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应用免疫磁珠-PCR技术分选及检测尿中的膀胱癌细胞

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,复发率高,早期诊断及复发监测对于临床治疗方案的选择及预后的判断均有重要意义。目前临床上一般采用B超,膀胱镜,尿脱落细胞学等检测方法,对膀胱癌的早期诊断,敏感性仍不理想。因此建立一种通过尿液能快速,准确,灵敏地检测出早期膀胱癌的方法具有重要的临床价值。现已发现部份早期膀胱癌患者的肿瘤细胞染色体微卫星不稳定性改变,可作为肿瘤细胞的克隆标志,通过PCR检测患者尿脱落细胞可望对膀胱癌进行早期诊断及复发监测[1],但尿液中往往混有一些正常脱落上皮细胞及白细胞,影响染色体微卫星不稳定性分析。我们应用抗人膀胱癌单克隆抗体与磁珠结合,制备出免疫磁珠(BDI-1-IMB),建立了免疫磁珠PCR快速分选及检测尿中微量膀胱癌细胞的方法,为其临床运用奠定基础。1材料与方法1.1动物及细胞株BALB/c小鼠由北京医科大学动物中心提供,EJ为人膀胱癌细胞株,LOVO为人直肠癌细胞株,抗人膀胱癌杂交瘤细胞均由北京医科大学免疫...  (本文共3页) 阅读全文>>

安徽医科大学
安徽医科大学

免疫磁珠捕获技术结合环介导恒温扩增技术快速检测鼠疫耶尔森氏菌的研究

鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)引起的一种烈性传染病,其具有传染性强、病死率高、传播速度快、自然疫源性等诸多特点。人类历史上,曾经发生过三次鼠疫大流行,引起数以亿计人死亡,给人类带来过沉重灾难。在我国,鼠疫被列为甲类传染病。随着现代医学技术的不断发展,鼠疫疫情虽已得到有效控制,但近年来,动物间鼠疫的流行区域不断扩大,人间鼠疫病例呈上升态势。与此同时,鼠疫菌作为一种典型的生物战剂及生物恐怖制剂,时刻威胁着人类的安全。由此可见,鼠疫的监控对人类健康安全、经济发展和社会稳定具有重要意义。众所周知,对鼠疫菌快速、有效的检测是控制其传染的重要手段。目前,对鼠疫菌的常规检测主要包括细菌学检测、免疫学检测、分子生物学检测等。细菌学检测一般分四步进行——显微镜镜检、细菌培养、鼠疫噬菌体裂解实验、动物实验。该方法耗时长、需要大量人力物力,不适用于鼠疫菌大量筛查及现场检测。分子生物学检测,即通过体外扩增特异性的核酸片段实现对鼠疫菌的检测,该...  (本文共129页) 本文目录 | 阅读全文>>

《食品科学》2013年23期
食品科学

纳米免疫磁珠富集单核增生李斯特菌

单核细胞增生李斯特氏菌简称单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM),是李斯特菌属中最重要的人类食源性病原菌[1-2]。肉、蛋、海产品、乳制品、蔬菜等食品均是LM的主要污染源,人被LM感染后死亡率可达30%,在新生婴幼儿和免疫力低下的人群中死亡率则高达70%。该菌在4℃冰箱保存的食物中仍能生长繁殖,使其成为冷藏食品中主要的病原菌之一[3]。按照我国国标法规定的检测方法,完成LM初筛过程需72~96h[4]。如此长的检测周期给企业、国家相关部门对日常产品质量监测及LM中毒事件进行快速反馈带来了一定困难。免疫学检测是实现LM快速筛查的有效手段之一[5]。比较经典的流程包括前期增菌、免疫磁珠高效富集及胶体金免疫层析试纸条或ELISA检测等步骤。其中提高免疫磁珠富集效率对缩短LM检出时间具有较大的贡献。免疫磁分离是基于抗原、抗体免疫学反应,利用超顺磁粒子在磁场存在时能迅速磁化并聚集、磁场消失后可重新分散于溶液的...  (本文共4页) 阅读全文>>

《上海农业学报》2010年04期
上海农业学报

免疫磁珠结合RT-PCR检测黄瓜绿斑驳花叶病毒

我国口岸每年进口大量蔬菜、花卉种子,以满足国内农业生产的需求。以上海口岸为例,2008年进口223批次,390 743 .644 kg;2009年进口269批次,213 502.695 kg[,,,〕。随着这些蔬菜和花卉等商用植物种子国际间的调运,大大加强了重大检疫性有害生物尤其是病毒传入我国的风险,‘〕。由于进境植物种子的带毒率非常低,传统的检测方法不仅耗时长,而且灵敏度较低,极有可能造成漏检现象,给我国的农林业生产带来巨大威胁,因此研究建立快速检测种传病毒的方法具有重要意义。黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)主要分布在欧洲、印度和日本等地,近几年由于从国外引进葫芦科种子,导致我国辽宁等地的西甜瓜发生了黄瓜绿斑驳花叶病毒的危害,并有扩散蔓延的趋势仁5一’〕。目前,针对黄瓜绿斑驳花叶病毒,主要采用nAS一ELISA、RT一pCR和免疫捕获RT一pCR(Immunocapture RT-PCR,Ic一PT一PCR)[s一’“〕等方法...  (本文共5页) 阅读全文>>

《海洋与湖沼》2015年06期
海洋与湖沼

基于纳米免疫磁珠快速富集4种海洋致病性弧菌的研究

副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticurs)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和灿烂弧菌(Vibrio splendidus)均属于革兰氏阴性、兼性厌氧、嗜盐性弧菌,主要分布于海水、盐湖等水域环境以及鱼虾、蟹贝类等海产品中,是引起海洋生物发生细菌性疾病的首要原因(Baker-Austin et al,2010;刘瑞等,2011;赵永刚等,2013;Tanguy et al,2013;高磊等,2014;Sun et al,2014)。目前,直接检测海洋中的致病性弧菌,往往由于目标菌太少而难以检测,所以一般都采用先增菌后检测的方式,而传统增菌方法不仅费时,且灵敏度低(赵玲等,2013)。为了加快对以上致病弧菌的检测速度及提高检测限,采用高效、简便的免疫磁珠法对样品进行分离富集,该法作为一种前处理手段,与其它检测方法结合使用,可大大缩短检测时间,提高检测限(苏晨...  (本文共9页) 阅读全文>>

《中国现代医生》2012年20期
中国现代医生

免疫磁珠分选系统在分离肝癌干细胞中的应用

肝癌干细胞的发现为肝癌研究打开了新的思路。肝癌干细胞的分离纯化对肝癌干细胞的进一步研究和探索至关重要[1]。EpCAM是最近发现的一种新的肝癌干细胞标志物,分子量为40 kD的跨膜糖蛋白,可通过促进细胞增殖、免疫逃逸等机制促成肿瘤发生,与肿瘤迁移和侵袭性密切相关[2,3]。目前肝癌干细胞的分离多采用流式分选法,虽然可成功从肝癌细胞中分离、纯化出肿瘤干细胞。但其耗时长,且分选后的细胞状态可能不佳。我们采用了操作方法简便的全自动免疫磁珠分选系统对EpCAM阳性肝癌细胞亚群进行分选并分析。1资料与方法1.1一般资料1.1.1细胞来源肝癌细胞系Huh-7由第四军医大学肝胆外科实验室惠赠。1.1.2试剂细胞培养液为含10%胎牛血清(Gibco公司)的DMEM(Solarbio公司);FITC标记的鼠抗人EpCAM单克隆抗体、免疫磁珠标记的鼠抗人EpCAM单克隆抗体均购自德国Miltenyi公司;FITC标记的羊抗鼠IgG抗体购自北京中杉生...  (本文共2页) 阅读全文>>