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马铃薯类病毒(PSTVd)分子鉴定及中国分离株系的克隆与序列分析

对采自中国东北佳木斯、大庆等地区具有典型马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)症状的薯块样品进行往返电泳(R-PAGE),确定含马铃薯纺锤块茎类病毒的阳性样品。利用R-PAGE进行PSTVd检测,灵敏度可达到13ng。同时,利用双向电泳和RT-PCR方法进行类病毒鉴定,证明两种方法均可用来检测类病毒。利用含PSTVd单体的pGEM-7Z质粒,通过PCR扩增技术,用生物素标记制备cDNA探针,进行杂交反应检测PSTVd,其中通过化学颜色反应进行判读灵敏度可达到50pg,而用化学发光反应进行判读灵敏度可达到5pg,分别是R-PAGE检测灵敏度的260倍和26倍。且两种反应特异性和专化性较强。cDNA核酸斑点杂交反应(NASH)检测PSTVd方法准确、灵敏度高,一次检测样品数量多,且对于异地样品检测非常方便,是以往其它检测方法的有效补充。利用RT-PGR技术,设计一对引物,对田间采集的经鉴定含PSTVd的阳性样品进行全序列扩增,并将所得产  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中学生物教学》2001年03期
中学生物教学

类病毒研究进展

自从 1 972年科学家首次提出类病毒的概念以来 ,这一领域的研究一直十分活跃。近年来在类病毒的结构、致病特点等问题上又有了新的见解 ,在类病毒的检测方法上也有新的进展。1 类病毒的结构特点类病毒是一类单链闭合环状的裸露RNA分子 ,分子内由碱基广泛配对形成双链与小环相间的二级结构 ,具有自我复制的能力 ,是感染某些高等植物的致病因子。类病毒具有非常独特的热变性性质 ,不同于一般的单链RNA。融解温度为 50℃~ 55℃ ,低于双链DNA或RNA ,但比tRNA要高。它的变性具有很高的协同性 ,即变性温度很窄。根据这些实验结果 ,提出了类病毒具有分子内双链区域和内环相间排列的棒状二级结构。现代生物学新技术、新方法的运用 ,使类病毒的研究得到迅速发展 ,尤其是核酸序列分析技术的运用 ,使类病毒的研究进入了分子水平。从 1 978年发表了马铃薯纺锤形块茎病类病毒 (PSTV)序列以来 ,其它十几种类病毒的序列分析也已陆续完成。根据类...  (本文共2页) 阅读全文>>

《品牌与标准化》2015年10期
品牌与标准化

《啤酒花潜隐类病毒检疫鉴定方法》

标准编号:GB/T 31797-2015范围:本标准规定了啤酒花潜隐类病毒的检疫鉴定方法。本标准适用于啤酒花及其无性繁殖材料、种子、花粉上啤酒花潜隐类病毒的检疫鉴定,同时也适用于葎草和异株荨麻上啤酒花潜隐类病毒的检疫鉴定。发布/实施日期:2015-07-03/2015-11-27发布单位:中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会标准修订...  (本文共1页) 阅读全文>>

《湖南农业科学》2012年07期
湖南农业科学

啤酒花潜隐类病毒研究进展

啤酒花(Humulus lupulus)又称酒花、蛇麻花、酵母花等,属桑科多年生蔓性草本植物,是制造啤酒的关键原料[1]。目前,世界上已报道的啤酒花类病毒有3种,即:啤酒花潜隐类病毒(Hop latent vi-roid,HpLVd)、啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HpSVd)和苹果皱果类病毒(Apple fruit crinkle vi-roid,AFCVd)[2],其中啤酒花潜隐类病毒是发生最普遍的一种潜隐类病毒。1分布与危害啤酒花潜隐类病毒隶属于Cocadviroid属,分布于英国[3-5]、德国[6]、韩国[7]、波兰[8]、日本[9]、捷克[10]、巴西[11]、美国[2]、中国新疆[12]等国家和地区的啤酒花上。该类病毒侵染啤酒花后不表现明显的症状,但感染Omega品种后出现萎黄、生长缓慢等现象[3,13~14]。当啤酒花受该类病毒侵染后,一些次生代谢产物成分发生改变,从而影响啤酒花品质,降低啤...  (本文共4页) 阅读全文>>

《植物检疫》1991年06期
植物检疫

近期发现的果树类病毒及其检测方法

近年来,美国、日本、西班牙、澳大利亚等许多国家,对一些病原不明、曾认为是由病毒引起的果树病害重新进行了研究,先后从柑桔、椰子、梨、苹果、葡萄、李、桃等多种果树上发现了类病毒-(Viroid)或类似于类病毒的病原物_(表l)。我国也已报道了2种果树类病毒,即苹果锈果类病毒和柑桔裂皮类病毒。 类病毒是目前所知最小的病原物,1971年由美国Diener博士首次从马铃薯纺锤块茎病(PSTV)中发现。他认为要确认病原物是类病毒,必须证明下述事实:(])病原物仅有核酸无蛋白质外壳、存在于感染细胞中;(2)感染细胞中见不到非细胞型微生物和病毒状粒子;(3)是低分子量核酸;(4);该核酸由单一分子构成,能自主复制。之后,sanger等(1976)根据电镜观察、末端分析、超速离心和热变性等研究结果,首次提出类病毒是具有高度碱基配对、棒状单链的闭合环状RNA分子。1978年Riesner等又提出了类病毒在自然状态下的二级结构模型。Cross等先后完...  (本文共4页) 阅读全文>>

《病毒学报》1993年03期
病毒学报

类病毒研究的近年进展

类病毒是到目前为止已知的最小的植物致病原。它们是一群由”0~380个核昔酸组成的环状RNA分子,不具有蛋白质外壳。由于它们基因组的微小,也不大可能编码任何蛋白质。大多数类病毒由于它广泛的链内碱基配对而形成一种短双链区和小单链环相互间隔延续的棒状结构。尽管类病毒分子量很小,但它们仍然能在诸如马铃薯、西红柿、苹果、柑桔、椰子等多种植物引起严重的疾病。类病毒研究已经引起学者们的广泛兴趣。 自1971年前后Diencr等〔。在不同的实验室各自独立地确认了类病毒为马铃薯纺锤状块茎病和柑桔裂皮病的病原后,20年来类病毒研究进展迅速,多种类病毒被分离鉴定,其核昔酸序列得到测定,类病毒复制的模式也得到阐明,在一些类病毒内与致病有关的结构被确定,等等。由于这方面的工作已有大量的报道和综述,本文只拟在田波等〔2,3〕前两篇综述的基础上就近5~6年的工作作一综述。1新类病毒的发现和分类系统的完善 随着类病毒作为植物致病原得到确认,对于一些过去认为是病...  (本文共13页) 阅读全文>>