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双抗体夹心阻断ELISA检测血清中牛病毒性腹泻-粘膜病病毒抗体的研究

牛病毒性腹泻一粘膜病(Bovine viraldiarrhea一Mueosal disease,简称BVD-MD)广泛发生于世界各地.据报道,英、美、澳大利亚等国家,其牛群中BVD一MD抗体阳性率高达50%~90%.国内自李佑民等[1j从病牛流产胎儿脾脏中分离出BvD一MD病毒以来,许多地区也先后报道有本病发生。一‘〕.目前,用于检测BvD-MD病毒抗体的方法主要有中和试验、免疫扩散试验、间接ELISA等.这些方法各有其优点,但也都存在较明显的不足.为建立一种更适合于本病诊断和流行病学调查的方法,而进行了本研究.1材料与方法1.1血清BVD高免血清,由兽医大学传染病教研室李佑民教授惠赠;BVD阳性血清,购自青岛动检所,中和抗体效价1:5;BvD阴性血清,购自青岛动检所;被检血清,奶牛血清293份,黄牛血清262份,分别采自长春市某奶牛场和某肉联厂.1.2 BVD病毒取经ELISA和电镜证实为BvD一MD自然发病牛的腹泻粪便,按常...  (本文共5页) 阅读全文>>

《实用临床医学》2009年04期
实用临床医学

血清促红细胞生成素的双抗体夹心ELISA法和ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)属肽类激素,是一种单链的酸性糖蛋白,相对分子量为32000~39000,由165个氨基酸残基组成,主要由肾脏分泌,肝脏也有部分分泌,和多种疾病相关。当人体缺氧或有相关疾病刺激时,EPO生成增加,通过检测其水平的高低可以早期发现、预防及时处理某种疾患,这是目前许多学者研究的课题[1]。Kim KH等[2]发现,检测EPO的ELISA法中,双抗体夹心法最可取,在临床的监测中应用也最为广泛。然而国内相关的ELISA试剂盒研究较少,而国外进口的试剂盒价格昂贵无法进行大规模的人群研究和评价。为此,本试验探索设计一种ELISA试剂盒为临床快速、准确、方便地检测EPO奠定基础。1材料和方法1.1标本来源收集天津医科大学附属肿瘤医院2007年6月至2008年3月病理确诊的乳腺癌患者的血清标本40例,均为女性,年龄25~79岁,平均53岁;选择同期正常对照组血清标本57例,均无心、肺、肝、肾疾...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中外医疗》2012年10期
中外医疗

双抗体夹心一步法及两步法测HBsAg的结果分析

HBsAg的酶免疫检验方法根据反应模式分为“一步法”和“两步法”。“一步法”是将待测样品和酶标记抗体同时加入到反应孔中进行反应,从反应开始到反应结束大约需要1个小时,而“两步法”则是先将样品加入到反应孔中,待反应结束后再加入酶标记抗体,从而使得待测样品的“捕获反应”和酶标记抗体的“酶联反应”分开进行,从反应开始到结束大约需要2个小时。两步法较一步法相比大大延长了检测时间,降低了检测效率,不利于基层医院的广泛推广。由于HBeAg多见于HBsAg阳性的患者血清,HBeAg的检出是HBV在体内复制及血清具有强感染性的一个指标,血中HBsAg的滴度越高HBeAg的检出率亦越高[1]。HBeAg阳性可以作为一步法测HBsAg是否出现鈎镰效应的一个判断指标。1资料与方法1.1一般资料已诊断为慢性乙肝患者的血清标本200份来自我院2010年门诊及住院病人以及肝病医院,372份血液标本来自我院2010年体检者,186份阴性对照标本来自我院门诊体...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中国实验诊断学》2012年06期
中国实验诊断学

双抗体夹心ELISA检测人胎儿血红蛋白体系的建立

胎儿血红蛋白(Fetal Hemoglobin,HbF)由2条α链和2条γ链组成,出生时约占血红蛋白总量的70%,然后快速减少,6-12个月后浓度小于2%,到成年时降至血红蛋白总量的1%以下。在许多血液系统疾病尤其是β地中海贫血的筛查中,检测HbF是一项不可或缺的指标[1]。在某些恶性肿瘤中,HbF可作为肿瘤标记物预示肿瘤的发生发展[2]。在产科疾病中,检测HbF可以快速判定胎儿向母体出血等疾病[3]。目前检测HbF多采用蛋白质电泳、抗酸染色和碱变性法,这些方法灵敏度比较低,而灵敏度和准确度较高的高效液相色谱法价格昂贵,不适合大规模筛查[4]。本研究利用自制的抗人HbF单克隆抗体和兔抗人HbF多克隆抗体,建立了HbF的单多抗夹心ELISA检测体系。1材料与方法1.1材料1.1.1主要试剂抗人HbF单抗2C8、多抗均由本室自制[5],HRP-羊抗兔IgG为北京鼎国生物公司产品;BSA购自广州斯佳生物技术公司。自行配制以下试剂:红细...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国糖料》2009年03期
中国糖料

甜菜丛根病的双抗体夹心酶联免疫吸附测定

甜菜丛根病(Rhizomania)是由甜菜坏死黄脉病毒(beet necrotic yellow vein virus,BNYVV)引起,并由土壤中的多粘菌(P.betae)为传播介体的一种土传病害。自20世纪50年代在意大利北部发现以来,先后在日本、法国、德国等20多个种植甜菜的国家不断发生和蔓延,我国于1978年在内蒙古发现,以后在华北、西北及东北的吉林等地也相继发生。该病毒侵染甜菜以后,可造成甜菜块根产量损失30%~60%,含糖率降低2~4度,发病严重地块甚至绝产,甜菜工艺品质差,有些甜菜已失去加工价值。检测BNYVV常用的方法是酶联免疫吸附法(ELISA),ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国医药工业杂志》2009年09期
中国医药工业杂志

重组人血管内皮抑制素的双抗体夹心ELISA特异性定量检测

End。statin是胶原X姗竣基末端的降解片段,相对分子质量Zxlo‘,由。’Reilly等于1997年发现一’〕。为保证其空间构象及生物活性,最早使用酵母菌表达。nd。Statin〔2一4〕,但因产量低价格高而撤出市场。我国自主研发的重组人血管内皮抑制素(recombinant human endostatin,1,商品名:恩度)于2006年由SFDA批准上市,与化疗药物联用治疗非小细胞肺癌,取得了肯定的疗效L’〕。改用大肠杆菌表达系统制备1,降低了生产成本。因1和endostatin序列同源性高,一般采用endostatin的检测体系,但该法无法区分内源性endostatin和外源性重组蛋白药物1。本研究利用1在N一末端的一段与endostatin不同的氨基酸序列,设计了一种单一多抗双抗体夹心ELISA方法,特异性检测1。1仪器与试药Infinite M200型酶标仪(Teean公司):卢、lph;,FluorChem型凝...  (本文共4页) 阅读全文>>