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新城疫病毒F_48E_9株接种鸡胚的病理学观察及其P蛋白基因的克隆与表达

将NDV F_(48)E_9株接种鸡胚进行病毒增殖,并对发病鸡胚作病理学观察,可见病胚发育迟滞、胚体弱小、体表潮红、多处有出血点,胃、肠、肝、脑、肾、心、骨骼肌等重要器官出现不同程度的充血、淤血、水肿、出血和实质细胞的变质性变化,所收集的病胚的尿囊液纯化后经电镜观察可见NDV粒子。根据NDV P蛋白和M蛋白已知基因核苷酸序列设计并合成了两对引物PU1/PL1和PU2/PL2。提取F_(48)E_9株RNA,以RT-PCR法扩增出大小约1.1kb和1.6kb的目的基因片段,两者之间约有100bp左右的基因重复,将这两个片段分别克隆到pMD18-T载体上,对阳性重组子经酶切分析、PCR鉴定及序列测定证明是正确的。根据测序结果,再利用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ、MseⅠ对两个重组质粒分别进行了酶切处理并回收目的片段进行连接,所得的阳性重组质粒经酶切鉴定后再进行序列测定,结果证实我们得到了NDV F_(48)E_9株P基因完整序  (本文共69页) 本文目录 | 阅读全文>>