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双抗体夹心阻断ELISA检测血清中牛病毒性腹泻-粘膜病病毒抗体的研究

牛病毒性腹泻一粘膜病(Bovine viraldiarrhea一Mueosal disease,简称BVD-MD)广泛发生于世界各地.据报道,英、美、澳大利亚等国家,其牛群中BVD一MD抗体阳性率高达50%~90%.国内自李佑民等[1j从病牛流产胎儿脾脏中分离出BvD一MD病毒以来,许多地区也先后报道有本病发生。一‘〕.目前,用于检测BvD-MD病毒抗体的方法主要有中和试验、免疫扩散试验、间接ELISA等.这些方法各有其优点,但也都存在较明显的不足.为建立一种更适合于本病诊断和流行病学调查的方法,而进行了本研究.1材料与方法1.1血清BVD高免血清,由兽医大学传染病教研室李佑民教授惠赠;BVD阳性血清,购自青岛动检所,中和抗体效价1:5;BvD阴性血清,购自青岛动检所;被检血清,奶牛血清293份,黄牛血清262份,分别采自长春市某奶牛场和某肉联厂.1.2 BVD病毒取经ELISA和电镜证实为BvD一MD自然发病牛的腹泻粪便,按常...  (本文共5页) 阅读全文>>

《实用临床医学》2009年04期
实用临床医学

血清促红细胞生成素的双抗体夹心ELISA法和ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)属肽类激素,是一种单链的酸性糖蛋白,相对分子量为32000~39000,由165个氨基酸残基组成,主要由肾脏分泌,肝脏也有部分分泌,和多种疾病相关。当人体缺氧或有相关疾病刺激时,EPO生成增加,通过检测其水平的高低可以早期发现、预防及时处理某种疾患,这是目前许多学者研究的课题[1]。Kim KH等[2]发现,检测EPO的ELISA法中,双抗体夹心法最可取,在临床的监测中应用也最为广泛。然而国内相关的ELISA试剂盒研究较少,而国外进口的试剂盒价格昂贵无法进行大规模的人群研究和评价。为此,本试验探索设计一种ELISA试剂盒为临床快速、准确、方便地检测EPO奠定基础。1材料和方法1.1标本来源收集天津医科大学附属肿瘤医院2007年6月至2008年3月病理确诊的乳腺癌患者的血清标本40例,均为女性,年龄25~79岁,平均53岁;选择同期正常对照组血清标本57例,均无心、肺、肝、肾疾...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国生物制品学杂志》2016年12期
中国生物制品学杂志

人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证

猪抗人淋巴免疫球蛋白(anti-human T lympho-cyte porcine immunoglobulin,ALG)是由人淋巴细胞免疫猪后,取血浆,经去除杂抗体、纯化、浓缩后,再经病毒去除和灭活处理,并加入适宜稳定剂制备而成。1975年,武汉生物制品研究所研制出第一代ALG,该产品已在市场上广泛使用近40年,证实其具有良好的有效性和安全性。目前,中国境内已注册的同类产品仅3种,分别来源于兔和猪[1-3]。再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)简称再障,是由多种病因引起的以全血细胞减少为主要临床表现的造血功能衰竭综合征[4],其中严重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)病情进展迅速,预后较差,死亡率较高,但如采取有效治疗,90%的患者症状会获得明显改善,并延长生存期[5]。应用ALG+环孢霉素A(Cs A)是对无法移植的患者进行治疗的首选方案,已被越来越多的医院所接受[...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2017年04期
中国兽医学报

双抗体夹心ELISA检测羊肠道病毒抗原方法的建立及病原流行病学调查

肠道病毒(enterovirus,EV)是引起人和动物临床上以消化道和呼吸道疾病为主要特征的病原体,属于小RNA病毒科肠道病毒属中的成员。根据最新的病毒分类,肠道病毒属包括A,B,C,D,E,F,G,H,J共9个肠道病毒种和A,B,C共3个鼻病毒种,且每个病毒种内又可进一步分为不同的血清型。其中A,B,C,D这4个肠道病毒种感染人类,引发人类的脊髓灰质炎、柯萨奇病毒感染和手足口病等。E种和F种肠道病毒感染牛,引发牛只呈现消化系统和呼吸系统症状。G种肠道病毒主要感染猪,引发猪的消化系统症状[1-7]。羊肠道病毒(ovine/cap-rine enterovirus,OEV/CEV)感染是国内外新发的一种传染病,2012年,首次由匈牙利学者报道[8]。2014年日本学者从腹泻羊体内扩增出大小为563bp的基因片段[9]。本实验室2014年从吉林省某地暴发严重腹泻的病羊群中分离出大小约为20~30nm的病毒。序列测定发现,所分离的毒株...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2017年05期
中国兽医学报

双抗体夹心ELISA检测小反刍兽疫病毒抗原方法的建立及病原流行病学调查

△Joint first authors;*Corresponding author,E-mail:wangxp88@hotmail.com小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属中的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性或亚急性接触性传染病,以发病、高热稽留、眼鼻分泌物增加、口腔糜烂、腹泻和肺炎为特征,属于国际动物卫生组织(OIE)规定的通报性疫病之一[1-6]。本病主要感染绵羊和山羊,其他野生小反刍动物亦可感染。易感羊群暴发本病后,其致死率高达50%~100%。本病于1942年在西非科特迪瓦首次发现,之后流行于多数非洲国家、大部分中东国家和印度、尼泊尔、塔吉克斯坦、巴基斯坦、老挝和缅甸等与我国接壤的亚洲国家,且呈蔓延的趋势[7-10]。小反刍兽疫在国内于2007年7月首次暴发于西藏自治区阿里地区,并在...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国实验血液学杂志》2017年02期
中国实验血液学杂志

双抗体夹心ELISA测定人血浆可溶性血管内皮钙粘蛋白方法的建立及其应用研究

血管内皮钙粘蛋白(VE-cadherin)属于Ⅱ型钙粘蛋白,是粘附分子家族中的一种。它是一种维持血管内皮细胞极性和完整性必不可少的钙粘蛋白,也是血管内皮细胞粘附连接的主要粘附蛋白[1]。现有研究提示,血管内皮钙粘蛋白除了参与正常血管发生和形成,还可能参与细胞内的信号传导和肿瘤细胞的生长抑制[2]。同时有研究发现,外界刺激可促使内皮细胞(endothelial cells,EC)膜上VE-cadherin降解,因而部分VE-cadherin将游离于血液中,另一部分将通过'内吞'作用进入胞浆中[3]。血液中的可溶性VE-caderin(sVE-cadherin)能阻止内皮细胞的增生和毛细血管腔的形成,从而抑制肿瘤细胞的生长[4]。本研究以重组人VE-cadherin免疫小鼠获得的特异性VE-cadherin单克隆抗体,建立一种测定血浆VE-cadherin含量的双抗体夹心法酶免疫吸附实验(ELISA)方法,以探讨其在肿瘤诊断中的应用...  (本文共5页) 阅读全文>>