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猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用

猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)是导致猪繁殖障碍疾病的4种病原体[1]。这4种疾病是猪的多发病,常呈混合感染[2~4]。目前在很多猪场都同时存在这4种疾病,严重影响养猪生产。因此,对这4种病毒进行鉴别诊断具有十分重要的意义。这几种疾病的诊断通常采用常规的病原学和血清学检测方法,这些方法往往耗时长、繁琐或敏感性差。因此有必要建立快速的早期诊断方法,以便尽快采取有效的防治措施,减少这些疾病对养猪业造成的损失。多重PCR技术是指在同一反应体系中,加入多对引物,对多个目的基因同时进行扩增的方法。本研究利用4对特异引物建立了4种病毒的多重PCR方法,以期达到快速检测的目的。1材料与方法1.1病毒PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSV KY 35株、CSFV石门强毒株及猪瘟兔化弱毒疫苗株,均由中国兽医药品监察所鉴定、保存。PRRSV国内分离株B13株由中国兽医药...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2003年06期
中国兽医学报

多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒

猪瘟是由单股 RNA病毒——猪瘟病毒 ( CSFV)引起的 [1~ 3] ,猪细小病毒感染是由单链线状 DNA病毒——猪细小病毒 ( PPV)引起的 [1 ,4 ,5] ,猪伪狂犬病是由线性双链 DNA病毒——伪狂犬病病毒 ( PRV)引起的 [1 ,6 ]。这 3种疫病是猪的多发病 ,并常呈混合感染 ,给养猪生产带来严重的影响。目前 ,对这 3种疫病的诊断通常采用常规的病原学和血清学检测方法 ,但耗时长 ,繁琐。为此 ,有必要建立快速的早期诊断方法 ,以便尽快采取有效的防治措施 ,减少这些疾病对养猪业造成的损失。本试验就一次同时检测出 CSFV、PPV和 PRV 3种病原体的多重 PCR方法进行了探讨1 材料与方法1.1 病毒株及其培养 猪瘟病毒 HL 9710 2 5株、JN985 2株、MS989株、MS0 15 2 4株、HT株 ,猪伪狂犬病病毒 MS97株、MD0 2株 ,均由本校家畜传染病教研室分离鉴定 ;猪细小病毒...  (本文共3页) 阅读全文>>

《动物医学进展》2004年06期
动物医学进展

多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒的研究——猪瘟病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒多重PCR引物设计

猪瘟、猪细小病毒感染、猪伪狂犬病是猪的多发病 ,且常呈混合感染。目前对 3种病的诊断多采用病原的分离及常规的血清学方法 ,但需时间较长。为此 ,有必要建立快速的早期诊断和检测方法 ,以便尽快采取有效的针对性防治措施 ,减少这些疾病对养猪业造成的损失。多重PCR技术是在同一PCR体系中 ,放入多对引物 ,对多种目的基因同时扩增的分子生物学诊断方法 ,它具有快速、敏感、特异等优点。因此 ,建立对猪瘟、猪细小病毒感染、猪伪狂犬病的病原体建立快速有效的多重PCR鉴别诊断方法是十分必要的。在建立多重PCR体系中 ,引物的设计是非常关键的 ,它决定着方法建立的成败 ,加之猪瘟病毒 (CSFV)是RNA病毒、猪细小病毒 (PPV)和猪伪狂犬病病毒 (PRV)是DNA病毒 ,G +C的含量在 4 8%~ 73 %之间 ,这对在各基因中保守区域内引物的设计增加了难度。本研究是利用计算机软件对已知病毒基因进行同源性分析 ,确定出扩增病毒基因的靶序列...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国兽医科学》2007年12期
中国兽医科学

江苏省猪高热病病例主要继发感染病毒的多重PCR检测

2001年以来,我国部分省区在每年的夏秋季节,暴发一种以高热、食欲下降、呼吸困难、部分妊娠母猪流产为特征的猪传染病。它发生于各年龄的猪,发病率高,几乎达到100%;死亡率随病程和继发感染的严重程度不同而异。该病来势凶猛,无特异防制方法,容易继发或并发其他病原体感染,最终导致病猪死亡,给养猪业造成了巨大的经济损失。与前几年相比,2006年该病在我国部分省区的发生尤为严重,主要表现为发病月份数的增加和死亡率的大幅提高。由于它的发病原因尚未完全明了,加之病猪的临床表现各异,尤其是并发症、继发病的多样性与复杂性,所以有必要了解高热病发病过程中主要继发病原的感染情况。为此,笔者采用江苏省2005~2006年猪高热病病例的部分病料,通过建立的多重PCR、多重RT-PCR方法,对猪高热病病例中的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)、猪生殖与呼吸综合征病毒(porcine repro-ductive a...  (本文共6页) 阅读全文>>

《动物医学进展》2005年11期
动物医学进展

应用PCR技术检测伪狂犬病病毒

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)又称猪疱疹病毒Ⅰ型,属于疱疹病毒科,是引起家畜和某些野生动物发热、奇痒(猪除外)和脑脊髓炎为主要症状的重要传染病病原,其对猪的危害最大,可引起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊以及初生仔猪的高死亡率,给养猪业造成巨大损失。到目前为止,已有40多个国家报道发生本病[1-2]。我国近几年来随着养猪业向规模化和集约化发展,猪伪狂犬病不断蔓延和扩大,危害越来越严重。随着现代分子生物学技术的发展,国内外已经建立了聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和核酸探针等分子诊断技术,许多学者已将PCR应用于PRV的检测[2]。由于PRV毒力主要由TK、gE、gI、gC、gG等多基因控制,而gE基因是促进细胞融合及诱导保护性免疫非必需的糖蛋白基因,在所有PRV野毒株中均能稳定表达,且目前所用的基因缺失苗基本上为gE基因缺失,故gE已被作为PCR诊断的最佳基因[...  (本文共3页) 阅读全文>>

《华北农学报》2009年02期
华北农学报

猪伪狂犬病病毒及猪细小病毒复合PCR检测方法的建立

猪伪狂犬病是由线性双链DNA病毒-伪狂犬病病毒(PRV)引起的、猪细小病毒感染是由单链线状DNA病毒-猪细小病毒(PPV)引起的以母猪繁殖障碍为特征的传染病[1]。这两种疫病在临床上常呈混合感染,主要使猪表现为死产、木乃伊胎、弱产等繁殖障碍[1-4]。目前关于伪狂犬病及细小病毒病的实验室诊断方法有很多,但都有各自的不足之处。随着现代分子生物学技术的发展,PCR诊断已被广泛研究和应用。目前用于PRV和PPV的PCR诊断方法需分别进行诊断,实际操作起来比较繁琐,成本也相对较高。而近年来才开始应用的复合PCR则可以较好地解决这一问题[5-7],本研究旨在建立PRV和PPV的二联PCR方法,即在同一PCR管中加入两种病毒的引物,用被检材料中的模板进行扩增,以达到简化诊断程序、快速鉴别诊断和最大限度降低诊断成本的目的。1材料和方法1.1病毒株和细胞株猪伪狂犬病毒(PRV)标准毒株购自中国兽药监察所;猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV...  (本文共4页) 阅读全文>>