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豆豉纤溶酶产生菌发酵条件研究

心脑血管疾病严重危害人们的健康,脑血栓、脑溢血、急性心肌梗死已成为人类死亡的主要原因之一。利用纤维蛋白溶解酶(纤溶酶,1)溶解血栓,使血管再通是目前防治此类疾病的有效手段[1,2]。应用微生物技术生产1具有周期短、产量高、生产成本低等特点,是生物医药发展的一个重要方向[3,4]。本文对从豆豉中筛选到的一株1产生菌枯草芽孢杆菌HGD107进行液态产酶发酵条件研究,以进一步提高该菌株的1产量和酶活。1 材料1.1 菌种HGD107(本系菌种室保藏)。1.2 试剂牛血纤维蛋白原、凝血酶、尿激酶标准品(中国药品生物制品检定所),琼脂糖(上海华美生物工程公司);其它试剂均为国产分析纯或进口分装。1.3 培养基(%,w/w)斜面培养基:牛肉膏0.5,蛋白胨1,NaCl 0.5,琼脂1.5;pH7.0~7.4。种子培养基:蛋白胨1.5,葡萄糖1.5,K2HPO40.4,KH2PO4 0.2,MgSO4 0.05;pH 7.0...  (本文共4页) 阅读全文>>

山东师范大学
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豆豉纤溶酶产生菌的筛选及基因的克隆与表达研究

豆豉纤溶酶是从我国传统发酵食品豆豉中发现的新型纤溶酶,它具有纤溶活性高,无毒副作用,半衰期长,不引起内出血等优点,因此豆豉纤溶酶无论作为抗血栓药物还是防栓保健食品都具有十分重要的开发价值。本论文从我国民间传统发酵豆制品中筛选出具有纤溶酶活性的产生菌菌株,并进行液体发酵工艺条件优化及其纤溶酶基因的克隆与表达研究,具体结果如下:1.从多种我国传统发酵豆制品中筛选出产纤溶酶的菌株42株,通过琼脂糖-纤维蛋白平板比较法得到其中活力最高的一株HD4,纤溶活力为613.8U/mL;通过菌落与菌体形态、生理生化试验结合16S rRNA基因序列测定,初步鉴定为枯草芽孢杆菌;通过DNA-MAN和MAGE4软件绘制系统发育树,发现菌株HD4与Bacillus subtilis在同一分支,且遗传距离最短,从而确定菌株HD4属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的一个菌株。2.以HD4菌株为出发菌株,对其液体发酵培养基和发酵条件进行优化,结...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北林业大学
东北林业大学

豆豉纤溶酶高产菌株的筛选、发酵条件优化及酶的分离纯化

豆豉是我国传统的大豆发酵食品,作为调味品在中国食用已久。豆豉纤溶酶是从豆豉中提取出来的一种具有较高纤溶活性的酶,该酶抗凝、溶栓、不溶解血细胞、不引起内出血、体内半衰期长,而且可通过消化道直接吸收。另外豆豉纤溶酶可通过发酵进行大量生产,正是由于豆豉纤溶酶重要的药用价值和良好的应用前景,其有望被开发成为新一代溶栓、防栓药物。本论文取8个不同来源的豆豉样品,经自制酪素平板初筛、纤维蛋白平板复筛,筛选出5株有较高纤溶活性的菌株。其中菌株YH56粗酶液的酶活最高,达到280IU/ml。采用16S rRNA序列分析法及传统的生理生化特征鉴定法对该菌株进行鉴定,确定菌株YH56为枯草芽孢杆菌。利用单因素实验和正交分析方法,优化得到枯草芽孢杆菌YH56产豆豉纤溶酶的最佳发酵条件:pH值7.0,35℃摇瓶150rpm培养60h,接种量4%,种龄18h,装液量40ml/250ml。在此发酵条件下,该菌产生的纤溶活性可达到880IU/ml。最佳发酵培...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《粮食与油脂》2011年05期
粮食与油脂

豆豉纤溶酶研究概况及进展

血栓和栓塞性疾病如心肌梗塞、脑血栓中风、脉管栓塞等,已成为当前危害人类健康、导致死亡率最高疾病之一。据世界卫生组织公布数据显示,全球每年有1 700万人死于心脏病和其它心血管疾病,约占全球死亡人数1/3,明显超过恶性肿瘤、传染性疾病、呼吸系统等疾病,潜在溶栓剂市场可达20亿美元〔1〕。目前治疗血栓病最为有效、且可靠手段是溶栓疗法,因此溶栓药物及具有溶栓功能保健食品研制进展十分迅速。从传统大豆发酵食品中分离提取纤溶酶,是近年溶血栓药物研究新方向之一。1987年,日本学者须见洋行等〔2~3〕首次从纳豆中分离纯化得到一种具有高效溶血栓作用纳豆激酶(nattokinase,NK)。该酶具有抗栓、溶栓等功能,且作用时间长、安全性好,许多国家现已开发出多种以纳豆为原料保健食品和药品〔4〕。受纳豆激酶研究启发,近几十年来,人们又从不同国家和地区传统食品中陆续发现微生物纤溶酶,1996年韩国学者Kim从韩国传统食品豆酱中分离纯化得到纤溶酶CK和...  (本文共5页) 阅读全文>>

华南理工大学
华南理工大学

新型纤溶酶得产生菌选育、发酵优化及酶学性质研究

豆豉纤溶酶是从中国传统的大豆发酵食品——豆豉中发现的新型纤溶酶。这种酶不仅具有较高的纤溶活性,而且无毒副作用,不引起内出血,在体内半衰期长。因此豆豉纤溶酶无论作为抗血栓药物还是预防血栓栓塞性疾病的保健食品,都具有十分重要的开发价值。然而,现有的相关研究主要集中在纤溶酶产生菌种的筛选、发酵条件的优化等方面,对于豆豉纤溶酶的分离纯化及酶学性质的研究非常有限,对其核苷酸和氨基酸分子水平的研究更为鲜见。基于以上情况,为了获得具有自主知识产权的新型纤溶酶,本论文从广泛收集的各种豆豉成品及半成品中筛选具有纤溶活性的菌株,并进行菌种鉴定;采用物理和化学手段分别对筛选到的菌株进行诱变;对纤溶酶产生菌的突变株进行发酵条件优化;对纤溶酶进行分离纯化工艺路线的研究;另外,采用PCR技术扩增豆豉纤溶酶成熟肽编码区片段,进行核苷酸序列测定,并推导出其氨基酸序列与其它纤溶酶进行同源性分析;为了进一步验证该纤溶酶是否为新型的纤溶酶,我们对该纤溶酶的酶学性质进...  (本文共132页) 本文目录 | 阅读全文>>

江南大学
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固态发酵高溶栓活性豆豉及其抗氧化特性的研究

从全国各地收集到6种生豆豉样品,通过改良的培养基—纤维蛋白平板初筛、固态发酵复筛及菌落形态和生理生化特性鉴定,成功筛选出一株产豆豉纤溶酶能力较高的DC-1菌株。利用浅盘固态发酵技术对DC-1进行了固态发酵培养,培养基经灭菌、补加碳源后,按一定比例接种种子液,在合适的发酵条件下进行固态发酵培养。通过单因素实验确定出了影响固态发酵过程显著的参数,应用SAS软件响应面分析程序对发酵过程中的发酵周期、发酵温度,大豆初始水分含量进行了分析与优化。实验得出了高溶栓活性豆豉产生菌固态发酵的最佳工艺参数,即大豆水分含量74%、发酵周期72h、发酵温度39℃,在此条件下高溶栓活性豆豉中纤溶酶活力可高达1130.03IU/mL。由DC-1菌株发酵制成的高溶栓活性豆豉用95%乙醇溶液溶解,常温浸提24h、过滤后通过冷冻干燥得到高溶栓活性豆豉提取物,提取物用95%乙醇溶液溶解并稀释成不同的浓度梯度进行抗氧化特性分析。实验得出高溶栓活性豆豉提取物具有较强...  (本文共45页) 本文目录 | 阅读全文>>