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青岛近岸不同环境中海洋弧菌的检测及用PCR方法快速检测病原鳗弧菌

浩瀚的海洋是生命的摇篮。由于海洋环境的特异性,海洋微生物表现出在物种、种内遗传变异和生态功能上的多样性,即海洋微生物多样性(Marine microbial diversity)。弧菌科(Vibrionaceae)细菌是一种菌体短小,直或弯曲的革兰氏阴性菌,作为近海河口环境中微生物区系的成员,广泛分布于半咸水、河口、海洋的水体和沉积物中。弧菌科主要包括弧菌属(Vibrio)、气单胞菌属(Aeromonas)、邻单胞菌属(Plesiomonas)和发光杆菌属(Photobacterium)。其中弧菌属(Vibrio)的细菌种有37种以上。目前对弧菌科的多样性研究越来越集中到病原种类上。弧菌与人类关系密切,是引发人类细菌性疾病的主要病原之一。人们通过饮用不清洁水,食用未加工或未加工熟的带有致病弧菌的食物特别是海产品感染发病。弧菌科细菌引起的疾病临床症状复杂,特别是霍乱弧菌(Vibrio cholearae)、副溶血弧菌(Vibrio  (本文共59页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
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应用多重PCR方法鉴定粪样和食品中产气荚膜梭菌及肠毒素阳性产气荚膜梭菌的基因型鉴定

产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病的病原体,广泛存在于环境中的土壤、水源、人和动物肠道中。根据产气荚膜梭菌产生的四种主要致死性毒素(α、β、ε、τ毒素)可将产气荚膜梭菌分为五种类型,即A、B、C、D、E型。产气荚膜梭菌的经典分类方法,通常采用动物中和试验,该方法操作繁琐、费时,而且有的结果不准确。文其乙等成功建立了一种快速基因分型的多重PCR方法。该方法可以在一个PCR反应中,同时扩增出四种主要毒素的基因片段,根据各种毒素基因的PCR产物来判定产气荚膜梭菌的菌型。ε毒素PCR产物为665bp,τ毒素PCR产物为446bp,α毒素的PCR产物为324bp,β毒素的PCR产物为196bp。另根据最新发现的另二种重要致病性毒素——肠毒素(Enterotoxin,CPE)和β_2毒素——基因的序列设计了引物,与以上四种分型毒素基因PCR引物相结合,构建改良的分型PCR方法。从多重PCR反应得到了CPE的PCR产物为233bp,β_2毒素...  (本文共47页) 本文目录 | 阅读全文>>

湖南农业大学
湖南农业大学

日本柑桔黄龙病菌电镜观察及PCR检测

柑桔黄龙病是由韧皮部杆菌Candidatus Liberibacter引起的一种柑桔毁灭性病害,在多个国家与地区均有发生。该病在日本1988年于冲绳县西表岛初次发现,随后河野于1994年在冲绳本岛发现该病并确认,近年来在日本有向北扩展的趋势,最近在鹿儿岛县奄美大岛也有发现。自1970年Bove等用电镜观察到柑桔黄龙病病原以来,电镜观察一直是作为一种重要的鉴定和诊断手段,后来基于扩增16S rDNA特异性片断的PCR检测方法成了柑桔黄龙病检测的主要方法。由于柑桔黄龙病病原只存在于韧皮部筛管细胞中,而对柑桔叶片维管组织固定比较困难。本研究通过对材料细切,小心去掉木质部部分以便于固定。由于植物组织中都含有一定的空气,致使树脂不能顺利浸润细胞器,这就给材料包埋带来困难,这可以通过在预包埋过程中处以真空处理以抽出植物组织中的空气,以便更好包埋。本研究对日本柑桔体内的柑桔黄龙病原菌的形态结构进行了电镜观察,并与发生在其它地区的柑桔黄龙病的病...  (本文共50页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
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直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌

沙门氏菌是一种常见的重要人兽共患病原菌,不仅引起各种动物的沙门氏菌病,而且与人类多种疾病有关,其中,由沙门氏菌引起的食物中毒病例在食物中毒中居于首位或第二位。沙门氏菌在公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和出入境检验检疫中均有重要的意义。本研究首先根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因序列设计引物,建立了检测沙门氏菌的聚合酶链反应(PCR)技术。对沙门氏菌属A—F各群中共15株沙门氏菌标准菌株、27株沙门氏菌现场分离菌株和其他10株非沙门氏菌菌株进行PCR扩增,结果沙门氏菌均显示出495bp特异性DNA扩增条带,而所有对照均不出现特异条带,因此,此方法具有很强的沙门氏菌属特异性。PCR产物测序结果与已知序列一致,用测序产物作探针,通过斑点印迹实验(dot-blot)进一步验证PCR的特异性。PCR敏感性试验显示,该体系能检出14pg以上的沙门氏菌DNA;当沙门氏菌和大肠杆菌按不同比例混合后,直接ELISA方法和PCR方法的检测比较试验结果显示...  (本文共33页) 本文目录 | 阅读全文>>

《当代医学》2019年35期
当代医学

细菌性阴道炎检验中采取PCR检验法和细菌培养法的临床应用意义

目的探究细菌培养法与PCR检验法在检验细菌性阴道炎的临床价值。方法选取2017年12月至2018年12月本院收治的细菌性阴道炎患者62例为研究对象,采用随机数字表法将患者分为对照组和观察组,每组31例。对照组采用细菌培养法检查,观察组采用PCR检验法,对比分析对照组和观察组的阳性检出...  (本文共2页) 阅读全文>>

《昆虫学报》2019年12期
昆虫学报

牧草盲蝽实时定量PCR内参基因的筛选

【目的】筛选出适合牧草盲蝽Lygus pratensis在不同条件下稳定表达的内参基因。【方法】选取编码牧草盲蝽α-微管蛋白、β-微管蛋白、肌动蛋白、延伸因子、琥珀酸脱氢酶复合体A、泛素、转录起始因子TFIID亚基、谷胱甘肽S-转移酶、核糖体蛋白L32及TATA盒结合蛋白的10条基因为候选内参基因,采用qRT-PCR技术测定其在牧草盲蝽不同性别成虫、成虫不同组织、不同龄期、对功夫菊酯不同抗性成虫、不同温度及不同杀虫剂分别处理后的成虫共6类样品中的表达量;采用BestKeeper, geNorm, NormFinder及RefFinder 4种计算程序对各...  (本文共13页) 阅读全文>>