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提高多药耐药基因导入人CD_(34)~+细胞转导效率的探讨

多药耐药基因 (mdr1)编码相对分子质量为 170× 10 3 的跨膜糖蛋白 (P170 ) ,该蛋白作为依赖ATP能量的溢出泵 ,可将进入细胞内的多种药物如紫杉醇 (商品名Taxol)、阿霉素等排出细胞外[1] 。正常骨髓造血细胞P170表达量极低 ,将外源性mdr1基因导入其中 ,肿瘤化疗时可起到保护造血细胞的目的提高基因转导效率是转基因治疗成功的关键。我们对影响逆转录病毒载体介导的mdr1基因导入人CD3 4+ 细胞的一些因素进行探讨 ,试图找出较适宜的转导条件 ,以提高转导效率 ,为造血细胞基因治疗打下基础。材料和方法1 包装细胞的建立及病毒上清的制备 用脂质体介导转染法 ,将含人全长mdr1cDNA的重组逆转录病毒载体SF mdr1(由德国Baum博士赠送 )导入双嗜性包装细胞GP envAM12 ,用 6 0ng ml秋水仙素筛选获得抗性克隆。收集其培养上清 ,感染同样方法获得的单嗜性包装细胞GP E86 ,收集G...  (本文共3页) 阅读全文>>