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HIV-1型中国株E、B亚型gag基因的克隆与表达

在分子流行病学调查的基础上 ,我们克隆到中国艾滋病毒E、B亚型代表株的结构基因 gag ,为疫苗研制而设计的克隆路线是从未经培养的HIV 1阳性的外周血中直接扩增全长的 gag ,而以往的文献多集中于从培养病毒中克隆全长的 gag和 gp12 0基因[1~ 3] 。有文献[1~ 3] 表明 ,不论是从cDNA还是从前病毒DNA克隆获得的HIV 1的全长基因有一部分是缺陷的[2 ,3] ,因此 ,有必要选择合适的表达系统来表达所克隆的基因以初步判定所克隆的基因是否完整或缺陷。我们采用昆虫细胞 杆状病毒表达系统 ,构建了中国HIV 1gag基因的杆状病毒表达质粒 ,并利用GIBCO公司的Bac to Bac杆状病毒表达系统 ,得到了表达HIV 1E和B亚型 gag的重组杆状病毒。gag重组杆状病毒感染昆虫细胞表达了由 gag蛋白形成的病毒样颗粒 ,并分泌到上清中。1 材料和方法1 1 试剂及标本来源 HIV 1阳性外周血为 199...  (本文共5页) 阅读全文>>

《生命的化学》2014年04期
生命的化学

泡沫病毒Gag蛋白的研究进展

泡沫病毒(foamy virus or spumavirus,FV)在分类上属逆转录病毒科(Retroviridae)泡沫病毒属(Spumavirus)。因其感染细胞可诱导内质网水肿和细胞质空泡化,在光镜下可看到大量空泡而得名。原型泡沫病毒(prototype foamy virus,PFV)是70年代从非洲肯尼亚一位鼻咽癌病人的组织培养物中分离得到的,最初命名为人泡沫病毒(humanfoamy virus,HFV),后来发现它和黑猩猩的猴泡沫病毒(simian foamy virus,SFV)有大量的同源序列,因此重新命名为原型泡沫病毒[1]。泡沫病毒有着广泛的宿主范围,基因组较大且无明显致病性等特性,这使得泡沫病毒作为一种新型的基因治疗载体,成为研究热点。近年来的研究发现其基因组成分、生活周期以及基因表达调控方式与传统的逆转录病毒有较大差别[2]。泡沫病毒Gag蛋白在病毒复制周期中有着至关重要的作用,因此对Gag蛋白结构功能...  (本文共6页) 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

山羊地方性鼻内肿瘤病毒陕西株序列分析及Gag和Su蛋白多克隆抗体的制备

羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)是羊地方性鼻内腺瘤(Enzootic nasal adenocarcinoma,ENA)的病原,可导致鼻甲骨筛骨上皮细胞的致瘤性转化。ENTV-1感染绵羊,ENTV-2感染山羊。因为缺少感染性分子克隆和无法培养病毒,ENTV在ENA发病机理中的作用尚未被完全揭示,GenBank中收录的ENTV全基因组也很少。在中国该病主要流行于内蒙古、湖南、四川、重庆、陕西等多个省市。为了深入研究ENTV,本研究对陕西省疑似ENA的山羊进行诊断,建立了RT-PCR检测方法,对陕西省不同地区的4株ENTV-2进行全基因分段克隆和序列分析,并制备了Gag和Su蛋白多克隆抗体,获得如下研究结果:1.对陕西省4个山羊养殖场发生肿瘤的羊通过临床症状观察,剖检和病理学观察,确定该病为山羊地方性鼻内腺瘤。建立ENTV-2的RT-PCR方法,对临床样品进行检测,阳性率为15....  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

《病毒学报》2000年04期
病毒学报

马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗gag基因的序列测定及分析

马传染性贫血 (马传贫 )病毒 (equineinfectiousanemiavirus ,EIAV)属反转录病毒科慢病毒属 ,是马传染性贫血 (equineinfectiousanemia ,EIA)的病原。该病自 184 3年在法国首次报道以来[1] ,在世界各养马国家广泛分布 ,是马、驴、骡等马属动物的烈性传染病之一。EIAV与艾滋病病原HIV 1同属于慢病毒 ,在基因组结构、病毒生活周期、抗原漂移性及免疫机理等方面极其相似。马传贫驴白细胞弱毒疫苗是我国科学工作者于 70年代研制的第一个慢病毒疫苗 ,已成功地应用于临床马传贫的免疫预防[2 ] 。马传贫疫苗的研制成功 ,从实践上开创了慢病毒免疫预防的先例。特别是在艾滋病给人类健康造成极大威胁的今天 ,从分子水平和理论上揭示马传贫疫苗的减毒机理 ,对包括HIV在内的其他人及动物慢病毒疫苗的研究无疑具有重要的参考价值和理论意义。EIAV前病毒基因组包括 3个主要结构基因gag、...  (本文共4页) 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

猪内源性反转录病毒gag基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据已发表的PERV gag基因核苷酸序列,设计并合成用于扩增PERV gag基因的引物,并在引物5′端分别引入Sal Ⅰ、Not Ⅰ酶切位点。从中国实验小型猪外周血淋巴细胞RNA中扩增gag基因。将PCR产物与pGEM-T载体连接,常规方法转化E.coli JM109感受态细胞,挑白色菌落,经过夜培养后小量提取质粒,NotⅠ、SalⅠ双酶切鉴定、筛选阳性克隆重组子。对阳性克隆,用ABI377自动序列分析仪进行全序列测定,用DNASIS和NCBI的BLAST2.0程序进行同源性比较。序列分析结果表明,所克隆的gag基因全长1 572bp,编码524个氨基酸;与其它来源的同源序列相比较,仅有三个核苷酸存在变异。分别是位于N端第1054位的C→T,位于N端第1180位的A→G,及位于N端第1560位的A→C的变异。为进一步探讨PERV gag蛋白的特性与功能。提取PERV gag重组质粒pGEM-gag,Not Ⅰ、Sal Ⅰ双酶切...  (本文共59页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国实用眼科杂志》1981年00期
中国实用眼科杂志

白细胞介素对眶成纤维细胞GAG生成的刺激作用

甲状腺相关眼病(ThyroidAssociatedOphthalmopathy,TAO)是眼科常见疾病,其发病率占眼眶病的首位,发病机制尚不清楚〔1〕。TAO主要病理改变是眶纤维结缔组织增生,组织间糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAG)聚积。GAG是一种亲水性大分子粘多糖,可引起组织水肿,主要由成纤维细胞(Fibroblasts,Fb)产生。国外已有文献报告细胞因子刺激成纤维细胞大量产生GAG〔2〕。我们将白细胞介素-1(IL-1),白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-6(IL-6)与体外培养的眶成纤维细胞共同孵育,观察其对GAG生成的刺激作用。材料与方法一、材料1.眶成纤维细胞:利用组织培养技术得到眶成纤维细胞株。其中TAO病人5例,正常者5例,正常者均为眶海绵状血管瘤手术时所取的结缔组织进行细胞培养所得。2.白细胞介素-1,白细胞介素-2,白细胞介素-6购于中国军事医学科学院。3.使用仪器及主要试剂:双...  (本文共3页) 阅读全文>>