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大熊猫(Ailuropoda melanoleuca )皮肤成纤维细胞系选育的初步研究

本试验研究了大熊猫皮肤组织细胞的分离,进行了大熊猫皮肤成纤维细胞体外培养体系的设计,初步建立了大熊猫皮肤成纤维细胞系,并对培养的细胞进行了种属鉴定和冷冻保存。研究结果表明:1.大熊猫皮肤组织块在200IU/ml胶原蛋白酶Ⅰ,在4℃下酶解48-72h。的酶解效果最好,活细胞的得率达到4.604×10~6/g,且胶原蛋白酶Ⅰ酶解得到的细胞以成纤维细胞为主;2.大熊猫皮肤组织块在:M199+20%FBS+100IU/ml青链霉素+M—Plasmolin~(TM)5μg/ml+Amphtericin B 5μg/ml+2mmol/L L-Glu中培养,幼仔皮肤组织块培养6—8天,成体皮肤组织块培养12—14天后出现游离的成纤维细胞。3.传代时连续3个代次采用成纤维细胞与上皮细胞差速粘附特性,进行成纤维细胞纯化,其纯度可达到:99.84±0.563%(n=30);4.在BCSs四种培养体系中,测得在BCS—3培养体系中:细胞平均贴壁率为8  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

《上海交通大学学报(医学版)》2010年07期
上海交通大学学报(医学版)

中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞衰老及机制研究

目前衰老是一不可逆转的生物学现象[1]。皮肤衰老是机体衰老的一部分,表现为皮肤松弛、变薄;皱纹形成,并逐渐增多和加深[2],是机体衰老最直观的外在表现之一。研究[3]表明,皮肤衰老与皮肤成纤维细胞增殖能力及真皮胶原含量下降有关。目前,对于皮肤成纤维细胞在皮肤衰老过程中的具体作用及机制尚不清楚[4]。本研究利用中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导皮肤成纤维细胞衰老,观察衰老过程中皮肤成纤维细胞衰老相关蛋白P16表达和Ⅰ、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶(matrix metallo-proteinase,MMP)1、3(MMP1、MMP3)合成分泌的变化,并探讨其可能的作用机制。1材料与方法1.1主要试剂和仪器高糖DMED培养基、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(Gibco);β-半乳糖苷酶(β-gal)细胞衰老染色试剂盒、2×SDS蛋白裂解液(Beyotime);Ⅰ、Ⅲ型胶原和MMP1、MMP3ELISA...  (本文共5页) 阅读全文>>

《武汉大学学报(医学版)》2008年02期
武汉大学学报(医学版)

雌激素对人正常皮肤成纤维细胞的影响

人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblasts,HSFB)衰老及生物学特性改变是导致皮肤老化出现的重要原因。雌激素属甾体类激素,在体内主要由卵巢和肾上腺皮质产生,具有广泛的生物学活性。研究表明,雌激素对皮肤的作用主要包括:①增加皮肤胶原含量,维持皮肤厚度;②增加酸性黏多糖与透明质酸的生成,保持皮肤含水份;③作为天然的抗氧化剂,对抗氧化应激损伤等[1]。目前有关雌激素对于皮肤自然衰老影响的报道很少,现有的雌激素与皮肤衰老关系的探讨,以临床和动物实验研究居多。我们通过体外培养人正常皮肤成纤维细胞,观察雌激素对该类培养细胞生物学特性的影响,为雌激素及其衍生物在抗皮肤衰老领域的应用提供实验与理论依据。1材料与方法1.1标本来源本院皮肤科和泌尿外科门诊常规手术切除的中年女性(38岁)背部非皱纹皮肤1例;男性包皮2例,年龄分别为17岁和35岁。1.2试剂兔抗人Ⅰ型胶原抗体、兔抗人Ⅲ型胶原抗体、小鼠抗人弹性蛋白抗体、小鼠抗人波...  (本文共4页) 阅读全文>>

《山东医药》2006年14期
山东医药

大鼠胚胎皮肤成纤维细胞移植的研究

组织工程研究中的重要环节是寻找合适的种子细胞。胚胎皮肤成纤维细胞在胚胎的无瘢痕愈合过程中起重要作用。2005年8~10月,我们将体外培养的大鼠胚胎皮肤成纤维细胞移植于成年大鼠背部真皮层,对移植后成纤维细胞的成活情况及Ⅲ型胶原的分泌情况进行了观察,旨在为组织工程种子细胞的选择及将细胞移植用于临床提供实验依据。1材料与方法1.1实验材料清洁级W istar大鼠18只,体重250~300g,雌雄不拘;孕期18d的W istar大鼠1只(山东省立医院动物实验中心提供,动物许可证号:scxk鲁20030006)。荧光活性染料CM-D il(M o lecu larP robes)、DM EM培养基(G IBCO)、胰蛋白酶(S igm a)、胎牛血清(杭州四季青公司),SP试剂盒(北京中山生物工程技术公司),Ⅲ型胶原抗体(武汉博士德生物工程有限公司)。1.2方法1.2.1成纤维细胞培养将孕鼠麻醉后,腹部去毛,充分消毒,剖开其腹部,无菌操作...  (本文共3页) 阅读全文>>

《实用医药杂志》2005年04期
实用医药杂志

人皮肤成纤维细胞库的构建

成纤维细胞是构成皮肤真皮的主要细胞,其正常的增殖、分化维系着皮肤正常的结构和生理功能。成纤维细胞的体外培养技术是建立成纤维细胞系必不可少的步骤,也是复合人工皮肤组织工程学研究的先决条件。成纤维细胞系的建立,不仅为复合人工皮肤的组织工程学研究奠定了前期工作基础,也为皮肤相关疾病的研究提供了实验条件,因而具有重要的理论和现实意义。1材料和方法1.1材料1.1.1器材一次性塑料培养瓶50ml(美国),常规手术器械(上海),塑料冻存管2ml,0.22μm微孔滤器。1.1.2试剂胶原酶(Sigma),优质胎牛血清(Gibco)胰蛋白酶(,Sigma),中性蛋白酶(Sigma),DMEM培养基(Sigma),二甲基亚砜(Merck)。1.1.3配液成纤维细胞培养基配制DMEM10g,NaHCO3.7g,HEPES2.4g,优质胎牛血清3100ml,青霉素100000U,链霉素100000U,超纯水加至1000ml,用1NNaOH调pH值至7...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国临床康复》2004年32期
中国临床康复

有关瘢痕形成机制研究:不同皮肤成纤维细胞对羊水的反应

0引言增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的防治是整形外科的难题之一。在临床工作中,作者观察到产科剖宫产后的手术瘢痕发生瘢痕增生的概率比一般下腹部外科手术术后的后瘢痕增生的概率为高。这是何种原因所致,是否与羊水对切口的刺激有关?国内外对羊水与瘢痕的研究主要集中在羊水对胎儿的无瘢痕愈合上,实际上胎儿的无瘢痕愈合与成人的伤口愈合有很大的差异。为比较这种差异,研究羊水对不同成纤维细胞的作用及作用机制,进行了本实验研究。cg--d-est11材料和方法设计:非随机对照的实验研究。地点和材料:DMEMEagle培养基为美国GIBCO公司产,胎牛血清为天津产,胰蛋白酶为德国Merck公司生产。正常皮肤取自育龄期女性双腋下(副乳切除术);胎儿皮肤取自意外终止妊娠,胎龄为21周的流产胎儿;羊水取自健康、足月产妇剖宫产时。取材前均向患者说明目的并征得同意。设计、实施、评估者:研究设计和评估者为第一作者,实施干预者为全部作者。干预措施:成纤维细胞培养:将手术切下的...  (本文共2页) 阅读全文>>