(医学版)》2012年01期
吉林大学学报(医学版)

煅烧骨颗粒大小对兔颅骨缺损引导成骨作用的影响

dyeing showed that amount of capillary grew and new bone formation in different degrees was found.Both group Aand group D diplayed mature callus formation.The A values of each group had an increasing tendency.The Avalues in group A and group D were significantly higher than those in group B and group C(P0.05)at each timepoints.The A values in group A were significantly higher than those in group D(P0.05)in 3and 6week...  (本文共5页) 阅读全文>>

《上海交通大学学报(医学版)》2010年12期
上海交通大学学报(医学版)

成骨生长肽促成骨作用的研究进展

1992年Bab等[1]从再生的骨髓细胞中分离出一种多肽,其在体内可激活造血系统、促进骨的合成代谢,在体外可刺激成骨细胞和骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖和分化、促进成骨,遂命名为成骨生长肽(osteogenicgrowth peptide,OGP)。OGP可促进骨折愈合,预防骨质疏松,可用于骨不连和股骨头坏死的治疗,具有广泛的临床应用前景。本文就OGP促成骨作用的研究进展进行综述。1 OGP的生物学特性完整的OGP有14个氨基酸,相对分子质量1 523,组成为丙-亮-赖-精-谷氨酰胺-甘-精-苏-亮-酪-甘-苯丙-甘-甘(H2N-ALKRQGRT-LYGFGG-COOH),C端5肽H-Tyr-G ly-Phe-G ly-G ly-OH[OGP(10-14)]为其功能活性基团,其中Tyr和Phe的侧链及G ly残基对于OGP的最佳生物活性至关重要[2]。OG...  (本文共4页) 阅读全文>>

吉林大学
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煅烧骨的制备及煅烧骨颗粒大小对其引导成骨作用影响的实验研究

为了明确煅烧骨颗粒大小对其成骨作用是否有影响,我们在前期工作的基础上(煅烧骨的制备及理化性能的研究)将煅烧骨颗粒按直径大小分成4组(A组0.1-0.3mm,B组0.3-0.6mm,C组0.6-0.9mm,D组0.1-0.9mm),分别置于新西兰大白兔颅骨缺损中来观察成骨结果,以明确煅烧骨颗粒大小对其成骨作用的影响。于术后3、6、8、12周进行骨缺损部位取材并拍摄软X线片,作影象、大体和组织学观察。所得数据采用SPSS10.0进行数据管理和统计分析,多组数据进行单因素方差分析,两两比较进行q检验(P 0.01 )。结果表明0.1-0.9mm组引导成骨作用强于0.1-0.3 mm组,0.1-0.3 mm组引导成骨作用又明显强于0.3-0.6 mm和0.6-0.9 mm两组。说明煅烧骨的颗粒大小对其成骨作用有影响,此结果可作为筛选和构建仿生骨支架材料的重要参考指标。  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>