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c-erbB-2癌基因特异性核酶的体外切割作用

cerbB2原癌基因的产物是具有内在酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白,其在某些肿瘤细胞间的信号传递中起着重要作用。已发现该基因的扩增或蛋白的过度表达与乳腺癌、胃癌等多种肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关[1,2]。具有特异性切割核酸分子作用的核酶(ribozyme)自发现后一直倍受重视,成为病毒性疾病和肿瘤基因治疗的新武器[3,4]。我们选择了cerbB2mRNA作为靶分子,按照计算机辅助设计的cerbB2特异性核酶RZ1模型[5],在体外合成并克隆了RZ1核酶基因及其底物基因的体外转录载体,探讨了核酶RZ1对cerbB2mRNA的体外切割作用。材料与方法1材料:riboprobegeminisystemI为Promega公司产品,[α32P]UTP购自北京福瑞公司,含有cerbB2基因全长的质粒pSVcerbB2由美国Anderson癌症研究中心的Hung教授惠赠。2核酶设计与合成:先设计出RZ1的基因...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国肿瘤生物治疗杂志》1997年03期
中国肿瘤生物治疗杂志

c-erbB-2特异性ribozyme的体外切割作用

c-erbKZ原癌基因的产物是跨膜生长因子受体的一种,具有内在酪氨激酶活性,在肿瘤细胞生长信号传递中起着重要的作用。已发现该基因的扩增或蛋白的过度表达与许多腺癌的发生、发展、转移及预后密切相关。核酶(m卜qm巴)因可直接切割靶RNA井能够反复利用,而在阻断有害基因的表达方面比反义核酸更有效。本文在计算机辅助下设计了C.ethKZ特异性核酶并观察f它对靶基因体外转录产物的切割作用。主要内容如下:1.以人癌基因。ethKZInRNA为靶RNA,用计算机分析显示c.ethKZInRNA第2428-D76位和第282D-3(X位之间的二级结构相对稳定,可成为核酶攻击理想的区域。该区第2438、2477、2751位是核酶的最佳切割位点【2在计算机辅助下,根据锤头装结构设计了针对这三个位点相应的三个核酶,分别称为BZI、RZZ、RZ3。合成了核酶RZI基因,测序证实合成的核酶基因序列正确;3.构建并鉴定了RZI的体外转录载体“皿旧Z-RZI...  (本文共1页) 阅读全文>>