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肺炎支原体克隆基因的鉴定

肺支原体(MP)是人类原发性非典型肺炎的病原体。原发性非典型肺炎在儿童和青、中年中发病率很高,因而引起人们的极大关注。为从分子水平对MP进行研究,国外学者已建立了MPP;蛋白的克隆基因“’么,。我们在提取和纯化MP DNA的基础上,将其DNA酶切片段重组到pBR322的Pstl位点,再转入E.CoLIRR,建立了MP克隆基因重组菌株,但此克隆基因有何特性,是否含有MPD NA片段尚不清楚。我们采用MP DNA探针检测等不同方法对此克隆基因进行了鉴定,为MP的病原学诊断及分子流行病学调查等提供了技术方法与科学依据。1材料与方法 1。IMP克隆基因重组菌株E。CoLiRR;(pCM::)及E.CoLi RR:(pcM 25)由中国医科大学微生物教研室提供。限制性核酸内切酶Pstl、pBR322及DNasel购自北京华美生物工程公司。a(“么p)dATp(3o00Ci/mmol)购自中国科学院原子能研究所。 1。2快速抽提电泳检测MP...  (本文共3页) 阅读全文>>

福建农林大学
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密码子优化技术在肺炎支原体检测试剂研发中的初步应用

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, Mp)是儿童和青少年非典型肺炎的首要病原微生物,我国5岁以下儿童约有2110万临床肺炎新发病例(0.22次/人年),且呈逐年递增趋势。Mp引起的肺炎临床表现与肺炎球菌、流感嗜血杆菌、肺炎衣原体等病原体感染症状相似,其临床治疗以大环内酯类、喹诺酮类药物为主,对常规治疗肺炎的β-内酞胺类抗生素如青霉素、头孢菌素等不敏感。因此,研制灵敏、特异、便捷的快速早期诊断试剂对于肺炎支原体感染的诊断和治疗意义重大。目前国内外用于Mp感染的诊断方法主要有血清学诊断和PCR诊断。常规实验室和临床以基于ELISA或被动凝集法的血清学诊断方法为主。用于诊断试剂的抗原多由提取纯化的病原体细胞膜蛋白或由Mp全基因组特异性扩增得到的黏附蛋白基因序列转入不同表达系统进行体外表达而获得。已有报道具有免疫原性和抗原活性的Mp蛋白主要有细胞表面黏附蛋白P1、P30、P116等,它们能够与宿主细胞受体结合,引起...  (本文共100页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
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猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是引起猪气喘病(MycoplasmaPneumoniae of swine,MPS)的病原。MPS广泛分布于世界各地,以接触性、高度传染性、慢性、高发病率和低死亡率为特点,由于Mhp能够破坏呼吸道黏膜-纤毛屏障,从而继发其他致病菌的感染,给养猪业造成巨大的经济损失。该病早期检测比较困难以及缺乏特效的防治药物,因此在疾病控制方面至今未能取得令人满意的效果。伴侣蛋白Dnak是猪肺炎支原体的特异性外膜蛋白,伴侣蛋白Dnak的C端是其主要的抗原决定簇。P97蛋白是目前研究最为深入的Mhp表面的黏附因子,P97蛋白的C端也是其主要的抗原决定簇。本研究依据GenBank中公布的232株基因序列(AE017332),以Mhp中国分离株Yin-1为模板利用合成的特异性引物,扩增了DnaK基因的C末端,得到500bp的目的片段。扩增了P97基因的C末端,得到670bp的目的片...  (本文共57页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
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猪肺炎支原体P46蛋白与DnaK蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

猪支原体肺炎(Mycoplasma Pneumoniae of Swine,MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)引起的一种慢性呼吸道疾病,其主要临床症状为咳嗽和气喘,病变特征是在肺尖叶、心叶、中间叶和膈叶前缘呈肉样或虾肉样实变,该病发病率高而死亡率低。本研究利用Mhp 168株F350代全菌蛋白免疫小鼠,以期获得能稳定分泌针对Mhp细胞膜蛋白P46蛋白、热休克蛋白DnaK蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。1.抗Mhp膜蛋白P46蛋白单克隆抗体本研究利用本实验室保存的Mhp P46蛋白重组阳性质粒大量表达并纯化的P.46蛋白作为检测原,Mhp168株F350代全茵蛋白作为免疫原,按400μg/只的剂量与等量弗氏完全佐剂进行乳化,经皮下多点注射免疫4-6周龄BALB/c小鼠。每隔2周用弗氏不完全佐剂乳化的168全菌蛋白免疫1次,并在融合前3d用168全菌蛋白加强免疫1次。取脾细胞与Sp2/...  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
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猪肺炎支原体P97 C末端基因重组腺病毒的构建及其免疫效果的评价

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp)是引起猪气喘病(Mycoplasma Pneumoniae of swine,MPS)的病原。MPS在世界范围内广泛分布,以高接触性、高传染性、慢性、高发病率和低死亡率为特点,对世界养猪业造成巨大的经济损失。目前常用的Mhp疫苗存在着产量低、成本高、反应较大、免疫途径不易被一般用户接受等缺陷,因此迫切需要研制一种高效、安全、廉价的新型疫苗来控制该病的流行。Mhp表面的黏附因子在Mhp致病中起关键作用,其对猪呼吸道上皮细胞的粘附是介导Mhp对动物机体致病的第一步。P97蛋白是最主要的也是研究最为深入黏附因子,其纤毛结合位点主要位于该蛋白的C端,同时C端也是其主要的抗原决定簇所在区。本研究依据GenBank中公布的232株基因序列(AE017332),以Mhp中国分离株Yin-1为模板利用合成的特异性引物,扩增了P97基因的C末端,得到670bp的目的片段。并...  (本文共60页) 本文目录 | 阅读全文>>

内蒙古农业大学
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丝状支原体PG3株和绵羊肺炎支原体内蒙分离株基因组测序及可变表面脂蛋白基因克隆表达

羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)是由丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp. capri, Mmc)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)和在我国还未发现的山羊支原体山羊亚种(Mycoplasma capricolum subsp. capricolum, Mcc)引起的羊的高度接触性传染病。以高热、咳嗽、喘气、渐进性消瘦,肺间质增生性炎症、胸和胸膜发生浆液性和纤维素性炎症为主要病变特征。本病自首次报道以来,在畜牧业以羊养殖业为主的不发达国家广泛流行,给各国带来了严重的经济损失。由于药物治疗的效果不尽人如意,传统疫苗本身具有难以克服的局限,所以人们开始致力于新型药物和疫苗的研制。目前几乎没有保护性抗原基因的筛选及其详细的研究报道,因此为了寻找编码保护性抗原基因,本研究在对内蒙古地...  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>