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新型mucA基因突变的铜绿假单胞菌生物被膜的形成和藻酸盐相关基因表达的研究

目的确定黏液型铜绿假单胞菌PA17的mucA基因突变位点,研究藻酸盐合成相关基因在其生物被膜形成过程中的表达,并观察PA17生物被膜形成过程和形态。方法PCR方法扩增铜绿假单胞菌PA17的mucA基因全长并测序;改良平板培养法建立PA17的生物被膜模型,半定量RT-PCR测定生物被膜形成24h、3d、6d时藻酸盐合成相关基因algD、algU和alg  (本文共4页) 阅读全文>>

华中科技大学
华中科技大学

新型突变mucA基因编码蛋白的亚细胞定位、对生物被膜形成的影响及其机制的探讨

目的:探讨新型突变mucA56基因编码蛋白的亚细胞定位,并观察mucA56基因对生物被膜形成的影响,探讨mucA56基因影响生物被膜形成的机制。方法:采用Ncol和XbaI酶切位点的引物,从pMD18T-HR扩增mucA56基因的全长克隆到pMF54构建pCAQ56, XbaI单酶切pPH07载体中的碱性磷酸酶基因全长插入到pCAQ56的开放阅读框中,构建mucA56-phoA融合表达载体pCAQ57。对构建的pCAQ57载体进行PCR鉴定及序列测定,并使用碱性磷酸酶抗体验证融合蛋白的表达。将pCAQ57、pKMG170阴性对照质粒)、pKMG176(阳性对照质粒)分别转化大肠杆菌和铜绿假单胞菌,划线接种在含有碱性磷酸酶作用底物BCIP的LB琼脂平板上,观察各自菌落颜色以评估碱性磷酸酶活性;从pGFPuv质粒中扩增表达增强型绿色荧光蛋白的基因全长,克隆入大肠杆菌-铜绿假单胞菌穿梭质粒(pUCP20),构建一个稳定的铜绿假单胞菌绿...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国组织化学与细胞化学杂志》2011年05期
中国组织化学与细胞化学杂志

野生型铜绿假单胞菌和新型mucA突变铜绿假单胞菌生物膜形成的动态观察

目的观察新型mucA突变的粘液型菌株PA17和野生型菌株PAO1生物膜(biofilm,BF)形成的动态过程,并比较2株菌生物膜形成过程的差异。方法 SYTO9/PI荧光探针标记PAO1和PA17,体外建立1d,3d,5d,9d时间点PAO1及PA17的BF模型,激光共聚焦显微镜(CLSM)观察两株菌BF动态形成的过程。结果通...  (本文共4页) 阅读全文>>

《华中科技大学学报(医学版)》2009年05期
华中科技大学学报(医学版)

同源重组构建铜绿假单胞菌新的mucA基因突变菌株

目的构建铜绿假单胞菌新的mucA基因突变菌株,为研究新突变的mucA基因功能提供实验菌株。方法首先将含新突变的mucA基因同源片段与自杀质粒pEX100T相连接,构建质粒pEXmucA56,再将质粒pEXmucA56转化入大肠埃希菌DH5α,与铜绿假单胞菌标准菌株PAO1共培养进行同源重组,并用羧苄青霉素(Carbenici...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中华医院感染学杂志》2008年09期
中华医院感染学杂志

含新的mucA突变基因黏液型铜绿假单胞菌生物被膜特性的研究

目的研究含新的mucA突变基因黏液型铜绿假单胞菌(PAE17)在不同条件下形成的生物被膜,以了解新的mucA突变基因对铜绿假单胞菌生物被膜的影响。方法采用PIA平板法鉴定3种铜绿假单胞菌的黏液表型,色氨酸反应法测定其胞外多糖蛋白复合物的合成量;刚果红染色法和静态培养法分别观察其在固态及液态条件下形成的生物被膜;采用电转化...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中南大学学报(医学版)》2009年12期
中南大学学报(医学版)

临床分离铜绿假单胞菌mucA基因突变与藻酸盐合成的关系

目的:探讨临床分离铜绿假单胞菌mucA基因突变情况及其与菌落形态、藻酸盐合成之间关系。方法:对58株临床分离铜绿假单胞菌(50株黏液型菌株和8株非黏液型菌株)mucA基因进行PCR-SSCP及DNA序列分析,与GenBank中野生型铜绿假单胞菌PAO1标准序列进行比对,并用比色法测定58株细菌藻酸...  (本文共6页) 阅读全文>>