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免疫印迹法测定乳腺肿瘤患者胸苷激酶

196 0年胸腺嘧啶核苷激酶 (TK)被证实是胸腺嘧啶核苷 (简称胸苷 )合成DNA的关键酶 ,随后的研究表明[1] ,TK有两种同工酶 ,为细胞质TK(TK1)和线粒体TK(TK2 ) ,其中TK1与细胞分裂密切相关 ,在细胞分裂G1期含量比较低 ,到S期后逐渐升高 ,至G2期达到最高 ,因此 ,编码TK1的mRNA及其表达的蛋白质也就成为细胞增生的标志物。目前 ,实验室主要采用放射免疫法 (RIA)检测血清TK的酶活性 ,由于12 5I标记脱氧尿嘧啶半衰期短 ,且具有放射性污染 ,难于在临床上推广。 1996年He等[2 ] 报道利用抗 TK1多克隆抗体 ,建立westernblotting检测人TK1。在此基础上 ,我们利用抗 TK1单克隆抗体 ,建立点免疫印迹发光法检测乳腺肿瘤患者血清中TK1,可用于乳腺肿瘤诊断、疗效观察、预后及肿瘤病理机制的研究 ,在鉴定良、恶性乳腺肿瘤取得了良好效果 ,现初步报告如下。材料和方法...  (本文共3页) 阅读全文>>

《传染病信息》2000年04期
传染病信息

人类免疫缺陷病毒1型感染病人外周血单核细胞的细胞胸苷激酶1活性:新的治疗标志

细胞胞质胸昔激酶1可以加快细胞内抗人类免疫缺陷病毒1型核昔类似物(叠氮胸昔和双脱氧胸昔)磷酸化为相应单磷酸形式的速度。对人类免疫缺陷病毒1型感染病人进行含上述化合物之一的联合治疗一年以上后,用放射测定法测定其外周血单核细胞的细胞胸昔激酶1的酶活性。结果发现,人类免疫缺陷病毒1型感染病人外周血单核细胞的细胞胸昔激酶1活性与CD礴细胞计数有关(r...  (本文共1页) 阅读全文>>

《安徽医学》2016年04期
安徽医学

胸苷激酶1在上皮性卵巢癌诊断中的应用

卵巢癌是指发生于卵巢表面体腔上皮和其下方卵巢间质的恶性肿瘤,其发病率占妇女生殖系统恶性肿瘤的20%,仅次于子宫颈癌和子宫体癌,而卵巢上皮性癌(epithelial ovarian cancer,EOC)占卵巢恶性肿瘤的85%~90%,其临床晚期(Ⅲ、Ⅳ期)病死率高,是目前威胁妇女生命最严重的恶性肿瘤之一。如何提高术前诊断率对于指导治疗和提高预后具有重要意义。近些年,胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)成为肿瘤标志物的研究热点,其是细胞周期S期(合成期)的特殊酶,与细胞增殖状态密切相关,在肿瘤患者中高表达,故而能通过患者血清浓度来评估患者占位的良恶性。本文通过测定卵巢占位患者血清TKl浓度与术后病理和临床分期对比,评价其在EOC患者的诊断价值。1资料与方法1.1一般资料选取2014年1月至2015年10月在安徽医科大学第一附属医院妇产科就诊的上皮性卵巢癌患者100例,另选取门诊女性健康体检者33例作为对照组,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国误诊学杂志》2009年16期
中国误诊学杂志

血清胸苷激酶对癌前病变的早期风险复查的初步探讨

现对我院最近0.5 a来油田及大庆职工体检并且资料完整的胸苷激酶的结果进行分析如下。1资料与方法1.1一般资料正常职工体检7 800例,男5 600例,女2 200例,年龄40~55岁。按照胸苷激酶1设定风险值为2pm为界,分为两组即高于2pm为阳性组,其余为阴性组。1.2方法采用华瑞同康生物技术有限公司生产的胸苷激酶诊断试剂盒,运用点染免疫发光进行检测,操做一定要按照试剂合的说明严格操做。空腹采血,离心。将含有胸苷激酶抗原的血清3μl滴在硝酸纤维膜固相载体上,然后依次加入胸苷激酶1—鸡EgY的一抗以及生物素化一抗鸡EgY的二抗。胸苷激酶抗原与一抗直接反应,产生抗原一抗体复合物再与相应的二抗,然后再加入链霉,最终形成抗原一抗一二抗一酶复合物,通过检测辣根二氧化物酶与化学发光剂反应产生的信号,应用化学发光成像分析系统来计算胸苷激酶的浓度。2结果在7 800例体检人员中,有54例TK 1值高于2pm。54例中我们有跟踪调查,其中有1...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中国老年学杂志》2005年01期
中国老年学杂志

人胸苷激酶单克隆抗体的制备

人胸苷激酶(humanthymidinekinase,hTK)是真核细胞DNA合成过程中的激酶,其表达主要在细胞周期的S期,在G2期达高峰。hTK在生长旺盛的细胞中表达升高,特别是肿瘤细胞〔1~4〕,因此,人体液中hTK的水平可以间接地反映体内是否有增生活跃的细胞,hTK的水平可以判断肿瘤的发生、发展和预后。我们用DNA重组技术克隆了hTK基因,并且在大肠杆菌中表达了hTK〔5,6〕,本文报道用hTK免疫Balb/C小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经HAT选择培养和克隆化等过程制备出hTK的单克隆抗体。目前国内尚无此类报道。1 材料和方法11 材料 IMDM培养基、HAT和HT,福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂(GIBCO),hTK抗体IgY和hTK免疫组化试剂盒(深圳华瑞同康生物技术有限公司);碱性磷酸酶标记的牛抗IgY抗体(AP抗IgY,SantaCruz);辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(HRP抗小鼠IgG,SantaC...  (本文共2页) 阅读全文>>

《昆明医学院学报》2002年01期
昆明医学院学报

构建单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因真核表达载体

单纯庖疹病毒 (herpessimplexvirus,HSV)属于庖疹病毒科a亚科 ,是双链线状DNA病毒 ,其基因组DNA长 1 5 2 2 60bp ,编码约 70种蛋白质[1 ] .HSV -Ⅱ胸苷激酶 (thymidinekinase ,TK)基因为HSV的早期表达基因 .TK基因治疗肿瘤的基本原理 :(l)自杀效应 :TK基因表达产物可将无毒的药物前体核苷类似物如羟甲基无环鸟苷 (GCV)磷酸化 ,使之在较低的浓度抑制细胞DNA聚合酶并掺入到细胞DNA中 ,导致被转染的细胞DNA合成终止而死亡 .( 2 )“旁观者效应”(by -standeref fect) :即使仅有 1 0 %的肿瘤细胞转入TK基因 ,当加入GCV后 ,其余 90 %的肿瘤细胞由于细胞间的缝隙连接和信号传递也将被杀死 .“旁观者效应”极大地提高了TK基因抗肿瘤活性 .由此所发展起来的HSV -TK -GCV自杀基因体系已成为恶性肿瘤基因治疗中较为...  (本文共5页) 阅读全文>>