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成骨肉瘤相关抗原的纯化及其特异性分析

成骨肉瘤相关抗原的纯化及其特异性分析何大为范清宇范德刚裘秀春摘要用抗正常组织抗体制成免疫亲和层析柱,把成骨肉瘤组织提取物反复过此免疫亲和层析柱,其中的正常组织成分被吸附在层析柱上,不被吸附的成分经SDS-PAGE分析,显示单一条带,是一种分子量为32KD的抗原成分。利用免疫电泳、ELISA和琼脂双向扩散试验进行了特异性分析,结果表明,此抗原只在肿瘤组织中存在,而在正常组织中没有。用此抗原免疫BABL/C小鼠制备了一株抗成骨肉瘤的单克隆抗体2G10。用此单抗进行免疫组织化学染色,与正常组织反应阳性率为0/9,与成骨肉瘤组织反应阳性率为20/21。关键词成骨肉瘤肿瘤相关抗原免疫亲和层析单克隆抗体PurificationofOsteosarcomaAssociatedAntigenanditsspecificityanalysisHeDawei,FanQingyu,FanDegang,etal.OrthopaedicsDepartme...  (本文共5页) 阅读全文>>

《生物化学与生物物理进展》1988年05期
生物化学与生物物理进展

钙调素亲和层析柱的制备及其应用

钙调素(Calmodulin,简称eaM)是一种在进化上高度保守的钙调节蛋白,存在于所有真核生物中,它作为第二信使钙的受体蛋白,通过调节各种靶酶的活性从而发挥重要的生理功能。现已在动植物中发现多种caM结合蛋白或靶酶。由于caM具有在有钙和缺钙时与CaM结合蛋白可逆结合的特性,因此可将caM偶联到琼脂糖上,制备成钙调素琼脂糖亲和层析柱,它是进一步寻找新的caM结合蛋白及提取纯化已知CaM靶酶和CaM抗体的理想工具。 材料和方法、试剂和材料 苯基琼脂糖斗B(phenyl一sepharose 4B,Phamacia)CNBr活化的琼脂糖4B(CNBr-a。tivated一sepharose 4B,Phamaeia)新鲜牛脑。 二、方法 l,牛脑eaM的制备〔‘,: 新鲜牛脑50Qg,加人4倍体积的缓冲液A(SOm mol/L Tris一HCI,lm mol/L EGTA,0.5mmol/LpMSF,lmmol/L疏基乙醇,pH7.5...  (本文共5页) 阅读全文>>

《华西医科大学学报》1991年03期
华西医科大学学报

应用Act-Ultrogel AcA 22亲和层析柱分离纯化甲胎蛋白

人体甲胎蛋白(aFP)可从胎儿血、肝癌患者血清和腹水中获得。分离纯化的方法很多,但操作复杂,得率低。为了获得供标记用的aFP,作者应用一种新型的活化凝胶先偶联抗aFP抗体,制成亲和层析柱,从胎儿尸体匀浆液内分离出aFP,可供’2.1标记用。材料与方法 一、脸双液的翻. 取胎龄3~5月的引产胎儿尸体,去除头、内脏及四肢骨骼,剪成1 cm大小的方块,称重.加入胎组织2/3重t的0.端NaCI溶液,用组织捣碎机打成匀浆,然后再加1/3胎组织重t的0.端NaCI,搅匀后里4 .C过夜。离心及纸浆过雄去除固体成分,得到较澄清的胎授液,加0.02%NaN:,里4 OC备用。 二、杭。FP杭体康和层析柱的翻. 1.Y一球蛋白的制备取马抗aFP抗血清 (卫生部成都生物制品研究所,批号85070卜2,双扩效价1:128)20ml,用50%及33%饱和度的硫酸钱分别沉淀1次和3次,得Y一球蛋白粗品〔i〕。 2.亲和层析柱的制备按改进的Kahn法〔2...  (本文共4页) 阅读全文>>

《内蒙古医学杂志》1985年01期
内蒙古医学杂志

两步亲和层析法纯化HBsAg的实验报告

目前,用于纯化HBsAg的方法较多,如盐析、凝胶过滤、超速离心以及单纯亲和层析等方法,但不易达到免疫纯,有的设备亦较复杂。利用羊抗HBs抗体制成的亲和层析柱从HBsAg阳性人血清中纯化HBsAg,再用羊抗人r球旦白亲和层析柱吸收HBsAg溶液中尚存的正常人旦白,可获得活性好的免疫纯HB:Ag,用于免疫动物,亦可获得较理想的抗HBs抗体。材料及方法 1、羊抗HBs抗体:对流电泳效价1:256(+)的羊抗HBs经50%饱和度硫酸铰二次,再经33%饱和度硫酸铰沉淀二次后脱盐,用。,01M、PH7.2磷酸盐缓冲盐水平衡,然后于o.IM碳酸氢钠溶液中4oC透析3小时,其对流电泳效价1;128(+),旦白含量3s.4mg/ml。 2、羊抗HBs亲和层析柱的制备:在通风橱内称取3.0克嗅化氰,置50ml蒸馏水中磁搅拌溶解,待溶解后,在布氏漏斗上抽滤,然后将抽干的60ml sephar。Se4B倒入澳化氰溶液中,立刻进行磁搅拌,并用ZN氢氰化钠...  (本文共2页) 阅读全文>>

《食品工业科技》2007年02期
食品工业科技

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和层析柱的研制

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivanol,DON),是一种单端孢霉烯族真菌毒素,主要由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)产生,污染小麦、大麦和玉米等谷物及其制品,具有急性毒性、免疫毒性和胚胎毒性等[1~4]。由于DON在谷物中污染的普遍性和对人畜的高度危害,各国学者先后建立了多种DON的检测方法,主要有薄层层析法(TLC)、酶联免疫吸附试验法(ELISA)、高压液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)等[5~7]。TLC法是最早应用于DON检测的方法,灵敏度较低,且操作繁琐;ELISA法快速、灵敏,但干扰因素较多,常用于对大量样品的筛查检测;HPLC、GC法灵敏、准确,但对样品纯度要求较高,检测前必须对样品进行净化处理,常规净化方法步骤繁多,且需使用大量有机溶剂,危害操作人员的身体健康。免疫亲和柱净化方法利用抗原抗体高度特异性亲和作用,能快速特异地将DON从食品样品中分离出来,并同时完成净化和浓缩步骤[...  (本文共4页) 阅读全文>>

《分析化学》2008年01期
分析化学

微囊藻毒素-LR免疫亲和层析柱的研制和应用

1引言免疫亲和层析柱是利用免疫亲和层析(immunoaffinity chromatography,IAC)技术,基于抗体与抗原专一性可逆结合的特性和色谱差速迁移理论,实现目标物的分离与分析。由于抗体与抗原作用具有高度专一性,因此能够去除绝大部分杂质,通过一次净化就能提纯1000~10000倍[1]。免疫亲和层析在与藻毒素类似的真菌毒素的检测中已广泛应用,其中黄曲霉毒素的免疫亲和层析已被列入国家标准中(GB18980-2003和GB18979-2003)。微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)是蓝藻等藻类产生的一类剧毒物,是肝癌促进因子[2,3]。考虑到饮水安全,WHO和我国GB5749-2006生活饮用水卫生标准规定饮用水中MC-LR的控制标准为1μg/L。目前水中MC-LR的检测常用HPLC[4~6]和LC-MS[7]法,因含量低,在进样前,一般用固相萃取柱(SPE)富集,但是SPE无特异性,水中杂质多...  (本文共4页) 阅读全文>>