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猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用

猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)是导致猪繁殖障碍疾病的4种病原体[1]。这4种疾病是猪的多发病,常呈混合感染[2~4]。目前在很多猪场都同时存在这4种疾病,严重影响养猪生产。因此,对这4种病毒进行鉴别诊断具有十分重要的意义。这几种疾病的诊断通常采用常规的病原学和血清学检测方法,这些方法往往耗时长、繁琐或敏感性差。因此有必要建立快速的早期诊断方法,以便尽快采取有效的防治措施,减少这些疾病对养猪业造成的损失。多重PCR技术是指在同一反应体系中,加入多对引物,对多个目的基因同时进行扩增的方法。本研究利用4对特异引物建立了4种病毒的多重PCR方法,以期达到快速检测的目的。1材料与方法1.1病毒PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSV KY 35株、CSFV石门强毒株及猪瘟兔化弱毒疫苗株,均由中国兽医药品监察所鉴定、保存。PRRSV国内分离株B13株由中国兽医药...  (本文共4页) 阅读全文>>

《养猪》2010年03期
养猪

多重PCR方法用于检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断方法的建立

1引言猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)最初是由Tischer在PK-15细胞系的传代过程中发现的,当时认为是一种细胞污染物[1]。PCV分为PCV1和PCV2,PCV1无致病性,而PCV2具有致病性[2,3]。最近的研究表明,除断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)外,PCV2还与猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪增生性坏死性肺炎(PNP)、猪呼吸道病综合征(PRDC)、猪繁殖障碍、仔猪先天性震颤(CT)以及无名高热等疾病有关,现统称为猪圆环病毒相关性疾病(Porcinecircovirus associativity disease,PCVAD)[4]。细小病毒(PPV)属于细小病毒科细小病毒属,是引起母猪繁殖障碍的重要病原,同时也被认为与PMWS的病因有关。试验表明,用PCV2和PPV双重感染能够引起严重的PMWS临床症状和病理变化[5]。伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)又名...  (本文共4页) 阅读全文>>

权威出处: 《养猪》2010年03期
中国农业科学院
中国农业科学院

猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR方法及多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)是3种重要的猪传染病病原,流行病学调查表明,上述3种病毒广泛存在于猪群当中,且常常混和感染猪群而引起发病。虽然针对每一种病原的诊断方法已然广泛应用,但是常规的病原学、血清学诊断方法由于其费时、费力等劣势已很难满足实际生产的需要,因此,建立一种省时、省力、自动化程度且可以同时检测3种病原的方法就显得尤为重要。实时荧光定量PCR是20世纪90年代发展起来的一种检测核酸分子的新技术,SYBR Green-Ⅰ作为一种非序列特异性的荧光染料被广泛地应用与荧光定量PCR中,其原理是在PCR体系中加入SYBR Green-Ⅰ,通过荧光强度的变化,...  (本文共55页) 本文目录 | 阅读全文>>

河南农业大学
河南农业大学

几种主要的猪病毒性疾病多重SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的研究

猪瘟病毒(Hog cholera virus, HCV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪伪狂犬病毒(porcine pseudorabies virus, PRV)和猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是引起母猪繁殖障碍的4种主要病原体;引起种猪不育,即公猪睾丸肿胀,精液质量下降,失去种用能力;母猪表现为不发情,返情,不孕;妊娠母猪发生流产、早产、死胎、木乃伊、弱仔及新生仔猪发病且导致大量死亡等,给养猪业造成了巨大的经济损失。对这类传染病的有效控制是保证养猪业健康发展的关键因素之一。在动物流感中,猪流感是除禽流感以外经济意义最大,而且公共卫生意义特别重要。2009年墨西哥爆发的猪流感疫情导致数百人死亡,并且,猪流感引起的人类流感迅速在世界上传播开来。所以,猪流感的预防和控制...  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>

《上海畜牧兽医通讯》2017年05期
上海畜牧兽医通讯

猪细小病毒、猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型多重PCR方法的建立及初步应用

随着养猪业规模化和集约化方向发展,猪群常发生多病原混合感染、继发感染,其中猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)是较易混合感染的DNA病毒,是导致猪繁殖障碍综合征的主要病原体[1-4]。PPV与PCV2混合感染会明显促进PCV2病毒的复制,从而增强PCV2的致病作用[5]。由于这三种疾病在临床上呈现出相似的症状,又常常发生混合感染,常规的诊断方法很难将此症状相似的一类疾病同时加以区别,且常规的病原学和血清学检测方法又存在操作繁杂、费时费力、敏感性低等不足,尤其是感染多种病原时,难以应用常规方法进行早期快速检测。因此,建立准确快速、特异敏感的多重PCR诊断方法,对这些疾病的防治具有重要意义。由于多重PCR技术可以在1份样品中同时检测出多种病原体,且特异性和敏感性高、检测时间短、检测成本低,所以是一种较为理想的检测方法。本研究以PRV、PPV和PCV2基因序列保守区段为目标,通过合成特异性引物和优...  (本文共3页) 阅读全文>>

《江西农业学报》2017年09期
江西农业学报

猪伪狂犬病病毒野毒SYBR-Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的危害多种动物的一种以发热、奇痒(猪除外)和以脑脊髓炎为代表的神经症状的急性传染病。猪是PRV的主要贮存宿主及疫源动物。猪伪狂犬病常引起妊娠母猪繁殖功能障碍和初生仔猪的神经症状,仔猪感染率和死亡率极高,给世界养猪业带来巨大的损失[1-2]。猪伪狂犬病具有潜伏感染的特点,病毒可在耐过感染的猪体内终生潜伏,在一定条件下,病毒可能被激活,导致猪群复发感染,及时诊断是预防和控制该病的关键[1-3]。过去诊断猪伪狂犬病的方法有病毒分离鉴定、酶联免疫吸附试验、中和试验、常规PCR检测等等,但是过程繁琐、周期长,还存在污染和特异性差的缺点,给该病的临床检测和防治带来滞后性[4]。荧光定量PCR技术是在PCR技术基础上发展起来的一种新型检测技术,SYBR-GreenⅠ荧光信号的积累与扩增的双链DNA数量呈正相关。该方法操作简便、敏感度高...  (本文共4页) 阅读全文>>

《动物医学进展》2017年09期
动物医学进展

猪伪狂犬病病毒HN2012株的分离鉴定及gE基因遗传进化分析

伪狂犬病(Pseudorabies)又称奥耶斯基氏病(Aujeszky's disease),是由伪狂犬病病毒(Pseudora-biesvirus,PRV)引起的包括多种病畜和野生动物共患的一种急性传染病[1]。猪是该病的自然宿主和贮存者,可引起妊娠母猪的流产、产死胎和木乃伊胎,新生仔猪的大量死亡,病死率高达100%[2-3]。自1902年发现以来,伪狂犬病已在全球范围内流行,成为严重危害养猪业的重大传染病之一[4]。在中国,伪狂犬病自20世纪50年代被报道以来,给养猪业带来巨大经济损失。因此,我国于20世纪70年代引进Bartha-K61(减毒疫苗株)对该病进行预防,取得良好防控效果。自2011年10月,PRV变异毒株先后在国内一些省份的养猪场暴发,而这些养猪场大多使用Bartha-K61疫苗株进行了免疫预防[5-6]。2012年7月,河南省某猪场暴发疑似伪狂犬病,出现大批死亡。采集流产仔猪的脑组织分离到一株病毒,经过动物回...  (本文共5页) 阅读全文>>