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16SrRNA基因在诊断慢性非细菌性前列腺炎中的应用

检出机体内存在病原菌是诊断细菌性感染疾病的重要指标。到目前为止,临床确立细菌性感染的诊断仍依赖于细菌培养法,但有些细菌在常规和特殊环境中很难生长,不易通过细菌培养来鉴定。近年来分子生物学技术迅速发展,以聚合酶链反应(PCR)技术的应用尤为广泛[1]。本研究应用PCR技术特异性扩增细菌16SrRNA基因方法,对临床诊断为慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和尿道拭子作细菌16SrRNA基因检测,取得了较好的结果,现报道如下。1材料与方法1.1材料1.1.1标本来源标本来源于我院泌尿外科门诊2005年1月-2006年1月诊断为慢性非细菌性前列腺炎的患者70例,年龄18-64岁,平均34.5岁。1.1.2标本收集和保存在无菌条件下取尿道分泌物拭子和前列腺按摩液,将尿道拭子和前列腺液分别用无菌水洗脱后-20℃保存。1.1.3菌株和人基因组DNA、HBV-DNA、白色念珠菌来源菌株来源于我院检验科微生物室保存的常见引起前列腺炎的菌株10株,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《国外医学.临床生物化学与检验学分册》2003年04期
国外医学.临床生物化学与检验学分册

聚合酶链反应自动化的历程及其进展

1983年由CetuS人类遗传系的Kary Mulhs发明的聚合酶链反应(polymerase Chain reaetion,PCR)方法开创了分子生物学的新纪元。在感染性疾病的病原学诊断和治疗监测中,成为不可替代的强大工具。为了更加简单、快速、有效和经济地检测各种感染性疾病病原体及监控疾病治疗过程,PCR的自动化成为一种必然趋势。本文简述了PCR自动化的历程和目前现状,并对其前景进行了展望。概述 微生物学家和临床工作者都在努力探索快速、有效地检测病原微生物以及监测感染性疾病治疗的更好方法。传统的微生物学检测如培养方法,需要自然产物如绵羊红细胞、组织培养、动物或植物的提取物;免疫学方法则需要动物或细胞培养以产生抗体。这些传统方法大都需要大量的人力、较长的时间、相对较高的经济成本,同时过程不易控制川。尤其在那些不生长、生长缓慢或难以生长的“苛求微生物”如沙眼衣原体((:’f)、淋病奈瑟氏菌(NG)、结核杆菌(MbT)、肝炎病毒等,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国煤炭工业医学杂志》2001年02期
中国煤炭工业医学杂志

聚合酶链反应与ELA法检测560例HBV结果分析

我院用PCR和EIA法同时对 5 6 0例血清进行HBV测试 ,进行两种方法敏感度的可行性论证。1 材料和方法5 6 0份标本来自门诊及住诊患者 ,其中 96份以前EIA法测定为HBsAg阳性 ,46 4份为随机标本。HBVEIA试剂盒购于上海科华公司 ,批号 981 1 1 7,灵敏度Ing/ml;为合格部颁标准 ;乙肝病毒基因检测试剂盒购于上海复华公司。HBVEIA法、HBV -DNAPCR法均按试剂说明书进行操作。2 结果34例HBsAg、HBeAg、抗 -HBC ,阳性 ,2 8例HBsAg、抗 -HBe、抗 -HBc ,阳性 ,2 3例HBsAg、抗 -HBc ,阳性 ,2 8例HB sAg ,一项EIA法检测为阳性 ,PCR结果为阳性。 1 4例抗 -HBc ,一项EIA法检测为阳性 ,PCR结果 9例HBV...  (本文共2页) 阅读全文>>

《江西医学院学报》1980年20期
江西医学院学报

聚合酶链反应对儿童结核性脑膜炎的检测及意义

聚合酶链反应对儿童结核性脑膜炎的检测及意义周红平饶兆英(江西省儿童医院中心实验室南昌330006)随着全球结核病发病率的提高,儿童结核性脑膜炎的发生率也相应增多。典型的儿童结脑诊断并不困难,但对早期或不典型的儿童结脑在诊断上就有一定困难。传统的结核杆菌病原学检查方法有涂片法和培养法,但涂片法阳性率低,培养法耗时长。本文根据国外学者报道,采用聚合酶链反应对38例儿童结核性脑膜炎患儿的脑脊液进行了检测,结果报告如下。1材料与方法1)对象:38例儿童结核性脑膜炎患儿均符合儿科学诊断标准,男29名,女9名。脑脊液常规生化检查,蛋白>0.4g/L,糖<2.5mmol/L,氯化物<120mmol/L。经抗痨治疗后有效。同时收集了10名化脓性脑膜炎,6名病毒性脑膜炎患儿的脑脊液作对照检查。2)方法:(1)脑脊液处理,取脑脊液1ml于Enppendrof离心管中,1.2000r/min离心10min,弃上清,沉淀加入DNA提取液(溶菌酶、蛋白酶...  (本文共1页) 阅读全文>>

《内蒙古医学院学报》1980年40期
内蒙古医学院学报

聚合酶链反应实验中使用石蜡包埋材料的一点体会

聚合酶链反应(PCR)技术是近年发展起来的一种快速、特定的DNA片断体外扩增技术,为单克隆测序技术的一种。此法操作简单,能在普通实验室完成。我们经1年多的摸索,就PCR实验中遇到的有关石蜡包埋组织中DNA提取和扩增的一些问题及解决方法归纳如下。a.在选择石蜡标本时,我们进行了对比发现,5年之内标本基本可获得中或大分子量DNA,而5年以上甚至10年标本,其获得的DNA降解很大,DNA片断很小,不易再进行PCR扩增。其原因可能与我室组织固定液(10%福尔马林)时间过长,导致DNA变性。应采取的方法是:外科手术后标本应马上固定,固定液最好是95%乙醇,以利于保存DNA;其次可用10%中性福尔马林新鲜固定液(因DNA在酸性环境中易降解)。尽量不要选择含凝血块和坏死组织过多的蜡块,影响DNA提取。浸蜡、包埋温度最好不要超过70℃,浸蜡时间不超过5h。b.在蜡块的取材多少上,说法不一,经反复摸索,我们的经验是,取5...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中华医学杂志》1960年60期
中华医学杂志

长链聚合酶链反应在低密度脂蛋白受体基因限制性片段长度多态性研究中的应用

长链聚合酶链反应在低密度脂蛋白受体基因限制性片段长度多态性研究中的应用周天鸿S·BahringH·Schuster目前,家族性高胆固醇血症(FH)基因诊断是建立在限制性片段长度多态性(RFLP)上[1],但由于低密度脂蛋白(LDL)受体基因的内含子序列尚未阐明,一些位于长内含子的RFLP位点,无法利用PCR技术,只能依赖Southernblot方法。例如,内含子15以上有3个RFLP位点,其中PvuⅡ位点是个很重要的位点,但长期以来只能采用Southernblot技术,因而限制了在临床上的应用。为此,我们将长链PCR技术应用到内含子15的RFLP研究中,得到满意的结果。一、材料和方法1.人基因组DNA制备:取40例FH患者(德国人)的DEAE-抗凝全血10ml,用TritonX-100裂解法抽提基因组DNA[2]。制备的DNA在260nm用吸光度A值定DNA量。2.长链PCR扩增反应:根据Hobbs等[3]报道的序列合成一对PC...  (本文共3页) 阅读全文>>