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中生菌素高产菌株发酵条件的研究

中生菌素高产菌株发酵条件的研究①朱昌雄②宋培国蒋细良谢德龄倪楚芳(中国农科院生物防治研究所,北京100081)[摘要]中生菌素产生菌通过菌种选育,得到4株效价较亲株提高70%的菌株。通过正交回归实验得到中生菌素高产菌株UV-7的摇瓶最佳培养条件和最佳发酵配方;明确了通气量和葡萄糖含量是影响最终产素量的主要因素。在6.6L的全自动发酵罐中优化发酵,明确了UV-7发酵过程中的代谢规律,证明了发酵代谢的终点与溶解氧和pH的变化有直接关系。关键词中生菌素高产菌株抗生素发酵代谢中图资料分类号S476.8中生菌素是由淡紫灰链霉菌海南变种(Streptomyceslavendulaevar.hannanensis)产生的一种N-糖甙类抗生素,其产生菌已通过工厂中试发酵,批量生产。因目前生产菌种的发酵水平还不高,我们试图通过菌种选育和发酵条件的研究提高中生菌素的发酵单位,降低生产成本。本文报道通过菌种选育得到高产菌株发酵条件的研究结果。1材料与...  (本文共4页) 阅读全文>>

河南农业大学
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中生菌素高产菌株选育

中生菌素是由淡紫灰链霉菌海南变种产生的N-糖苷类农用抗生素,对农作物细菌性病害及某些真菌病害具有良好的防治效果。本文以C5为原始出发菌株,以对两种指示菌的抑制能力均较强作为衡量高产菌株的指标,运用不同的诱变方法选育出中生菌素高产菌株UV-69、E-25和6937,并对它们进行了遗传稳定性测试和发酵培养基的优化。其主要内容有以下几个方面:1.采用正交试验筛选出适合C5生长、产素和孢子预萌发的培养基,并加以改进,获得效价初筛培养基,建立了效价初筛模型。2.采用孢子预萌发后进行紫外线照射实验表明:孢子预萌发3h后进行紫外线照射效果最好,正变率、突变率大大增加。通过该方法筛选出一株对真菌和细菌都有较好抑制效果的高产、稳产菌株UV-69,摇瓶平均发酵效价为3745μg/ml,比出发菌株C5摇瓶发酵效价(2650μg/ml)提高了41.32%,且传代性能稳定。高产菌株UV-69大罐(20吨)发酵平均效价为4370μg/ml,比C5(3000...  (本文共51页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

中生菌素生物合成基因簇克隆及分析

中生菌素是一种由淡紫灰链霉菌海南变种(Streptomyces lavendulae var. hainanensis)产生的氨基糖苷类农用抗生素,具有广谱、高效、低毒、无污染等特点,对多种细菌及真菌病害具有良好的防治效果,目前已经得到了广泛的应用。为了利用分子生物学的手段构建高产工程菌,进一步提高中生菌素的生产水平,本研究计划克隆中生菌素生物合成基因簇并对其功能进行分析。首先以中生菌素产生菌的基因组DNA和粘粒载体pOJ446为材料,构建了基因组粘粒文库。获得的文库覆盖率超过99.99%,可以覆盖淡紫灰链霉菌海南变种B-7基因组10次左右,具有非常高的完整性和代表性。其次,在文库构建成功之后,确立了一种基于PCR的文库筛选方法。以之前克隆到的中生菌素生物合成基因zpsA片段为筛选目标,对构建的粘粒文库进行基于PCR的筛选。经过5轮共计100多个PCR反应筛选出含有zpsA基因片段的阳性克隆,所有操作耗时15天左右,效率较高。与...  (本文共104页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

中生菌素生物合成基因zpsA的克隆及功能鉴定

中生菌素(Zhongshengmycin)是由淡紫灰链霉菌海南变种(Streptomyces lavendulae var. hainanensis)合成的N-糖苷类农用抗生素,对农作物细菌性病害和真菌性病害具有良好的防治效果。本研究在同类抗生素(诺尔丝菌素、链丝菌素)生物合成相关基因序列已知的基础上,利用PCR 的方法对淡紫灰链霉菌海南变种的中生菌素生物合成酶(β-赖氨酸活化酶)基因进行克隆和序列分析,并最终对其功能进行鉴定。根据非核糖体肽合成酶A 域(腺苷酸化域)氨基酸序列中存在的十个保守区,并根据已知的诺尔丝菌素肽合成酶基因(npsA)序列和链丝菌素肽合成酶基因(sttA)序列设计出多条PCR 引物,以UV-69 菌株的总DNA 为模板,先后扩增出四段长度分别为284bp、611bp、370bp 和350bp 的基因序列,经过拼接最终得到1.025kb 的中生菌素肽合成酶的基因(zpsA)序列。在GeneBank中进行比对...  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业大学
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中生菌素对水稻主要防御酶的系统诱导

中生菌素是通过微生物发酵生产的一种农用抗生素,对水稻白叶枯病等农作物细菌性病害具有良好的防治效果。多年的田间试验结果表明,中生菌素的预防效果明显地好于化学农药,但它的治疗效果比化学农药差,且多年应用田间也未见抗药性菌株出现。因此,我们推测中生菌素除具有杀菌作用外,还可能提高植株的抗病性。通过应用抗、感白叶枯病水稻近等位基因系悬浮细胞及不同抗性水稻品种作为研究体系,研究中生菌素对水稻悬浮细胞中重要防御酶苯丙氨酸解氨酶基因(pal)、过氧化物酶基因(po)、查尔酮合成酶基因(chs)转录表达的影响,PO和多酚氧化酶(PPO)同功酶谱带的变化及稻株中PO、PAL、PPO活性的变化与防效的关系,试图较为全面地阐述中生菌素的作用机制。首先,建立了感病品系沈农1033及其携带Xa-4粤抗病基因CBB_4的悬浮细胞系,为防卫反应基因表达研究提供了较好的研究体系。中生菌素对水稻悬浮细胞中白叶枯病菌生长繁殖有很强的抑制作用,在悬浮细胞系中加入中生...  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

《北方园艺》2012年17期
北方园艺

53%多菌灵·中生菌素可湿性粉剂防治苹果轮纹病药效试验

苹果轮纹病又称疣皮病或粗皮病,主要危害枝干和果实。枝干受害,初期以皮孔为中心形成圆形或扁圆形的瘤状物,边缘龟裂与健康组织形成一道环沟,后期病组织翘起如马鞍状,许多病斑连在一起,使表皮粗糙。果实受害,在近成熟期或贮藏期,以皮孔为中心,初期生成水渍状褐色小斑点,很快形成同心轮纹状,并向四周扩大,整个果实软腐[1]。在生产实际中,对该病的防治方法主要采用化学防治,多采用休眠期喷施杀菌剂如石硫合剂铲除潜伏病原;发病前施用保护性杀菌剂如波尔多液控制病原;发病时采用内吸性治疗剂如多菌灵进行防治[2]。但是,病原菌对上述药剂已产生了明显的抗药性。为了筛选出防治苹果轮纹病经济有效的杀菌剂品种,延缓抗药性的产生及发展,该试验对多菌灵与中生菌素混用防治苹果轮纹病的效果进行了研究,以明确其适宜的防治时期、科学配比、用药剂量及合理的使用技术,为生产上防治苹果轮纹病提供科学依据。1材料与方法1.1试验地概况该试验设在陕西省杨凌示范区农户的苹果园内,果园面...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国生物防治》1950年20期
中国生物防治

中生菌素对水稻细菌性条斑病的防治试验

水稻细菌性条斑病(Xanthomonasoryzaepv.oryzicola)是水稻上一种危险性较大的检疫性病害,不仅影响水稻生产,而且严重威胁着杂交水稻制种基地的种子繁殖。能够防治这种病害的有效药剂很少。中生菌素是中国农科院生物防治研究所研制的一种防治作物细菌性病害的农用抗生素,它对水稻白叶枯病(Xanthomonasoryzaepv.oryzae)有很好的防治效果,水稻白叶枯病菌与水稻细菌性条斑病菌是同属的两种致病变种,亲缘关系很近。因此我们用中生菌素进行了防治水稻细菌性条斑病试验和示范,现将结果整理如下:1试验材料水稻细菌性条斑病菌由湖南农业大学植保系提供,水稻白叶枯病菌为河南农科院植保所提供;98%中生菌素纯品和0.3%制剂(中国农科院生防所提供),91.7%强氯精可湿性粉剂(南宁实验化工厂生产),20%叶青双可湿性粉剂(温州化工厂生产);葡萄糖蛋白胨水(GPW)培养基。2试验方法2.1室内试验将中生菌素加到GPW培养基...  (本文共2页) 阅读全文>>