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致肾盂肾炎大肠杆菌粘附素papG基因克隆及序列分析

肾盂肾炎是尿路感染最为严重的形式 ,大肠杆菌是其主要的致病菌。能引起肾盂肾炎的大肠杆菌80 %以上具有P菌毛 ,能引起P血型红细胞凝集 ,称为致肾盂肾炎大肠杆菌 (pyelonephriticE .colioruropathogenicE .coli,UPEC)。业已证明UPEC的染色体上带有 pap粘附基因群 ,由 11个基因组成。其中 papA编码构成P菌毛主体结构的主要菌毛蛋白亚单位 (PapA) ,papG编码P菌毛尖端真正的粘附素 (PapG) ,后者能与泌尿道上皮细胞表面受体P血型抗原物质 (Galα4Gal)结合〔1〕,是决定发病的关键。PapA依其抗原性不同分为 9~ 16个血清型(F7~ 16 ) ,PapG依其受体结合特异性不同分为三个型 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ ) 〔2 ,3〕。我们对国内临床分离的UP EC132的研究表明其P菌毛的PapA属于F13型〔4 ,5〕。本文进一步采用PCR克隆技术对该菌株的粘附素基因 ...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国卫生检验杂志》2009年02期
中国卫生检验杂志

尿道致病性大肠埃希菌papG基因的克隆和序列分析

尿道是最常见的细菌感染部位,85%以上的泌尿道感染由大肠埃希菌所致。这类大肠埃希菌具有很强的尿道粘膜上皮细胞粘附能力,称为尿道致病性大肠埃希菌(Uropathogen icE.col,i UPEC)[1,2]。位于UPEC表面的P菌毛与人体尿道上皮细胞表面的特异性受体结合,是其粘附致病的基础。介导P菌毛粘附作用的关键因子是位于菌毛尖端顶部的粘附素PapG。PapG依其受体结合特性不同分为I、II和III型,其中I、II型为人类特异性粘附素。由于I、II型PapG的粘附能力不同,所致疾病的严重程度也有区别。因此UPEC粘附素的特征性研究在其致病机制与免疫防治研究中意义重大[1~3]。本文采用PCR克隆技术对UPEC4030菌株的papG基因进行克隆、序列分析与鉴定,并与相关序列进行比较,以明确UP-EC4030PapG的粘附基因型,为进一步分析UPEC菌株的致病性提供理论依据。1材料与方法1.1菌株、质粒和培养基UPEC4030菌...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国人兽共患病杂志》2005年09期
中国人兽共患病杂志

PapG重组蛋白免疫血清抗UPEC粘附作用的研究

泌尿道感染是常见病与多发病,尿道致病性大肠埃希菌(UropathogenicE.coli,UPEC)是引起泌尿道感染的主要病原菌,占临床泌尿道感染病例的85%左右〔1〕。另有报道约有50%妇女在其一生的最后20年中都曾患过尿道感染,而且常常发展为败血症〔2〕。研究表明,UPEC所特有的P菌毛及其粘附素PapG是重要的致病因子,可与人泌尿道粘膜上皮细胞表面的特异性受体结合促使细菌粘附定植〔3〕。PapG在泌尿道感染中的致病作用已在雌性BALB/c小鼠和猴子试验中得到证实〔4-5〕。本研究在建立UPEC对Vero细胞感染模型的基础上,以纯化的GST-PapG重组蛋白免疫BALB/c小鼠并制备抗血清,通过抗血清的甘露糖抗性血凝抑制及其对Vero细胞细菌粘附作用的影响,初步探索PapG重组蛋白免疫血清在抵抗细菌粘附和致病中的作用。1材料与方法1.1菌株、细胞株和实验动物UPECF268和U PECF284为福州地区急性泌尿道感染住院病人...  (本文共4页) 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

致肾盂肾炎大肠埃希菌粘附素基因papG的克隆表达及其免疫保护作用的初步研究

尿道是最常见的细菌感染部位之一,85%以上的泌尿道感染由大肠埃希菌所致。这类大肠杆菌(致肾孟肾炎大肠埃希菌,UPEC)具有很强的泌尿道粘膜上皮细胞粘附能力。位于其表面的P菌毛能与人体泌尿道粘膜上皮细胞表面的特异性受体结合,使细菌粘附定植于粘膜细胞上,是UPEC一个重要的毒力因子,而介导菌毛粘附作用的关键因子是位于菌毛尖端顶部的粘附素PapG。由于:1.不同粘附素虽然有很高的保守性,但仍存在三种型别,各型有着不同的地区性分布、易感群体或部位,所导致的临床病症或表现也不尽相同;2.粘附素占菌毛全部蛋白的比例极少,很难直接从细菌获取能够激发宿主免疫反应的抗原量;在生物合成及转运过程中又极易被细菌周浆蛋白酶所降解,这些都给粘附素蛋白的抗感染免疫等研究造成了很大障碍。因此,本研究首先对天津地区分离的UPEC132株粘附素基因papG进行分型鉴定,然后通过基因克隆成功地构建GST-papa132稳定表达菌株并获得重组蛋白,在此基础上初步观察...  (本文共122页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

国内分离的致肾盂肾炎大肠埃希菌papA和papG基因分型的研究

尿路感染是一种常见病、多发病,大肠埃希菌为其主要致病菌,导致上行性尿路感染的大肠埃希菌大多具有P菌毛,称为致肾盂肾炎大肠埃希菌(UPEC)。编码P菌毛的粘附基因群(pap)位于UPEC的染色体上,由11个基因组成,其中papA编码P菌毛的主要菌毛结构亚单位,papG编码P菌毛尖端与尿道上皮细胞表面受体Gal-Gal结合的真正粘附素。近年来,UPEC papA和papG因在P菌毛组成和粘附致病中的重要作用而成为研究的焦点,尤其对papA和papG的基因分型研究在UPEC的流行病学、致病机理、遗传变异和免疫防治研究中的作用在国外越来越引起人们的关注,国内尚处于空白。首先,本研究建立了UPEC papC PCR的方法,在其扩增片段内设计了PstⅠ内切酶位点,可用于PCR产物的鉴定,提高该方法的特异性。采用上述方法对国内分离的147株尿源性大肠埃希菌进行检测,UPEC菌株检出率为31.98%(47/147株)。与血凝试验相比较,两种方法...  (本文共117页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国生物制品学杂志》2005年04期
中国生物制品学杂志

泌尿道致病性大肠埃希菌PapG重组蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用

尿道致病性大肠埃希菌(UropathogenicE.coli,UPEC)是引起泌尿道感染的主要病原菌,占临床泌尿道感染病例的85%左右[1]。研究表明,UPEC与普通大肠埃希菌的不同之处在于它们具有P菌毛。P菌毛可与人泌尿道粘膜上皮细胞表面的特异性受体结合促使细胞粘附定植,是UPEC重要的致病因子之一[2]。P菌毛的粘附作用主要由位于菌毛尖端的PapG粘附素决定。PapG在泌尿道感染中的致病作用已在雌性BALB/c小鼠和猴子试验中得到证实[3,4]。另外,PapG与泌尿道上皮细胞受体结合,可促进白介素-6和白介素-8等细胞因子的分泌,这些细胞因子可能参与肾脏炎症的发生与发展并导致肾脏损害和肾功能衰竭[5]。因此,阻断细菌对宿主的粘附和定植是防治细菌感染最有效的措施之一。粘附素作为疫苗抵抗细菌的粘附将成为今后抗感染研究及防治的一个重要方向。本研究在建立UPEC小鼠尿道上行感染模型的基础上,以纯化的GST-PapG重组蛋白为抗原免疫...  (本文共3页) 阅读全文>>