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卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染神经元细胞的特点分析与差异基因筛选

目的:检测卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus,KSHV)能否在体外感染神经元细胞SH-SY5Y,检测感染与未感染神经元细胞的增殖、迁移等特点并筛选差异表达基因。方法:(1)体外常规培养islk.219细胞,采用强力霉素与丁酸钠诱导其释放KSHV病毒于上清液中,采用病毒浓缩法提取KSHV,并用其感染神经元细胞SH-SY5Y,48h后采用荧光显微镜观察确定感染成功,并观察细胞形态变化。(2)采用实时定量PCR(real-time-PCR,RT-PCR)检测KSHV潜伏态基因潜伏相关核抗原(Latency-associated Nuclear Antigen,LANA)与裂解态基因ORF26、K8.1A、RTA的m RNA表达水平。(3)采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测了KSHV潜伏态基因LANA与裂解态基因RTA、K8.1A的  (本文共60页) 本文目录 | 阅读全文>>

南昌大学
南昌大学

大鼠脊髓背角Ⅱ层表达T型钙电流的神经元的形态及电生理特性研究

目的:T型钙通道,也称为低电压激活钙通道,是电压依赖型钙离子通道家族中的成员,有三种亚型:Cav3.1、Cav3.2和Cav3.3,广泛分布于中枢及外周神经系统,其中就包括脊髓背角II层,即胶状质(Substantia gelatinosa,SG)区。SG区是伤害性刺激向中枢传递的初级门户,主要由兴奋性和抑制性中间神经元组成,与疼痛信息的传递与整合密切相关。为了进一步探讨T型钙通道在痛信息传递中的作用,本实验研究了3-5周龄幼年SD(Sprague-Dawley)大鼠脊髓背角SG区表达T型钙电流的神经元的形态及电生理特性,以期为揭示T型钙通道在疼痛传导通路中的作用及机制提供理论基础。方法:首先,选取幼年雄性SD大鼠,制作450μm的脊髓腰骶膨大部位(L1-S3)横切片,使用全细胞膜片钳技术记录SG神经元的电生理特性:包括主动膜特性、被动膜特性以及T型钙电流;并运用T型钙通道阻断剂氯化镍、TTA-A2等药物,研究这些药物对T型钙电...  (本文共55页) 本文目录 | 阅读全文>>

《兰州大学学报》1988年03期
兰州大学学报

花背蟾蜍坐骨神经中神经元的观察

近年来,对人和动物的神经元已有多方面的研究和报道“一“’.在以上工作的启发下,对花背蟾蛤坐骨神经中的神经元作了全面的观察,发现了坐骨神经中有大量的神经元分布,与人脊神经前根中神经元的分布是有差异. 材料与方法 取蟾赊坐骨神经,并将它分为前、中、末三部分,近脊髓端约1.ICm为前段:紧接前端到膝弯曲部约1.7cm为中段;末端是膝弯曲到小腿肌肉的神经纤维约1.scm.分别固定于中性福尔马林盐水24小时,经常规脱水;透明;各段分别石蜡连续纵向切片,片厚6林m,分别用H.E和甲苯胺兰染色,在光镜下观察,并计神经元数,计数时以看到细胞核和尼氏颗粒为准,并测量细胞的大小. 同时,每一只蟾赊取脊神经节做对照,方法,染色与上相同,和坐骨神经中神经元相比较. 观察结果 抽样观察20条坐骨神经,以甲苯胺兰染色为主. (一)细胞位置:神经元分布于坐骨神经纤维之内,但邻近脊髓端神经元多,而离脊髓远端神经元少.大多数神经元是成群分布,很少见有单个存在.神...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生理科学进展》1989年03期
生理科学进展

膜受体可介导糖皮质激素诱导的神经元膜的超级化

自幽体激素的二阶模式作用机理提出以来,认为菌体激素通过细胞膜以后与胞桨受体相结合,再调节基因表达,但此机理不能显示靶细胞的电位变化。有人通过锗皮质傲素诱导神经元膜电位超极化的研究,伦证近年一些研究者提出的踏体介导细胞膜的电位变化。这种新机理对研究神经系统具有重要的生理学意义,因为快速的膜效应是神经元功能的基础。实验以豚鼠的带内脏神经的腹腔神经节为标本,用Kr比、溶旅或考的松等溶液进行神经节表面灌流,细胞内微电极记录电位变化。实验结果表明:(1)用1。一、10一mol/L不同浓度的半珑拍酸考的松(F)液,对豚鼠神经节表面灌流,可引起神经细胞膜电位相应的不同幅度的超极化,超极化的潜伏期少于2 min;(2)在含F的低CaZ+/高Mg卜溶液作用下,神经元膜电位超极化的同时,有细胞输人阻杭的明显增高,(3)Ru 38486与细胞中糖皮质激素胞浆受体有高度的亲...  (本文共1页) 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

大脑皮层神经元体外诱导分裂研究

传统的观点认为,神经元是终末分化的细胞,不再具有分裂增殖的能力。但是,我们实验室在以往的研究工作中,运用免疫双标记、连续摄影和膜片钳方法,发现成年大鼠来源的神经干细胞诱导分化的神经元与新生大鼠来源的皮层神经元在一定条件下可以分裂。分裂神经元表达分化神经元的特异性蛋白和神经递质,并且具有分化神经元的典型电生理特征。前期工作初步提供了分化神经元可以分裂的证据,本研究用现代生物医学技术对神经元分裂问题进行了进一步的探讨。在第一部分的实验中,我们首先进行了皮层神经元的混合培养,同时运用免疫细胞化学的方法,对混合培养的神经元进行了PCNA与nestin的检测。结果显示培养物中有PCNA阳性细胞,但是并没有nestin阳性细胞,表明培养物中没有神经干细胞与前体细胞,仅仅存在有胶质细胞与成纤维细胞,可以用于神经元分裂的研究。为了进一步的研究神经元分裂的分子机理,必须获得高纯度的神经元,高纯度神经元的培养极其困难。我们对文献报道的原代神经元纯化...  (本文共126页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

大剂量GC对PVN神经元合成CRH的调节及机制研究

促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)作为下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)最上级的激素,启动了HPA轴对应激原的应答;同时,CRH也参与了交感-肾上腺髓质系统的活化。因此,一般认为CRH是应激过程中最重要的始动因子之一,CRH分泌增加可作为反映机体应激状态的客观指标。传统认为,糖皮质激素(GC)与其胞浆受体(iGR)结合后,可通过直接或间接方式抑制CRH的表达。因此,大剂量GC应对CRH具有非常强烈的负反馈抑制作用。但是,有研究显示,大剂量(≥10-6mol/L)GC并不能完全抑制下丘脑CRH的生成,下丘脑仍可有明显的CRH的合成与分泌。提示GC在CRH合成与分泌过程中可能还有更为复杂的调节作用和机制存在。另一方面,此时血液GC浓度远远超出iGR结合饱合浓度(高出上千倍),提示这些现象可能是通过经典的GR以外的途径发挥作用的,而与新近认识到的GC膜受体(mGR)可能有密切关系。因此,我们推测大剂量GC可能通过其细胞膜上受体mGR对...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>