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5-氮杂胞苷诱导骨髓间质干细胞定向心肌样分化的实验研究

骨髓间质干细胞是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞,在一定的条件下,可以定向诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞、心肌细胞,同时,它取材方便,在体外培养时可迅速扩增,能进行自体移植,为骨、软骨、心脏等组织的修复和重建提供细胞来源。本实验以兔为研究对象,研究兔骨髓间质干细胞经5-氮杂胞苷诱导,在体外及体内定向心肌样分化的情况,为受损心肌组织的细胞移植研究打下基础。本实验进行了以下几方面研究:1、经过反复实践,摸索出相对简便、高效、实用的兔骨髓间质干细胞的体外分离、培养技术:骨髓细胞梯度离心获得骨髓间质干细胞,所得细胞用流式细胞仪监测表面抗原表达,结果显示细胞均一性较好,细胞表面抗原CD34表达阴性,CD44表达阳性,也进一步鉴定了所得细胞为高纯度。2、体外实验:以兔骨髓间质干细胞为种子细胞,进行5-氮杂胞苷诱导,然后取培养7,14,21,28d的细胞进行免疫组织化学染色,检测肌球蛋白重链(myosin heavy cha  (本文共52页) 本文目录 | 阅读全文>>

《同济大学学报(医学版)》2009年01期
同济大学学报(医学版)

大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养及初步鉴定

骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是骨髓中除造血干细胞外的另一种非造血干细胞,具有自我更新和多向分化的能力。MSCs不仅具有向中胚层组织细胞如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等分化的能力,还可跨越胚层的界限分化为外胚层的神经元,神经胶质细胞和内胚层的肝细胞、胰腺细胞等,因而MSCs在组织工程、细胞治疗、基因治疗等方面的研究已成为研究的热点。本实验对MSCs的分离纯化、培养扩增及其生物学特性进行了研究,并对其表型特征进行了初步鉴定,为进一步诱导分化为胃黏膜上皮细胞奠定基础。1材料与方法1.1实验材料主要试剂与仪器:DMEM-LG培养基,胎牛血清(均为Invitrogen公司),兔抗大鼠CD29、CD34、CD44多克隆抗体,SABC免疫组化试剂盒,DAB显色剂(武汉博士德生物制品有限公司),牛胰蛋白酶,地塞米松,胰岛素,3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylx...  (本文共5页) 阅读全文>>

《山东医药》2009年49期
山东医药

血管内皮生长因子转染人骨髓间质干细胞

血管内皮生长因子(VEGF)是惟一特异性促进血管内皮细胞有丝分裂的生长因子,促进血管内皮细胞增殖作用具有高度特异性[1,2]。在动脉粥样硬化中,一方面VEGF具有通过刺激一氧化氮和前列环素2产生增强内皮完整性,抑制血管平滑肌细胞增殖,增加内皮抗血栓等血管保护作用;另一方面VEGF加速动脉粥样硬化斑块进程,加重血管损害[3]。因此,进一步了解VEGF作用机制在防治粥样硬化方面具有重要意义。2007年1~6月,本实验采用脂质体介导的基因转染技术,将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(-)VEGF瞬时转染体外培养的骨髓间质干细胞,培养后采用RT-PCR、Westernblot等方法检测VEGF基因在骨髓间质干细胞中的表达情况。1材料与方法1.1材料细胞:分离、培养的第3代人骨髓间质干细胞[4]。主要试剂:L-DMEM培养基、胎牛血清(Hycolone公司),Lipofect AMINETM2000 Reagent,RT-PCR试剂盒...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国矫形外科杂志》2008年13期
中国矫形外科杂志

骨髓间质干细胞在股骨头缺血性坏死修复中的研究及应用进展

股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of the femoral head,ANFH)为进展性的髋关节病变,严重影响了患者的生活质量。目前临床上多采用手术治疗,但手术创伤大、费用高,常造成治疗的障碍,因此新型、有效、微创的治疗方法是今后的趋势。骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)具有强大的自我增殖和多向分化潜能,可通过诱导向成骨方向分化,这种可在体外控制性培养并能在体内外向成骨分化的特性,为骨缺损的修复再生开辟了新途径,也给ANFH的治疗带来了新的突破。本文就BMSCs治疗AN-FH的研究和应用进展作以概述。1骨髓间质干细胞的生物学特性BMSCs具有干细胞的共同特性,能够自我增殖并具有多向分化潜能[1]。研究显示在体外培养中BMSCs每传代一次,细胞数增加约2.2倍,且在体外分裂38次以上仍保持干细胞多项分化潜能,BMSCs中约有20%处于静止期(G...  (本文共3页) 阅读全文>>

《解放军医学杂志》2008年10期
解放军医学杂志

兔骨髓间质干细胞的体外生物学特性及超微结构研究

椎间盘髓核细胞退变是椎间盘源性下腰痛的主要致病原因,目前临床上的治疗方案均以缓解症状为主,不能抑制髓核细胞的进一步退变,并且可能会导致脊柱不稳以及相邻椎间盘退变加速等病症[1]。骨髓间质干细胞因其具备易分离、体外增殖快、具有多向分化潜能等特点,已成为目前组织工程研究的热点,其体外培养移植治疗软骨缺损[2]、心肌坏死[3]等已有报道。目前椎间盘退变动物模型多以兔为实验对象,但针对其骨髓间质干细胞的研究较少,本实验通过体外分离培养兔骨髓间质干细胞,了解兔骨髓间质干细胞的生物学特性及超微结构,为进一步优化培养模式,通过将兔骨髓间质干细胞诱导分化为类髓核细胞而用于移植治疗椎间盘退变打下实验基础。1材料与方法1·1兔骨髓间质干细胞的分离及培养取1只1月龄新西兰白兔(新桥医院动物中心提供),体重1·0kg,2%戊巴比妥钠(30mg/kg)耳缘静脉注射麻醉,以16号骨穿针、5ml肝素化注射器抽吸胫骨骨髓液约2ml,用等体积的0·01mol/L...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国临床康复》2006年41期
中国临床康复

血管内皮生长因子基因转染促进骨髓间质干细胞增殖的实验

0引言移植具有多向分化能力的干细胞,促进心肌细胞再生已成为缺血性心脏病治疗的一个重要领域,但移植细胞在缺血区的低存活率是这一研究应用的主要难题,其原因为心肌梗死区域血供不足、供细胞生长的微环境差。因此血运重建不仅是缺血性心脏病治疗的一个关键,也是移植细胞能否长期存活的关键。血管内皮生长因子在血运重建过程中起着重要作用[1-4],但在心肌缺血的情况下,自身分泌的血管内皮生长因子是不能满足自身血运重建及移植细胞生存需要的。因此,作者设想通过基因转染的方法用血管内皮生长因子对骨髓间质干细胞进行基因修饰,这样骨髓间质干细胞既可以作为组织工程的种子细胞用于修复受损的心肌,又可以作为一种载体将血管内皮生长因子基因导入缺血组织并将其分泌出来;所分泌的血管内皮生长因子促进了缺血心肌的血管新生,改善了心功能,而且可以移植细胞的存活率,这将从根本上改善心肌梗死的病理进展,为缺血性心脏病以及心功能衰竭的治疗提供一种崭新的途径。1材料和方法设计:单一样...  (本文共4页) 阅读全文>>