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硝化细菌的富集培养及氨单加氧酶基因片段的PCR扩增

由硝化细菌催化氨氮氧化的硝化作用是氮循环的关键步骤,也是现代污水处理厂生物处理氨氮废水的重要环节。自然状况下的化能无机自养硝化细菌具有生长速率低、生物量小和对环境因子敏感等生理特点,为了快速获得大量硝化细菌用于炼油化工废水中氨氮化合物的高效去除,我们在实验室里通过富集培养条件优化,直接对活性污泥中的硝化细菌进行富集培养研究。实验结果表明,在pH7.7~8.5、28℃,150 rpm振荡暗培养的条件下,通过不断添加富集培养基,经过6周的培养后,可以使硝化细菌的数量增加32.8倍,硝化速率提高2.76倍,达到了富集的目的。将氨氧化为亚硝酸盐的氨氧化细菌是硝化菌群的重要组成部分,它的种类随生境差异而有所不同。氨氧化细菌的氨单加氧酶(AMO)催化氨氧化生成羟胺是硝化反应的第一步,也是最为重要的步骤。amoA基因是编码氨单加氧酶活性多肽位点基因,我们通过引物筛选合成了对氨氧化细菌amoA基因特异结合的引物序列,利用PCR技术对活性污泥中的  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
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应用多重PCR方法鉴定粪样和食品中产气荚膜梭菌及肠毒素阳性产气荚膜梭菌的基因型鉴定

产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病的病原体,广泛存在于环境中的土壤、水源、人和动物肠道中。根据产气荚膜梭菌产生的四种主要致死性毒素(α、β、ε、τ毒素)可将产气荚膜梭菌分为五种类型,即A、B、C、D、E型。产气荚膜梭菌的经典分类方法,通常采用动物中和试验,该方法操作繁琐、费时,而且有的结果不准确。文其乙等成功建立了一种快速基因分型的多重PCR方法。该方法可以在一个PCR反应中,同时扩增出四种主要毒素的基因片段,根据各种毒素基因的PCR产物来判定产气荚膜梭菌的菌型。ε毒素PCR产物为665bp,τ毒素PCR产物为446bp,α毒素的PCR产物为324bp,β毒素的PCR产物为196bp。另根据最新发现的另二种重要致病性毒素——肠毒素(Enterotoxin,CPE)和β_2毒素——基因的序列设计了引物,与以上四种分型毒素基因PCR引物相结合,构建改良的分型PCR方法。从多重PCR反应得到了CPE的PCR产物为233bp,β_2毒素...  (本文共47页) 本文目录 | 阅读全文>>

湖南农业大学
湖南农业大学

日本柑桔黄龙病菌电镜观察及PCR检测

柑桔黄龙病是由韧皮部杆菌Candidatus Liberibacter引起的一种柑桔毁灭性病害,在多个国家与地区均有发生。该病在日本1988年于冲绳县西表岛初次发现,随后河野于1994年在冲绳本岛发现该病并确认,近年来在日本有向北扩展的趋势,最近在鹿儿岛县奄美大岛也有发现。自1970年Bove等用电镜观察到柑桔黄龙病病原以来,电镜观察一直是作为一种重要的鉴定和诊断手段,后来基于扩增16S rDNA特异性片断的PCR检测方法成了柑桔黄龙病检测的主要方法。由于柑桔黄龙病病原只存在于韧皮部筛管细胞中,而对柑桔叶片维管组织固定比较困难。本研究通过对材料细切,小心去掉木质部部分以便于固定。由于植物组织中都含有一定的空气,致使树脂不能顺利浸润细胞器,这就给材料包埋带来困难,这可以通过在预包埋过程中处以真空处理以抽出植物组织中的空气,以便更好包埋。本研究对日本柑桔体内的柑桔黄龙病原菌的形态结构进行了电镜观察,并与发生在其它地区的柑桔黄龙病的病...  (本文共50页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
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直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌

沙门氏菌是一种常见的重要人兽共患病原菌,不仅引起各种动物的沙门氏菌病,而且与人类多种疾病有关,其中,由沙门氏菌引起的食物中毒病例在食物中毒中居于首位或第二位。沙门氏菌在公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和出入境检验检疫中均有重要的意义。本研究首先根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因序列设计引物,建立了检测沙门氏菌的聚合酶链反应(PCR)技术。对沙门氏菌属A—F各群中共15株沙门氏菌标准菌株、27株沙门氏菌现场分离菌株和其他10株非沙门氏菌菌株进行PCR扩增,结果沙门氏菌均显示出495bp特异性DNA扩增条带,而所有对照均不出现特异条带,因此,此方法具有很强的沙门氏菌属特异性。PCR产物测序结果与已知序列一致,用测序产物作探针,通过斑点印迹实验(dot-blot)进一步验证PCR的特异性。PCR敏感性试验显示,该体系能检出14pg以上的沙门氏菌DNA;当沙门氏菌和大肠杆菌按不同比例混合后,直接ELISA方法和PCR方法的检测比较试验结果显示...  (本文共33页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中学生物学》2017年08期
中学生物学

巧用形式多样的图示打造高效课堂——以“PCR技术和原理”一节为例

教育部考试中心编写的《2017年普通高等学校招生全国统一考试大纲·生物》将选修3中“基因工程的原理及技术”调整成“基因工程的原理及技术(含PCR)”。PCR技术是基因工程的核心技术,掌握PCR技术相关知识可以完善学生对基因工程的认知结构,提高学生对生物科学前沿领域的感知能力。分子生物学知识比较抽象,容易与生活脱节,学生常常忘记某种技术或操作的原理和目的,不利于构建完整的知识网络逻辑结构。图示是一种化繁为简,变抽象为具体的高效教学法,它可以用来阐述对客观事物的理解过程,使分散的知识系统化,直观地呈现整个知识框架,不失为突破教学难点的好方法。图示教学需要以图示意,图的形式也是多种多样的。构建图表图形的过程就是对信息进行整合对概念进行转化的过程,符合建构主义所提倡的让学生成为信息加工的主体、知识意义的主动建构者的理念。下面以“PCR技术和原理”一节为例简单谈谈图示的应用。1导课中运用图示将理论背景趣味化1983年的某一天,美国生化学家...  (本文共2页) 阅读全文>>

《云南农业大学学报(自然科学)》2016年05期
云南农业大学学报(自然科学)

水稻细菌性条斑病菌和白叶枯病菌的多重PCR检测体系开发

high specificity and sensitivity,and the detection sensitivity of X.oryzae pv.oryzicola and X.oryzaepv.oryzae were 104cfu/m L and 105cfu/m L,respectively.Using the multiple PCR system establishedin this study,a rice variety seed with X.oryzae pv.oryzicola and another rice variety seed with X.oryzae pv.oryzae were successfully detected from 50 kinds of commercially available rice seeds.Amultiplex PCR detection system ...  (本文共6页) 阅读全文>>