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猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用

猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)是导致猪繁殖障碍疾病的4种病原体[1]。这4种疾病是猪的多发病,常呈混合感染[2~4]。目前在很多猪场都同时存在这4种疾病,严重影响养猪生产。因此,对这4种病毒进行鉴别诊断具有十分重要的意义。这几种疾病的诊断通常采用常规的病原学和血清学检测方法,这些方法往往耗时长、繁琐或敏感性差。因此有必要建立快速的早期诊断方法,以便尽快采取有效的防治措施,减少这些疾病对养猪业造成的损失。多重PCR技术是指在同一反应体系中,加入多对引物,对多个目的基因同时进行扩增的方法。本研究利用4对特异引物建立了4种病毒的多重PCR方法,以期达到快速检测的目的。1材料与方法1.1病毒PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSV KY 35株、CSFV石门强毒株及猪瘟兔化弱毒疫苗株,均由中国兽医药品监察所鉴定、保存。PRRSV国内分离株B13株由中国兽医药...  (本文共4页) 阅读全文>>

《养猪》2010年03期
养猪

多重PCR方法用于检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断方法的建立

1引言猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)最初是由Tischer在PK-15细胞系的传代过程中发现的,当时认为是一种细胞污染物[1]。PCV分为PCV1和PCV2,PCV1无致病性,而PCV2具有致病性[2,3]。最近的研究表明,除断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)外,PCV2还与猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪增生性坏死性肺炎(PNP)、猪呼吸道病综合征(PRDC)、猪繁殖障碍、仔猪先天性震颤(CT)以及无名高热等疾病有关,现统称为猪圆环病毒相关性疾病(Porcinecircovirus associativity disease,PCVAD)[4]。细小病毒(PPV)属于细小病毒科细小病毒属,是引起母猪繁殖障碍的重要病原,同时也被认为与PMWS的病因有关。试验表明,用PCV2和PPV双重感染能够引起严重的PMWS临床症状和病理变化[5]。伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)又名...  (本文共4页) 阅读全文>>

权威出处: 《养猪》2010年03期
《江西农业学报》2017年09期
江西农业学报

猪伪狂犬病病毒野毒SYBR-Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的危害多种动物的一种以发热、奇痒(猪除外)和以脑脊髓炎为代表的神经症状的急性传染病。猪是PRV的主要贮存宿主及疫源动物。猪伪狂犬病常引起妊娠母猪繁殖功能障碍和初生仔猪的神经症状,仔猪感染率和死亡率极高,给世界养猪业带来巨大的损失[1-2]。猪伪狂犬病具有潜伏感染的特点,病毒可在耐过感染的猪体内终生潜伏,在一定条件下,病毒可能被激活,导致猪群复发感染,及时诊断是预防和控制该病的关键[1-3]。过去诊断猪伪狂犬病的方法有病毒分离鉴定、酶联免疫吸附试验、中和试验、常规PCR检测等等,但是过程繁琐、周期长,还存在污染和特异性差的缺点,给该病的临床检测和防治带来滞后性[4]。荧光定量PCR技术是在PCR技术基础上发展起来的一种新型检测技术,SYBR-GreenⅠ荧光信号的积累与扩增的双链DNA数量呈正相关。该方法操作简便、敏感度高...  (本文共4页) 阅读全文>>

《山西农业科学》2011年08期
山西农业科学

猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

2008年2月以来,山西多个规模化猪场出现妊娠母猪流产、木乃伊胎、死胎和产弱仔,初生仔猪出现神经症状,给生产造成巨大损失。为查明引起该疫病发生的根本原因,我们采集了病死猪的脑、肺、肝、脾、肾等组织病料,对其进行了研磨与过滤处理,并对其病原菌进行了分离。最终从病死仔猪的脑、肺、肝组织病料中分离出1株疑似伪狂犬病病毒(PRV)的毒株,并对其进行了系统的鉴定。1材料和方法1.1试验材料1.1.1细胞仓鼠肾传代细胞(BHK-21),购于中国兽医药品监察所。1.1.2血清猪伪狂犬病中和试验标准阳性血清,购于中国兽医药品监察所;阴性猪血清,采自规模猪场非免疫健康猪,经gE鉴别ELISA诊断试剂盒检测均为阴性。1.1.3病料无菌采集病死仔猪、流产胎儿的脑、肺、肝、脾、肾等组织置-70℃保存,供分离病毒用。用前将上述组织混合在一起于灭菌过的研钵内剪碎,用组织研磨器研磨,加入含青霉素、链霉素(终浓度各1 000单位/mL)的Hank’s液制成1∶...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国畜牧兽医》2010年11期
中国畜牧兽医

北京部分地区散养户病死猪伪狂犬病病毒感染情况调查

猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)属于疱疹病毒科α疱疹病毒亚科的猪Ⅰ型疱疹病毒,能引起家畜和多种野生动物的急性传染病(伪狂犬病)(王隆柏等,2008;斯特劳等,2000),该病对猪的危害尤为严重,主要引起妊娠母猪流产、产死胎或木乃伊胎等;公猪睾丸发炎、萎缩、丧失种用能力;初生仔猪高热、呼吸困难、显著的神经中枢障碍,死亡率高(王隆柏等,2008;斯特劳等,2000);育肥猪通常呈隐性感染,仅表现增重减慢等轻微症状,往往容易被养殖者所忽视。值得关注的是,伪狂犬病病毒是猪呼吸系统疾病综合征(porcine respiratory diseasesyndrome,PRDC)的重要原发性病原之一,伪狂犬病病毒存在与PRDC典型症状发生的时间紧密相关(斯特劳等,2000)。猪伪狂犬病对养猪业危害极大,已给中国养猪业造成巨大经济损失。为摸清北京地区养猪散户猪伪狂犬病病毒感染状况,从而有效指导散养户预防和控制猪伪狂犬...  (本文共3页) 阅读全文>>

《福建畜牧兽医》2016年04期
福建畜牧兽医

一例猪伪狂犬病病毒的诊断

猪伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)属于疱疹病毒科(Herpesviridae)、α-疱疹病毒亚科(Alphaherpesvirinae)、水痘病毒属(Vari-cellovirus)。PRV基因组为双股DNA,病毒全基因组长150 kb左右,病毒基因组中存在独特长(Uniquelong,UL)区和独特短(Unique short,US)区。研究发现PRV的GC含量超过70%,其UL区和US区序列在基因组中方向并不完全一致(表现为同向和反向两种情况)[1-4]。在US区中存在PRV的一种主要糖蛋白g E,该蛋白是一种主要的猪神经性因子,促进细胞融合后导致PRV在动物机体有效扩散,现已证实该蛋白在PRV入侵血脑屏障和疾病传播中起到重要作用[5]。当前,在我国猪群中广泛使用猪伪狂犬病病毒匈牙利弱毒株(Bartha-k61株)来防控PRV感染和传播,使得PR曾经在我国得到有效控制。对PRV疫苗...  (本文共3页) 阅读全文>>

《吉林畜牧兽医》2015年06期
吉林畜牧兽医

猪伪狂犬病病毒在不同细胞上的增殖研究

伪狂犬病是由伪狂犬病毒(PRV)引起的多细胞维持液:DMEM+2%胎牛血清。种家畜和野生动物的一种急性传染病[1],家畜2方法中以猪感染最为常见,能引起母猪妊娠障碍、2.1细胞传代:按常规方法培养细胞[2]。取生仔猪急性死亡,给养猪业造成极大的危害。目前长良好的PK-15、ST、Vero细胞。该病尚无有效药物治疗,主要以疫苗免疫进行预用细胞消化液消化后,按1:3比例传代,分防,而决定疫苗质量的关键是病毒的效价。猪伪别分装至75 cm2细胞培养瓶置37℃、5%CO2培狂犬病病毒的增殖,除中国兽药典规定用CEF细养箱培养待长成单层备用。胞培养外,大量研究资料显示,PK-15、ST、CEF细胞制备:按药典附录制备方法制备Vero、BHK-21细胞也可以很好的用于病毒的CEF,24 h成单层备用。增殖。本实验室冻存有PK-15、ST、Vero细胞,2.2病毒增殖:弃去细胞生长液,将猪伪狂犬为了以后提供疫苗生产工艺改进相关数据,开展病病毒...  (本文共3页) 阅读全文>>