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猪干扰素-γ基因的克隆及其表达

从猪的肝脏组织中提取基因组DNA,用长链PCR的方法扩增得到猪的干扰素-γ基因,经测序表明其与GenBank中发表的猪干扰素-γ基因序列的同源性为99%左右。将其纯化后克隆到真核表达载体PCI-neo载体中,组装成了真核表达载体PCI-neo-PoIFNγ。利用脂质体转染法将重组载体PCI-neo-PoIFNγ转染入仓鼠卵巢细胞(CHO)中,在G418的存在下进行筛选培养,获得了能表达猪干扰素-γ的转染细胞系。收集转染细胞,用UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取总RNA,并通过RT-PCR的方法扩增获得猪干扰素-γ cDNA基因,这也从另一途径证实了猪干扰素-γ基因已成功地整合到细胞染色体中并能正确的转录出其mRNA。将获得的猪干扰素-γ cDNA基因克隆入原核表达载体pBV220中,组装成了原核表达载体pBV220-cPoIFNγ,经正反测序表明其与GenBank中发表的猪干扰素-γ cDNA序列完全相同。将这  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

《齐鲁药事》2009年02期
齐鲁药事

猪干扰素-γ基因的克隆及其真核表达载体的构建

γ-干扰素是由激活的T细胞和NK细胞产生的一种具有抗病毒和免疫调节功能的细胞因子[1]。VandenbroeckK等[2]从猪的PoIFN-γ基因中用PCR扩增出四个外显子,并依次构建入原核表达质粒pRK2248cIts和pPo-gam-ma-pL-1中,组建成含PoIFN-γ-cDNA的重组载体,将这个重组载体转化到大肠杆菌MC1061中后得到了重组PoIFN-γ。任慧英[3]等用RT-PCR方法从长白猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪γ-干扰素基因,将其插入表达载体pcD-NA3.1(+)构建出真核重组表达载体IFN-γ-pcDNA,并且转染COS7细胞,获得表达。张立娜等[4]以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素,与PCI真核表达载体连接在一起,并将重组质粒转染PK细胞,实验表明构建的重组质粒转染细胞后具有抗病毒作用。黄亚平[5]等从猪的外周血淋巴细胞中提取总RNA,并扩增出γ干扰素,同时成功构建了重组...  (本文共4页) 阅读全文>>

《生物技术通报》2008年06期
生物技术通报

猪干扰素-γ的研究进展

干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子,主要由活化的T细胞和NK细胞产生,在机体免疫系统中发挥重要作用。根据对干扰素基因核酸序列分析,发现干扰素是存在于生物体内的一种古老的保护因子,而且普遍存在于生物体中。自从Issacs等[1]于1957年发现干扰素以来,已经证明不论高等动物还是低等动物都有干扰素类似物质产生。已有研究发现,由于IFN-γ的免疫调节、抗病毒和抗肿瘤独特作用,重组pIFN-γ(Porcine interferon-gamma)在体外不但能有效抑制猪口蹄疫病毒(FMDV)、蓝耳病病毒(PRRSV)、流感病毒和非洲猪瘟病毒(ASFV)的繁殖,同时还对免疫抑制猪具有良好免疫调节作用,可有效增强某些疫苗的免疫效果。研究结果进一步证实,IFN-γ在疾病的诊断、治疗和疫苗免疫效果检测等方面起着重大作用,是现代分子生物学、免疫学和临床医学研究的热点之一。1干扰...  (本文共4页) 阅读全文>>

《寄生虫与医学昆虫学报》2008年01期
寄生虫与医学昆虫学报

鸡干扰素-γ抗球虫作用研究进展

鸡球虫病是广泛发生的一种原虫病,可以引起鸡只增重下降、饲料报酬降低,甚至会导致鸡的发病,乃至死亡。目前,控制鸡球虫病仍以药物防治为主,但药物防治面临日益严重的2个问题的困扰:一是球虫易产生耐药性;二是药物残留问题。因此,人们期望用更好的手段来取代它。分子生物学技术的飞速发展,极大地促进了鸡球虫基因工程疫苗、核酸疫苗的研制。同时,随着人们对细胞因子研究的深入,发现许多细胞因子可以在抗球虫方面起一定的作用,如鸡干扰素-γ(Chicken interferon-γ,ChIFN-γ)、鸡白细胞介素-2(Chickeninterleukin-2,ChIL-2)等。1ChIFN-γ的生物学特性ChIFN-γ的结构、来源、产生条件、基因序列与ChIFN-α/β完全不同,但生物学活性有许多相似之处。ChIFN-γ主要由T细胞、NK细胞产生。在调节免疫应答、抗肿瘤细胞增殖等方面的作用强于ChIFN-α/β,但直接抗病毒能力较弱(巴德年,1998)...  (本文共3页) 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

基因工程药物人干扰素-γ体外重折叠复性研究

通过外源基因在E. coli中的表达来获得蛋白质类药物,已经成为生产基因工程药物的重要手段,然而重组蛋白质在E. coli中易聚集形成不溶性、无活性的包涵体,如何对包涵体蛋白进行高浓度、高收率的复性,是重组蛋白质生产的关键性技术之一,且关系到基因工程药物的产业化。为此,本文对重组人干扰素-γ包涵体的重折叠复性进行了研究,以有助于这一问题的解决。首先对重组人干扰素-γ基因工程菌(pBV220IFN-γDH5α)的培养条件进行了研究,通过考察不同的培养和诱导时间,并对培养基的组成和发酵条件进行了优化,得出了优选实验方案:人干扰素-γ基因工程菌在30℃培养8h,升温至42℃诱导6h,培养基组成为葡萄糖2g/L,胰蛋白胨15g/L,酵母提取物7.5g/L,NaCl 5g/L,Na_2HPO_4·12H_2O 12.6g/L,KH_2PO_4 3g/L,NH_4Cl 1.0g/L,1mol/L MgSO4 2mL/L,发酵条件为摇床转速:...  (本文共148页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

犬腺病毒Ⅰ型强毒株感染实验犬模型中干扰素转录水平的分析

犬Ⅰ型腺病毒(Canine adenovirus type 1,CAV-1)感染犬可引起犬传染性肝炎(Infectious canine hepatitis,ICH),该病具有传染性强、发病率高、致死率高的特点,对犬养殖业造成了极大的危害和经济损失。本研究旨在建立CAV-1犬感染模型,以对评价ICH疫苗以及药物的疗效提供参考。首先,本实验建立了一系列CAV-1的检测手段,包括分子生物学检测方法PCR和定量PCR以及用于血清抗体检测的血清学检测方法间接免疫荧光试验(Indirect immunoinfluscent assay,IFA)和血凝抑制(Hemagglutnation inhibition,HI)试验。其次,我们利用普通级2月龄比格犬建立感染模型。对犬进行肌肉注射接种CAV-1同剂量(10~5.7.7 TCID_(50)/2 mL)感染后,对其排毒情况、组织带毒、病毒血症进行检测。结果表明,三只攻毒犬出现不同程度的临床症...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>