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体外培养细胞中特异反义RNA表达对猪瘟病毒增殖的抑制作用

体外培养细胞中特异反义RNA表达对猪瘟病毒增殖的抑制作用章金钢,涂长春,金扩世,李红卫,胡敬东,扈荣良,戴秉丽,殷震(长春农牧大学军事兽医研究所130062)摘要应用免疫荧光抗体技术检测了整合有猪瘟病毒反义基因的PK-15细胞克隆对猪瘟病毒的抑制效应。结果表明,5个不同的反义基因片段对猪瘟病毒的抑制效率存在很大的差异,其中A片段的抑制效率最高(94%~98%),B片段次之(58%~76%),C片段再次(64%以下),D片段和E片段未见明显的抑制效应。抑制效率的差异可能与反义基因片段的位置、长短以及反义RNA表达质粒载体有关。关键词猪瘟病毒,反义基因,病毒抑制中国分类号Q78S852.651猪瘟《HogCholera/SwineFever,HC/SF)是猪的一种最重要的传染病,给养猪业造成的经济损失十分严重,是许多国家法定传染病之一,国际兽疫局(OIE)也将其列入A类16种法定传染病,并要求会员国有义务报告疫情、按规定检疫和遵守国...  (本文共6页) 阅读全文>>

《生物技术通讯》1995年02期
生物技术通讯

猪瘟病毒反义基因在培养细胞上的效应研究——反义基因对猪瘟病毒的抑制作用

猪瘟(Hog Cholela/Swine Fever,HC/SF)是猪的一种最重要的专染病,给养猪业造成了严重的经济损失,是许多国家法定传染病之一,国际兽疫局(OIE)也籽其列入A类16种法定传染病并要求会员国育义务报告疫情,按规定检疫和遵守国际交换的有关规定〔’〕。 为探索反义核酸途径抗猪瘟病毒(HCV)感染基因工程育种的可行性,我们合成并克隆获得了5个HCV的反义基因片段〔231,构建了相应的反义RNA表左质粒,用基因转移技术将这些反义RNA表达质粒导入HCV的敏感细胞PK一15,获得了具有抑制HCV感染效应的细胞株,为应用反又RNA技术防制病毒性疾病提供了依据,也为反义RNA转基因动物抗病育种、培育抗H〔V感染的转基因个体打下了基础〔‘〕。本文报告反义基因整合细胞对HCV的抑制作用。1材料与方法1.1材料 HCV石门系毒株血毒(强毒),引自中国兽药监察所(NO.870417),适当稀释后肌肉注射于HCV抗体阴性的断奶仔猪,...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国肿瘤生物治疗杂志》2002年01期
中国肿瘤生物治疗杂志

c-myc反义基因对人高转移肺癌细胞增殖和黏附活性的抑制作用

C MYC蛋白在控制细胞增殖过程中具有重要作用 ,是决定细胞终末化还是继续增殖的选择开关。同时c myc基因作为转录调控因子 ,可以调节肿瘤细胞表面抗原的表达 ,并对肿瘤细胞的侵袭性、黏附性具有重要的影响[1] 。本研究采用反义核酸技术 ,设计并合成c myc反义寡核苷酸 ,经脂质体包裹 ,形成反义寡核苷酸 脂质体复合物 (c mycASODNS Lf) ,转导入c myc高表达的人高转移性肺癌PG细胞中 ,从细胞 基因 蛋白 3个水平上阐明c myc反义寡核苷酸对目的基因的封闭和抑制作用 ,下调PG细胞增殖和侵袭黏附性的作用和机制 ,为反义基因在抗肿瘤增殖、转移的临床应用 ,提供理论和实验依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 细胞株PG细胞 ,人肺巨细胞腺癌 ,引自北京医科大学病理系 ,本室常规传代培养。1.1.2 主要试剂MTT ,3 (4 5 二甲噻唑 2 YI) 2 ,5 乙苯基 四唑溴盐(Sigma...  (本文共4页) 阅读全文>>

《生物技术通讯》2006年06期
生物技术通讯

利用多聚半乳糖醛酸酶反义基因转化选育耐贮中国樱桃

据有关研究报道,引起樱桃果实变软的主要原因之一是后熟期间多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)的量和活性迅速提高所致。利用常规的杂交育种方法难以达到使PG活性降低、抑制果实软化的目的。基因转化技术为解决这一问题提供了可能。本研究的目的就是试图利用农杆菌介导法将PG反义基因转入中国樱桃,再结合常规育种技术,选育出耐储能力有明显提高的中国樱桃新品系。1材料和方法1.1材料2个中国樱桃品种“大窝娄叶”和“玉珠”的一年生枝条,采自山东枣庄市市中区渴口乡。1.2樱桃叶片培养与植株再生年初1~2月份从多年生樱桃树上剪取一年生的健壮枝条,于(25±2)℃的温室内水培,待新生芽长出2~3片幼叶时取下整个芽,经75%乙醇和0.1%升汞消毒,无菌水清洗后接种于芽生长与增殖培养基上。培养4~6周后从再生芽上摘取嫩叶进行植株再生诱导。于无菌条件下在叶片的背面轻切几刀造成伤口,将切伤后的叶片置于诱导芽再生培养基上,经过多次不同培养基...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国预防兽医学报》2003年01期
中国预防兽医学报

反义基因治疗技术研究进展

反义脱氧寡核苷酸 (Antisenseoligodeoxynuclecotide ,A SODN)是一段与mRNA或DNA特异性结合并阻断其基因表达的人工合成的DNA分子。ASODN能通过封闭或抑制肿瘤细胞和病毒的关键编码基因来特异性抑制肿瘤细胞增殖和病毒的复制 ,是治疗肿瘤和病毒性传染病的潜在新型药物[1] 。自从 1 990年美国科学家首次完成了 1例联合免疫缺陷综合症的基因治疗并取得了较好疗效以来 ,人们开始设想通过反义基因治疗来控制肿瘤、病毒性疾病和炎症[2 ,3 ] 。反义基因具有使用方便和容易大量生产等优点 ,与传统药物相比具有极强的作用特异性。最近新发展起来的反义基因技术比反义RNA治疗技术更进一步 ,它是通过寡聚核苷酸片段与双链DNA结合 ,形成局部三链结构来抑制基因的转录 ,从而调控基因表达。由于遗传信息从DNA流向RNA是一个遗传信息放大过程 ,而反义基因技术在转录水平发挥作用 ,因而较反义RNA疗法更有效。...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生物工程进展》1993年02期
生物工程进展

反义基因操作及反义分子的设计原则

八十年代,有关RNA在组t胞内的生物学功能研究取得了重要的突破,除证明RNA具有催化功能(即Ribozyme)之外,还表明RNA具有调节基因表达的功能。Bovre和Szybalski(1969)最先发现噬菌体b,区内的两股DNA链能以相反的方向被转录,因而认为与mRNA互补的另一股DNA转录产物具有调节功能。但是,在当时这只是一种推测。此后,Itoh和TomiZawa(1980)发现,大肠杆菌中质粒的复制取决于DNA复制原点活动的起始频率,起始频率则决定于引物RNA的合成,而和引物编码链互补的DNA链反向转录出的RNA,能通过和引物RNA的互补结合调节DNA的复制,从而控制质粒的拷贝数。由于普遍认为RNA的稳定性很差,人们对于翻译水平上这种阻遏物的存在及其作用,仍有疑问。 直至1983年才首次证实,与核糖体结合位点(包括s一D序列)以及翻译起始密码子互补的RNA具有作为基因天然阻遏物的功能(Si-mon,;和K一eekner,1...  (本文共3页) 阅读全文>>