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含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅴ.IFN-γ基因真核表达重组质粒的构建及其在DNA免疫中基因佐剂的作用

在用各种不同的免疫材料接种动物的过程中,佐剂具有增强免疫应答的重要作用。DNA免疫研究发现,以细胞因子为基因佐剂(geneticadjuvants)的DNA疫苗可几十倍甚至上百倍的提高其免疫原性[1]。近年的研究表明,细胞因子在弓形虫感染免疫调节网络中起重要作用[2]。IFN-γ(干扰素-γ)是抗弓形虫免疫中起主导作用的细胞因子,在急、慢性感染中均发挥重要保护性,作用并有可能是弓形虫速殖子与缓殖子期互相转换的“开关”[3]。本文将IFN-γ基因定向插入真核表达载体pcDNA3,构建了PC-IFNγ重组质粒,以该重组质粒作为基因佐剂,与含弓形虫棒状体蛋白1(Rhoptryprotein1,ROP1)基因的pcROP1重组质粒DNA共同免疫小鼠,以观察基因佐剂的免疫增强功能。1 材料和方法1.1 材料1.1.1 含IFNγ基因片段重组质粒pCMPIFN,由中山医科大学闵军博士惠赠;pc-ROP1重组质粒由本室构建[4]。1.1.2 ...  (本文共4页) 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

核酸疫苗的基因佐剂研究

DNA 疫苗又称核酸疫苗,作为一种新型疫苗,DNA疫苗与传统疫苗相比有着明显的优势,如易于生产,稳定性强,成本低廉等,并可同时诱导体液免疫和细胞免疫,但DNA疫苗的免疫效果在不同动物个体中差异较大,有些疫苗在小个体的动物中免疫和保护效果较好,而在大个体动物中效果较差,尤其是在大型动物和人类中,影响了它的实际应用。如何增强DNA疫苗的免疫反应成为当前研究的热点和难点。我们以HBV DNA疫苗作为模型抗原,选择结核分支杆菌的热休克蛋白65、金黄色葡萄球菌肠毒素A和人胸腺素α原基因作为HBV DNA疫苗的佐剂,进行DNA疫苗免疫佐剂的研究。本研究克隆了HBV的preS2S基因、结核分支杆菌的热休克蛋白65、金黄色葡萄球菌肠毒素A和人胸腺素α原基因,构建了三种单独表达的佐剂质粒:pHSP65、pmSEA、pThyα;三种融合表达的佐剂-抗原质粒:pHSP65/HBVs2s、pmSEA/HBVs2s、pThyα/HBVs2s;以及单独的模...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《现代肿瘤医学》2007年06期
现代肿瘤医学

含IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞功能的影响

近年来,基于肿瘤特异性抗原的免疫治疗可以启动以肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)反应为主的抗肿瘤效应,有效打击肿瘤,防止转移复发且不伤及无关组织。因其抗肿瘤特异性和免疫记忆性是其它方法所不能比拟的,故在肿瘤综合治疗中显示出很好的应用前景[1]。另外有研究发现IL-15是一种与IL-2有许多功能重叠的细胞因子,具有明显的抗瘤效应,并且综合指数高于IL-2,因此在肿瘤免疫中逐渐受到重视[2~6]。进一步研究提示,IL-15可以上调T细胞Bcl-2和Bcl-xl的表达,增强效应细胞抗凋亡能力,诱导出长效的抗原特异性的记忆性CTL[7]。因此,本研究根据上述发现,构建了含有小鼠IL-15基因佐剂的肿瘤疫苗,分析IL-15对肿瘤疫苗所诱导的CTL的功能影响。1材料和方法1.1材料构建含有小鼠IL-15cDNA的肿瘤疫苗,肿瘤疫苗中含有来源于肿瘤抗原survivin的H2-kd限制性CT...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册)》2004年01期
国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册)

由病毒GM-CSF转基因佐剂增强BCG的免疫原性

现今的卡介苗 ( BCG)不能有效控制全球结核病流行表明急需改良 BCG的配方。作者用新型细胞因子佐剂配方来增强 BCG的免疫原性 ,这种佐剂配方是基于在病毒启动子控制下的复制缺陷型腺病毒载体来表达粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 ( GM- CSF)转基因 ,该系统可在体内产生持续时间较长但又具自限性的 GM- CSF( Ad GM- CSF)水平。本文研究了此种佐剂对 BCG接种的影响。  作者将 6~ 8周龄 BALB/ c雌鼠分成 4组 ,分别皮下接种 0 .5× 1 0 6 CFU BCG/0 .1× 1 0 9PFU Ad GM- CSF、 PBS、 BCG或BCG/ Add1 70 - 3(无转基因的腺病毒载体 )。免疫后取脾及髂骨下淋巴结分离淋巴细胞 ,经体外结核杆菌抗原刺激后 ,用 EL ISPOT法检测释放 γ干扰素 ( IFN...  (本文共2页) 阅读全文>>

《护理实践与研究》2010年06期
护理实践与研究

IL-2、IFN-γ和GM-CSF基因佐剂对pcDNA3/MDC-VP1 DNA疫苗免疫作用的影响

柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus group B type3,CVB3)是引起人类病毒性心肌炎的主要病原体。VP1是CVB3主要的衣壳蛋白,具有较强的免疫原性。用编码VP1的DNA疫苗免疫小鼠后虽可诱导机体产生中和抗体,但效价较低,不能有效阻止致死量CVB3感染。巨噬细胞源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)能趋化巨噬细胞、树突细胞和Th2细胞等。本室前期将MDC与CVB3VP1基因融合,构建成融合DNA疫苗pcDNA3/MDC-VP1,免疫小鼠后显著提高了中和抗体滴度,对致死量的CVB3攻击的保护率有一定程度的提高,但仍达不到实用程度[1]。2006年1~9月本研究将GM-CSF、IL-2和IFN-γ真核表达质粒分别与pcDNA3/MDC-VP1联合免疫小鼠,观察接种后的免疫效果并比较它们对疫苗的免疫增强作用,现将实验方法和结果报道如下。1材料与方法1.1质粒和实验动物p...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册)》2004年06期
国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册)

细胞因子基因佐剂对抗结核杆菌热休克蛋白65的DNA接种的影响

DNA疫苗能诱导体液免疫和强烈的细胞免疫。细胞因子似在效应 T细胞亚群产生及确定对 DNA疫苗的应答程度中起关键作用。作者以结核杆菌热休克蛋白 6 5( Hsp6 5)作为模型抗原 ,比较了几种不同的 Th1型细胞因子基因作为 DNA疫苗佐剂的效果。   6周龄雌性 C57BL / 6小鼠间隔 2周接种 3次 1 0 0 μl p CK- Hsp6 5和各重组细胞因子载体的 DNA混合液、空 p CK载体 (阴性对照组 )或 p CK- Hsp6 5和空 p CK载体的DNA混合液。用 EL ISA法检测 Hsp6 5特异性抗体滴度 ,用夹心 EL ISA检测γ干扰素(IFN- γ)表达量 ,用51 Cr释放法检测细胞毒性 T淋巴细胞 ( CTL )应答。在末次免疫后 4周 ,用结核杆菌 H37Rv进行攻击 ,2 0周后处死小鼠 ,将肺组织悬液稀释后涂于 M7H1 1琼脂板 ,培养后计算菌落数 ,比较各组预防结核杆菌的保护作用。...  (本文共2页) 阅读全文>>