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禾谷镰孢菌对多菌灵抗药性研究

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本文研究了引起小麦赤霉病的禾谷镰孢茵(Fusarium graminearum)对多菌灵的抗药性监测方法及抗药菌株性质。对菌落直径法、孢子萌发法和离体麦穗法等抗药性监测方法进行了比较,结果认为抗药性大规模监测,可挑取小麦病穗上的病原物在含10μg/ml多菌灵的PSA平板上直接测定。抗药性水平测定则可用菌落直径法在含系列浓度杀菌剂的PSA平板上测定,以EC_(50)或MIC值作评价参数。监测自然界中抗药性子囊孢子的比例可短期预测抗药性小麦赤霉病的流行程度。以含多菌灵10μg/ml的PSA平板作为划分小麦赤霉病抗性菌株与敏感菌株的标准,1997~20O0年对江苏、浙江、上海、湖北采集到的小麦赤霉病共6062个菌株进行了抗药性监测,发现小麦赤霉病菌已对多菌灵产生抗药性。抗性频率有上升趋势,而且抗性频率在地区间分布不平衡。其中,浙江海宁市抗性频率最高,1999年两次用药的田块抗性频率达72.34%。田间分离到的所有小麦赤霉病抗药性菌株对  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

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新型杀菌剂氰烯菌酯对禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)的作用方式及抗药性遗传研究

氰烯菌酯(2-氰基-3-氨基-3-苯基丙烯酸乙酯,试验号:JS399-19)是由国家南方农药创制中心江苏基地最新合成的一种对镰孢菌具有较高活性的化合物,特别是对禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)菌丝生长具有强烈的抑制活性,显示了该化合物具有防治麦类赤霉病的应用前景。在新型杀菌剂进入市场之前研究其作用方式及抗药性遗传,对科学制定该杀菌剂的开发和应用策略具有重要意义。离体条件下,采用菌丝生长测定法测定该药剂对禾谷镰孢菌抗性菌株和敏感菌株的生长抑制活性;同时采用孢子萌芽测定法测定了其对禾谷镰孢菌分生孢子萌芽的影响。结果表明,氰烯菌酯能够强烈地抑制禾谷镰孢菌敏感菌株菌丝的生长,ECso值分布在0.092~0.141μg/mL之间;并可降低敏感菌株分生孢子的萌发速率,以及影响其萌发的方式,使芽管从分生孢子基部和中间细胞萌发的比率增加;同时氰烯菌酯使敏感菌株分生孢子膨大畸形,并使其芽管肿胀、扭曲,明显抑制其芽管的伸长生长...  (本文共142页) 本文目录 | 阅读全文>>

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禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)对多菌灵抗药性分子机制的研究

本文克隆了禾谷镰孢菌野生型和多菌灵抗药性菌株的p2-微管蛋白基因(β2-tub)全序列,明确了β2-tub突变类型与该菌对多菌灵抗药性水平间的关系,并通过基因功能互补验证确定β2-tub为禾谷镰孢菌对多菌灵的抗药性基因;进一步通过人工点突变技术研究了β2-tub双点突变中各个突变与抗药性的关系,探讨了p1-微管蛋白基因的关键氨基酸的突变与抗药性的关系及其生物学功能。以禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)标准菌株PH-1的β2-微管蛋白基因(β2-tub)部分序列(genbank登录号:FG06611.1)为参考,扩增了野生型菌株2021的β2-微管蛋白基因全长cDNA序列和基因全长序列。测序结果表明,野生型菌株2021的β2-微管蛋白基因编码区共1713bp,含有6个内含子,与标准菌株PH-1的β2-微管蛋白基因编码区相比有13个核苷酸的差异;该基因可编码477个氨基酸,其编码的第7位氨基酸(Ile)与标准菌株...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

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灰葡萄孢菌抗多菌灵β-微管蛋白基因在禾谷镰孢菌中的表达研究

禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)是引起赤霉病最主要的病原菌之一。赤霉病不仅严重影响小麦的产量,而且降低小麦的品质,禾谷镰孢菌可产生多种衍生真菌毒素及次生代谢物质,如脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol, DON)和雪腐镰刀菌烯醇(Nivalenol, NIV)等,可引起人类和哺乳动物中毒,严重威胁着人和动物的健康。灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是我国许多果树、蔬菜、草莓、花卉等植物上的重要病害,尤其在保护地生产的蔬菜及草莓上引起果实腐烂,损失比较严重。自1970年沈阳化工研究院张少铭等实现多菌灵的工业化生产以来,多菌灵等苯并咪唑类杀菌剂用于赤霉病和灰霉病的防治至今已有40多年的历史。苯并咪唑类药剂可与植物病原真菌细胞的β-微管蛋白结合,阻止纺锤丝的形成,从而抑制细胞有丝分裂,植物病原真菌在生物进化过程中保持了微管蛋白基因的随机突变性质,以适应不良的生存环境,因此植物病...  (本文共148页) 本文目录 | 阅读全文>>

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禾谷镰孢菌Fusarium graminearum Schwabe两个β-微管蛋白基因功能及对多菌灵的抗药性分子机理

微管是构成真核生物细胞骨架的主要成分,在细胞的生命活动过程中起重要作用。α-和β-微管蛋白是构成微管的主要成分,而β-微管蛋白也是多菌灵等苯并咪唑杀菌剂的作用靶标,其特定位点的突变将导致苯并咪唑杀菌剂抗性。禾谷镰孢菌是我国引起小麦赤霉病的主要病原菌,多菌灵是防治该病害的主要药剂之一,但多菌灵对禾谷镰孢菌的作用表型及禾谷镰孢菌对多菌灵的抗性表型与其它植物病原真菌有差异。本论文通过观察多菌灵对禾谷镰孢菌的细胞学尤其是有丝分裂的影响,明确多菌灵对禾谷镰孢菌的作用机制;通过研究禾谷镰孢菌两个β-微管蛋白基因的敲除突变体、与GFP的融合表达突变体的形态学和生理学表型、两者在菌体不同阶段的表达差异以及两个β-微管蛋白在细胞内的定位,从而明确禾谷镰孢菌两个β-微管蛋白基因的关系以及在禾谷镰孢菌生命活动过程中的作用,确定多菌灵对禾谷镰孢菌的作用靶标及禾谷镰孢菌对多菌灵抗性的机理,从而为禾谷镰孢菌的抗药性治理以及以新的微管蛋白靶标药剂的设计提供重...  (本文共205页) 本文目录 | 阅读全文>>

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禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)对多菌灵抗药性基因的克隆

本文确证了10个禾谷镰孢菌供试菌株对多菌灵的敏感性。西株ZF43、ZF2032、No.2021和诱导低抗菌株ZF43-2(MBCLR)对MBC的ECso分别为0.5411、0.6288、0.5574和0.8015μg/mL,敏感菌株(MBCs)在1.4μa/mL MBC浓度下不能生长,但低抗菌株ZF43-2能够生长,10μg/mL浓度下完全抑制。中抗菌株(MBC~(MR))ZF52、ZF2054和No.2458在10μg/mL MBC浓度下生长快速,501μg/mL生长缓慢,1001.μg/mL浓度下完全抑制。诱导高抗菌株(MBC~(IHR))ZF43-2-5、ZF52-7和田间高抗菌株((MBC~(HK))JT04对MBC的EC_(50)分别为4.72G/mL、20.6620μg/mL和20.94951μg/mL,在50μg/mL MBC浓度下生长较快,1001μg/mL浓度下生长缓慢。用单独和混合培养的方法研究了在乏营养条件...  (本文共120页) 本文目录 | 阅读全文>>