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贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii)是一种重要的人兽共患病原体 ,为严格的胞内寄生菌 ,可引起人类急、慢性Q热〔1〕。急性Q热临床表现多种多样 ,一般以发热、头痛和肌肉酸痛为主要症状 ,并常伴有肺炎、肝炎等。慢性Q热常发展为Q热性心内膜炎、骨髓炎等。贝氏柯克斯体致病性和免疫性与其表面抗原密切有关。研究发现 2 7kDa外膜蛋白是贝氏柯克斯体主要表面抗原 ,该抗原具有较好免疫原性和免疫反应性 ,为重要的保护性抗原〔2〕。本研究根据基因文库中 2 7kDa外膜蛋白基因的DNA序列设计一对引物 ,用PCR方法从贝氏柯克斯体的基因组中获得com1基因 ,采用分子克隆技术 ,使该基因在E coli内高效表达 ,获得了具有抗原性的贝氏柯克斯体 2 7kDa重组外膜蛋白。1 材料与方法1 1 材料1 1 1 菌株与载体质粒 E coli菌株JM 10 9和M15为本室保存。pUCm -T载体试剂盒为上海生工产品 ;载体pQE30...  (本文共3页) 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

贝氏柯克斯体保护性抗原的研究

贝氏柯克斯体是Q热的病原体,为专性细胞内寄生菌,是一种重要的通过空气传播的生物战剂和生物恐怖剂。本研究旨在对贝氏柯克斯体的27kDa、30kDa、34kDa外膜蛋白和热休克蛋白60B亚单位(HSPB)等保护性抗原进行研究,为抗Q热分子疫苗的研制奠定基础。1.贝氏柯克斯体27kDa、30kDa、34kDa外膜蛋白和HSPB基因的克隆与序列分析用PCR从贝氏柯克斯体Xinqiao株(中国分离株)和Henzerling株(意大利分离株)的基因组中分别扩增到27kDa、30kDa、34kDa、HSPB蛋白基因片段,将这些基因片段进行了克隆和测序。用基因分析软件将获得的Xinqiao株和Henzerling株的基因序列及基因序列所推导氨基酸序列与已知Nine Miles株(美国分离株)的基因序列进行比较。3株贝氏柯克斯体的27kDa、30kDa、34kDa、HSPB蛋白基因序列的相似性均在99.1%以上,氨基酸序列的相似性均在97.4%以...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

山西农业大学
山西农业大学

贝氏柯克斯体OmpH与ArgR外膜蛋白基因的原核表达及免疫原性分析

贝氏柯克斯体是一种呈世界分布的人畜共患病Q热的病原体,是以气溶胶的方式进行传播的生物恐怖剂。采用Q热疫苗接种是预防贝氏柯克斯体感染最有效的措施。贝氏柯克斯体的外膜蛋白是重要的保护性抗原。目前研究较多的外膜蛋白有27kDa、30kDa、34kDa等,均有良好的免疫原性。而ArgR和OmpH是近几年新发现的两种贝氏柯克斯体外膜蛋白,可能会作为检测Q热心内膜炎的分子指标。本研究采用PCR技术从贝氏柯克斯体标准九里株(NineMiles)基因组中扩增OmpH、ArgR外膜蛋白基因片段,然后进行克隆和测序。将测序正确的OmpH、 ArgR蛋白基因片段分别与原核表达质粒pET-32a、PGEX-6P-1重组,构建pET-32a-OmpH和PGEX-6P-1-ArgR重组原核表达质粒,再分别转化到BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达后,用超声波破碎获得上清和沉淀进行SDS-PAGE电泳。结果显示沉淀中含有分子量约为39.0kDa...  (本文共60页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国国境卫生检疫杂志》2017年02期
中国国境卫生检疫杂志

首次从额尔古纳口岸草原革蜱中检测到贝氏柯克斯体

1937年,澳大利亚发现了一种原因不明的发热性疾病,被命名为Q热,后来证明病原体为贝氏柯克斯体。已报道的Q热疫区遍及全球各大洲几乎所有国家,成为当前分布最广的人兽共患病之一[1]。Q热是由贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)引起的一种自然疫源性疾病。临床特征为发热、头痛、全身肌肉疼痛;无皮疹,有时伴间质性肺炎,少数患者可出现慢性肝炎或致命性的心内膜炎。Q热主要通过蜱虫叮咬传播,为虫媒传染病。本研究对我国内蒙古额尔古纳口岸地区蜱携带贝氏柯克斯体进行初步调查,首次从该口岸地区蜱类中检测到贝氏柯克斯体,为当地Q热的预防控制提供技术支持。1材料与方法1.1材料1.1.1样本采集2016年4月,采用布旗法从额尔古纳黑山头口岸、室韦口岸及毗邻地区,采集到草原革蜱、草原血蜱、全沟硬蜱共计269只,取其中210只检测贝氏柯克斯体核酸,其余制作标本留存。1.1.2主要试剂DNA聚合酶、d NTPs、DNA提取试剂盒、DNA纯化试剂盒...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国人兽共患病学报》2015年12期
中国人兽共患病学报

贝氏柯克斯体5种重组表面蛋白抗原包被酶联免疫吸附试验的特异性和敏感性分析

Q热(Q fever)是由贝氏柯克斯体(Coxiellaburnetii)引起的一种重要的人兽共患病,为全球性广泛分布[1]。人群Q热暴发流行常常源于羊群的贝氏柯克斯体暴发感染,因此“Q热”又俗称“羊流感”。贝氏柯克斯体易感染家畜,主要是羊、牛,导致孕畜流产,给畜牧业造成严重经济损失;而贝氏柯克斯体感染的家畜又是人Q热的主要传染源,可引起人群Q热的暴发和流行。2007年荷兰大范围暴发由贝氏柯克斯体感染羊所致的“羊流感”,造成数千人感染和多人死亡,引起了国际社会强烈关注[2]。流行病学调查显示Q热疫区遍布世界各国,在我国的分布十分广泛,目前至少有20多个省市自治区报道过Q热病例,其中四川、云南、内蒙、新疆和西藏等地还发生过Q热的流行[3]。Q热早期主要表现为发热、疲乏等,无特异性的临床症状,容易误诊为一般的流感。因此,早期确诊对于Q热患者的有效治疗与Q热流行的控制十分重要。人Q热诊断主要依赖血清学诊断,常用方法为间接免疫荧光试验(...  (本文共6页) 阅读全文>>

《生物技术通讯》2016年05期
生物技术通讯

贝氏柯克斯体穿梭载体构建及转化方法建立

贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)俗称Q热立克次体,是引起人类Q热(Query fever,不明热)的病原菌[1-3],现归类于柯克斯体科,柯克斯体属,军团菌目。这类菌的直径为0.2~1.0μm,革兰阴性,专性细胞内寄生,传统的培养方式为感染动物、鸡胚培养及组织细胞培养[4]。该菌主要通过气溶胶传播,在自然界感染禽、畜、节肢动物等,是已知的感染性最强的病原体之一,对环境抗性能力强,是经典的生物战剂和生物恐怖剂。我国人、牛、羊的Cb血清阳性率分别约为10%、15%和12%[5]。世界各地曾多次暴发Q热疫情,最近一次较大规模疫情是2007年至2010年荷兰超过4000人感染Q热。由于Cb为专性胞内寄生,培养纯化困难,且需要高等级生物安全实验室,因此对Cb的遗传操作非常困难。2009年美国国立卫生研究院落基山实验室的Heinzen课题组报道了Cb的无细胞培养方法,并在此基础上研制了完整的Cb遗传操作方法[6-10...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国畜牧兽医》2014年04期
中国畜牧兽医

Q热贝氏柯克斯体间接ELISA检测方法的建立

Q热(Q fever)是一种由贝氏柯克斯体(Coxiel-la burnetii)引起的,呈世界范围分布的自然疫源性人畜共患传染病(徐丽丽等,2012)。由于Q热发病没有明显的特异性症状,临床症状与流感类似,实验室诊断被认为是主要的判断依据(栾明春等,2007)。酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种敏感度高、特异性强的试验方法,与传统的、经典的分析方法相比,快速准确,可同时检测大量样品,是实验室对疾病检测、筛查的常用方法(Field等,2000)。目前Q热ELISA检测方法大多是采用重组蛋白作为诊断抗原,只能针对特定的抗体进行筛查,而抗原决定簇易存在于菌体表面(李芹阶等,1986)。贝氏柯克斯体因相变异现象存在2种抗原形式:强毒株Ⅰ相和弱毒株Ⅱ相,Ⅱ相抗原可在感染早期检测到Ⅱ相抗体,作为检测抗原可降低制备抗原及抗原检测的风险(Horigan等,2011)。本研究以贝氏柯克斯体Ⅱ相标准九里株(Coxiella burnetii N...  (本文共7页) 阅读全文>>