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血管内皮生长因子干扰RNA对鼠视网膜中血管内皮生长因子mRNA表达的抑制作用

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是近几年内迅速发展起来的基因沉默方法,用RNAi的方法可以对哺乳动物细胞中特殊的基因表达进行抑制[1]。本实验采用针对VEGF的小片段干扰RNA(small in-terference RNA,siRNA),研究内皮生长因子(vascularendothelial cell growth factor,VEGF)siRNA对高氧诱导的C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型视网膜VEGF mRNA表达的抑制作用,探讨其对视网膜新生血管治疗的可行性。1材料和方法1.1材料低分化人鼻咽癌细胞株CNE-2Z购自本校细胞中心。C57BL/6J小鼠由中国科学院上海实验动物中心提供,清洁级。脂质体LipofectamineTM(LF2000)购自Invitrogen公司。RT-PCR相关试剂购自深圳晶美生物技术公司。VEGF干扰RNA表达质粒(19nt,VEGF siRNA碱基序列为:...  (本文共5页) 阅读全文>>

中南大学
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HIF-1α和VEGF小干扰RNA抑制鼠视网膜新生血管的研究

第一章:HIF-1α和VEGF小干扰RNA对人血管内皮细胞HIF-1αl和VEGF表达的抑制目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)小片段干扰性RNA(siRNA)对人血管内皮细胞HIF-1α和VEGF表达的影响。方法:构建HIF-1αsiRNA重组质粒。将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC-12)分成常氧(20%)组和低氧(1%)组。低氧组中,采用脂质体Lipofectamine~(TM)2000(LF2000)分别转染空载体质粒(空载体组)、HIF-1αsiRNA(HIF-1α组)、VEGF_(165)siRNA(VEGF组)和HIF-1αsiRNA+VEGF_(165)siRNA(共转染组),低氧组中未转染的细胞为低氧对照组。常氧组细胞不做转染。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后重组质粒的表达;RT-PCR和免疫细胞化学法检测细胞中HIF-1α和VEGF基因和蛋白表...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
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VEGF干扰性RNA对鼠视网膜新生血管的抑制作用

目的:探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelia growth factor,VEGF_(165))小干扰RNA(small interference,siRNA)对鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法:①采用Smith的方法,将出生后7d的C57BL/6J小鼠置于氧舱,控制氧浓度75%±3%,5天后回到正常氧环境,喂养7天后处死;采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)荧光造影视网膜铺片观察视网膜新生血管的形态,鉴定视网膜新生血管模型;②将出生后7d的8只小鼠于空气中喂养,为正常组。③另24只出生后7d的小鼠放入75%±3%的高氧环境中(同Smith方法),5d后出舱并随机分为3组:对照组、空载体组和基因治疗组。出舱当天,空载体组小鼠玻璃体腔内注射空载体pSilencer2.1-U6 hygro,基因治疗组注射VEGF_(165)siRNA表达质粒pSilencer2.1-U6 hygro,均采用脂...  (本文共47页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
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VEGF特异性小干扰RNA对低分化鼻咽癌细胞VEGF表达的抑制作用

目的:研究血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor,VEGF)特异性的小片段干扰RNA(siRNA)对低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)VEGF表达的抑制作用,为视网膜新生血管的治疗提供新的途径。方法:体外培养人鼻咽癌细胞CNE-2Z,并分成正常氧状态培养组(20%)和低氧(5%)培养组。采用脂质体(LF2000)将VEGFsiRNA转染两组细胞,并采用免疫细胞化学和ELISA检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGF蛋白质表达的差异。结果:正常氧状态下培养的CNE-2Z细胞有VEGF165及VEGF121蛋白质表达,主要见于细胞浆中(棕色颗粒),低氧状态下VEGF表达增多。ELISA结果显示,正常氧状态下:未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为:419.72pg/ml、410.61pg/ml、320.76pg/ml;低...  (本文共47页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华眼底病杂志》2006年04期
中华眼底病杂志

血管内皮生长因子干扰性RNA对鼠视网膜新生血管的抑制作用

视网膜新生血管性疾病是一组严重的致盲性眼病,目前尚无有效的药物疗法。传统的治疗方法主要是视网膜激光光凝、冷冻和玻璃体切除,然而这些治疗本身具有破坏视网膜正常结构和影响视功能的副作用,因而非常有必要从分子和基因水平寻找更有效的方法来阻止和预防视网膜新生血管的发生和发展。血管内皮生长因子(VEGF)小片段干扰性RNA(siRNA)在抗肿瘤新生血管临床研究中已经取得了显著疗效,能有效抑制肿瘤的生长及转移。我们通过高氧诱导C57BL/6J小鼠视网膜新生血管模型,探讨VEGF165siRNA在抑制视网膜新生血管方面的作用。1材料和方法1.1视网膜新生血管模型的建立及鉴定按文献[1]的方法高氧诱导C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-dextran)荧光造影后视网膜铺片,荧光显微镜下观察视网膜血管形态变化,以鉴定视网膜新生血管模型。1.2VEGF165siRNA表达质粒对鼠视网膜新生血管的抑制作用动物...  (本文共2页) 阅读全文>>

《眼科新进展》2011年05期
眼科新进展

促红细胞生成素小干扰RNA对大鼠视网膜新生血管抑制作用的实验研究

目的最近研究表明促红细胞生成素(erythropoietin,EPO),一种氧调节的促进红细胞生成的激素,与视网膜新生血管的形成紧密相关。在缺氧诱导的视网膜增生性疾病中,视网膜内EPO mRNA的表达水平显著提高。本文探讨了视网膜EPO mRNA的小干扰RNA(siRNA)作为一种潜在的治疗药物,在抑制视网膜新生血管形成及阻止视网膜增生性疾病进程中的作用。方法制作氧诱导视网膜病变的大鼠模型。使用Real-time RT-PCR检测在整个视网膜及激光捕获的视网膜血管和神经元层中EPO和Epo受体(EpoR)含量的变化。用氧敏感的低氧探针评估视网膜缺氧状态。模型组大鼠分别于siRNA,于出生后...  (本文共1页) 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

VEGF小干扰RNA抑制视网膜新生血管的研究

目的视网膜新生血管性疾病,如糖尿病性视网膜病变,缺血性视网膜静脉阻塞和早产儿视网膜病变等均会导致视网膜新生血管。血管内皮生长因子(Vascularendothelial growth factor VEGF)是视网膜新生血管形成最主要的生长因子。抑制VEGF的表达,可以减少视网膜新生血管的形成。本文采用RNA干扰技术,从分子水平抑制VEGF的表达。研究的目的是构建VEGFsiRNA的表达质粒,以小鼠氧诱导视网膜病变新生血管动物模型为研究对象,探讨VEGF小干扰RNA(VEGFsiRNA)对小鼠视网膜新生血管模型中视网膜新生血管的抑制作用,评价其治疗视网膜新生血管性疾病的效果。方法本研究包括4部分:1.分别设计针对猴和小鼠的VEGF小干扰RNA,以pSilencer2.1-U6neo为质粒载体,构建VEGFsiRNA表达质粒,转化大肠杆菌,酶切、测序鉴定。2.体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞分成常氧组和二氯化钴缺氧组。缺氧组中,脂...  (本文共128页) 本文目录 | 阅读全文>>