分享到:

腰椎间盘细胞的培养及形态学观察

腰椎间盘退变是引起腰腿痛的重要原因。其发生机理仍不十分清楚。随着年龄的增长和腰椎间盘的退变,椎间盘的生化成分出现显著改变[1]。目前的研究结果提示:这一变化不仅是椎间盘营养来源匮乏的结果,也可能与椎间盘的生物学特性有关。这一变化的彻底揭示,尚有待于腰椎间盘细胞的细胞生物学研究[2]。为此,我们进行了人胚及正常成人腰椎间盘细胞培养的工作,以探讨椎间盘细胞的生物学行为及影响因素,为今后以分子生物学方法对细胞的基因表达和调控进行研究奠定基础。对象和方法一、对象采用保胎失败、自然流产胎儿3例,分别为3、4、6个月,流产1小时内取腰椎间盘。成人27岁1例,脑外伤死亡4小时内取腰椎间盘。二、方法例1为4个月胚胎,将整个椎间盘剪碎进行培养,未分离纤维环、髓核及软骨终板。例2为3个月胚胎,分离髓核、软骨终板及纤维环内、外层分别进行培养。其余两例组织分离方法同第2例。将取下的组织分别浸于DHanks液中,剪成碎块。于37℃下,以质量分数为02...  (本文共3页) 阅读全文>>

北京中医药大学
北京中医药大学

静水压下芹菜素对人椎间盘髓核细胞凋亡及基质代谢的影响

研究背景由于腰椎间盘退变导致的腰椎间盘突出、腰椎管狭窄等疾病是骨科门诊的常见病。随着我国老龄化社会的到来,腰椎退行性疾患对人民健康已构成威胁并严重影响患者的生活质量。随着机械化及电脑办公的普及,以坐姿进行工作的人越来越多,由此导致的腰椎间盘突出症患者呈上升趋势,且发病趋于年轻化,因此腰椎间盘退行性病变已成为当今研究的热点问题。椎间盘退变已成为困扰骨科医生的问题之一,椎间盘一旦退变难以逆转。目前的治疗方法有保守治疗和手术治疗,手术在一定程度上缓解了临床症状,但仍未阻断椎间盘的退变进程。而且脊柱内固定手术会导致脊柱生物力学结构的改变,加速邻近节段椎间盘的退变,同时给患者在心理上和经济上带来严重的负担。因此,如何阻止或延缓腰椎间盘退变成为研究的焦点。研究目的探讨人髓核细胞在体外构建的静水压环境下,芹菜素(Apigenin, API)对其功能状态、凋亡率及基质金属蛋白酶MMP-3及其抑制因子TIMP-1的影响。研究芹菜素作为一种中药类一...  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

组织工程学椎间盘种子细胞三维培养的实验研究

目的:本实验拟建立人退变椎间盘立体培养的细胞模型,从形态学、组织学、细胞生物学等方面对比其与单层培养模型的差别,并对立体培养的椎间盘细胞的胶原进行检测,试图解决成人退变椎间盘的组织工程学的实施中种子细胞难于收集且难于成活的难题。方法:1、利用酶消化法对胎儿椎间盘和手术取出的病人退变椎间盘组织进行原代细胞培养,分为单层培养和立体培养两种培养方式,并根据病人的年龄进行分组。2、对不同组的单层、立体培养的椎间盘细胞进行形态学、组织学观察,在细胞生长过程中应用倒置相差显微镜进行观察;收集细胞进行超薄切片,利用透射电镜观察其亚超微结构;对细胞标本行Giemsa和HE染色,光镜观察,对比其形态学的不同。3、对不同组的单层、立体培养的椎间盘细胞进行细胞生物学的检测,包括细胞生长曲线、细胞接种存活率、增殖细胞核抗原检测、细胞生长活性、细胞周期、细胞凋亡等方面的检测,分别阐明单层培养和立体培养对于细胞生长的影响,并进行对比。4、对不同组的细胞进行...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国临床康复》2006年21期
中国临床康复

血小板衍生生长因子对体外培养人椎间盘细胞功能的影响

0引言血小板衍生生长因子是哺乳动物和人体中一种微量但具有多种生物学活性的多肽,在软骨形成和软骨自稳态调节中起关键作用。研究发现,血小板衍生生长因子能刺激软骨细胞分裂增殖,并可延缓及阻止多种体细胞的凋亡犤1,2犦,但有关血小板衍生生长因子对人椎间盘细胞凋亡、增殖及细胞外基质代谢的影响鲜有报道。本文主要通过体外培养人椎间盘细胞,观察不同浓度血小板衍生生长因子对椎间盘细胞凋亡、增殖及细胞外基质代谢的影响。1对象和方法设计:随机对照的验证性实验。单位:中国医科大学附属第二临床医院骨科和儿外科实验室。对象:实验于2003-05/2004-02在卫生部小儿先天畸形重点实验室完成。2003-05/12中国医科大学第一临床学院骨科施行脊柱侧凸前路松解术的患者8例,术前检查无代谢性软骨疾病。其中男4例,女4例;年龄12~17岁,平均15.2岁。术中取出椎间盘组织(患者知情同意)立即置入装有H A M F-12培养液的无菌瓶内带至实验室。设计、实施...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中华实验外科杂志》2004年07期
中华实验外科杂志

胰岛素样生长因子1抑制人椎间盘细胞凋亡及促进基质代谢的研究

胰岛素样生长因子1(IGF1)在软骨形成和软骨自稳态调节中起关键作用。有研究表明,IGF1能刺激软骨细胞分裂增殖,并可延缓及阻止多种体细胞的凋亡[1]。我们通过体外培养人椎间盘细胞,观察不同浓度胰岛素生长因子对椎间盘细胞凋亡、增殖及细胞外基质代谢的影响。一、材料与方法1.材料:取自8例施行脊柱侧凸前路松解术的患者,其中男4例,女4例,年龄12~17岁,平均15.2岁。2.椎间盘细胞原代培养及形态学观察:用倒置相差显微镜观察原代及传代培养的椎间盘细胞。3.IGF1对人椎间盘细胞凋亡及细胞外基质代谢的影响:Tunel法检测椎间盘细胞凋亡情况;收集细胞周围基质,用氯胺T法和Alcian法分别检测细胞培养液中羟脯氨酸及硫酸软骨素的含量。4.IGF1对人椎间盘细胞生长和增殖的影响:(1)MTT检测不同浓度IGF1对人椎间盘细胞生长和增殖的影响(2)流式细胞仪进行细胞周期分析,以增殖指数(PI)表示IGF1对椎间盘细胞分裂增殖的影响,PI=...  (本文共1页) 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

腰椎间盘退行性变发病机制及治疗的研究

目的腰椎间盘退行性变(简称退变)是引发腰背痛的主要原因,但目前腰椎间盘退变的确切机制尚不清楚。近年来有关细胞凋亡及凋亡相关基因在椎间盘退变的发生及进展中所起作用越来越受到人们重视。研究发现,细胞凋亡是退变椎间盘组织中细胞减少的主要因素,椎间盘退变与凋亡及由凋亡引起的基质代谢障碍有关。Fas基因为细胞凋亡基因,其基因产物Fas蛋白是一种细胞凋亡信号受体,当它与抗Fas单克隆抗体或Fas配体(Fas Ligand,FasL)特异性结合后,可以传导凋亡信号,诱导Fas所在细胞的凋亡。目前,Fas基因在关节软骨退变过程中所起作用的研究较多,而有关Fas基因在腰椎间盘退变过程中所起作用的研究鲜有报道,本研究应用逆转录PCR(RT-PCR)和western blot方法检测退变腰椎间盘组织中Fas、FasL的表达,通过抗Fas抗体诱导椎间盘细胞凋亡以了解Fas系统在腰椎间盘退变发生、发展中的作用。胰岛素样生长因子-1(Insulin-lik...  (本文共73页) 本文目录 | 阅读全文>>

《实用骨科杂志》2011年02期
实用骨科杂志

人胚椎间盘细胞体外培养模型的建立和鉴定

腰椎间盘退变不仅是椎间盘营养来源匮乏的结果,也可能与椎间盘的生物学特性有关[1]。这一变化的彻底揭示尚有待于腰椎间盘细胞的细胞生物学研究。而构建椎间盘细胞模型是研究的基础和关键。为此,我们进行了人胚腰椎间盘细胞体外培养,并探讨椎间盘细胞的生物学特性,为今后以分子生物学方法对细胞的基因表达和调控进行研究奠定基础。1资料与方法1.1细胞模型建立在知情同意和伦理学委员会批准情况下,采用保胎失败、自然流产的胎儿4例(14~18周),流产4h内送达实验室。取出椎间盘组织,D-H anks液冲洗后。将椎间盘组织中的外层纤维环切除,保留内层纤维环和髓核组织。将组织剪至约1 mm3大小碎块后放入T 25培养瓶中,加入含0.2%胶原酶和10%血清的改良E ag le培养基(du lbecco′s m od ification of eag le′s m ed ium du lbecco/F-12,DM EM/F 12)5~10 mL,放入培养箱中...  (本文共4页) 阅读全文>>