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gna基因在大豆上的转化及转化体系的优化

本研究通过对大豆组织培养消毒处理方法对种子萌发的影响,来研究不同消毒剂及不同处理方法对大豆种子消毒效果的影响,从而减少由于种子消毒不彻底造成实验材料的浪费并影响后期的研究工作。利用大豆不同品种的下胚轴、顶芽、子叶节、原位再生等几种外植体进行诱导植株再生的实验,并通过添加不同浓度的6-BA来观察诱导愈伤组织和出芽的情况,为下一步的转化实验建立一个良好的组培平台。最后对大豆转化体系的几个因素进行优化实验,并以原位再生体系为平台进行gna基因的转化。实验主要结果如下:1.大豆组织培养最佳消毒处理方法为70%酒精预处理后饱和漂白粉溶液4℃处理1~2h;或用0.1%HgCl2溶液作消毒剂4℃条件下处理2h,能取得较好的消毒效果。2.各种外植体诱导愈伤组织和出芽最适6-BA浓度不同,其中子叶节为1.0mg/L,顶芽为2.0mg/L,原位为1.0mg/L至2.0mg/L;下胚轴为2.0mg/L。原位在1.0mg/L 6-BA的基础上添加0.1  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北师范大学
东北师范大学

GNA抗体的制备及在转GNA基因大豆检测上的应用

GNA(lectin from snowdrop)具有多种抗虫功效。到目前为止,全世界已有至少10种植物获得了转GNA基因抗虫植株,它们均表现出一定的抗虫性。但是转基因植物产品是新生事物,食用的历史时间很短,安全性仍然是人们很关心的话题。欧盟委员会颁布实施了转基因食品检测与标注相关的法规,中国农业部从2002年3月20日起也已经要求对转基因产品检测并标注。目前国际上通用的检测方法主要是DNA检测法和蛋白质检测法。DNA检测法不能够证明蛋白质的有效表达与否,而最终执行抗虫性生物功能的物质,不是DNA,恰恰是蛋白质,对人体的危害也由蛋白质产生,所以,蛋白质检测技术是必须进行的程序。Western blot和ELISA是常用的两种蛋白质检测方法。ELISA法具有灵敏、高效、简便、省时、费用低、可定量检测等优点。本文通过制备GNA抗体(多抗和单抗),使用ELISA方法对转GNA基因大豆进行检测,力求建立一套简便、快速、高效、灵敏、成本低...  (本文共43页) 本文目录 | 阅读全文>>

《分子植物育种》2006年05期
分子植物育种

大豆花粉管通道技术转化雪花莲凝集素(GNA)基因

蚜虫是大豆生产中危害严重的害虫之一,不仅汲食大豆植株汁液,而且传播病毒,轻者可使大豆减产10% ̄20%,重者减产50%以上。培育抗蚜虫品种,是解决蚜害的最经济有效的方法。然而在现有大豆栽培种和野生种资源中,抗蚜材料极少,引进新基因创造新资源非常迫切。常规方法获得抗蚜材料难度很大,转基因技术为此提供了有效途径。目前国际上使用的抗虫基因多是来自苏云金杆菌的毒蛋白基因,它对咀嚼式口器昆虫如鳞翅目和鞘翅目害虫有杀伤作用,但对刺吸式同翅目害虫蚜虫不敏感(Hilder et al.,1995;张锐和郭三堆,2001)。对同翅目害虫蚜虫、褐飞虱有毒杀作用的基因,研究较多的是外源凝集素基因,雪花莲外源凝集素(GNA)已被证实对某些咀嚼式和刺吸式昆虫有抗性,如草夜蛾、豌豆象、飞虱、蚜虫,但对高等动物没有毒性(周岩等,1998)。转GNA基因水稻、烟草、番茄已有报道(Tanget al.,2000;孙小芬和唐克轩,2001,科学通报,46(13):...  (本文共7页) 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

农杆菌介导的大豆遗传转化研究

根据农杆菌转化和大豆子叶节再生系统的特点,对大豆子叶节农杆菌转化系统进行优化,并成功地将Bt抗虫基因(cryLA)导入大豆,转基因植株进行了PCR及PCR-Sorthem杂交的检测,结果4个株系均呈现阳性,证明Bt抗虫基因已整合到受体大豆的基因组内。1.以三个品种的大豆子叶节为外植体进行子叶节再生系统的优化,结果表明:MS培养基在提高不定芽产生方面明显高于B5BA及MS培养基,三种发芽培养基B5BA、B5、琼脂水培养基发芽实验对不定芽诱导效果表明:BA的添加在发芽阶段即对不定芽产生有明显影响。通过优化,MMS培养基中BA、NAA、脯氨酸的最适浓度分别为2mg/l、0.02mg/l、2g/l。大豆子叶节外植体上子叶的数目影响不定芽的产生,以1/2个子叶产生的不定芽为最多。2.以发芽7天的大豆无菌苗下胚轴切段为外植体,以抗性愈伤为指标,对影响大豆子叶节转化的几个因素进行优化,结果表明:感染农杆菌之前,在高渗培养基上予培养一段时间能提...  (本文共45页) 本文目录 | 阅读全文>>

《安徽农业科学》2008年16期
安徽农业科学

大豆再生体系的研究进展

大豆是重要的经济作物,因此提高和优化大豆品质成为人们关注的热点。人们利用转基因技术提高大豆品质的同时,大豆的组织培养也得到了广泛的研究,20世纪60年代人们曾采用过各种不同的外植体,但植株再生一度十分困难,即使有再生植株发生,频率和重演性极低。进入20世纪80年代以来,大豆的再生体系有了突破性的进展。1980年,Cheng等首先报道用无菌苗的子叶节为外植体,在含高浓度BA(10~50μmol/L)的改良B5培养基上诱导丛生芽获得高频率的再生植株[1]。此后,各种不同的再生体系逐渐为人们所发现。建立一个良好的组培再生系统,是大豆遗传转化成功的前提。因此,笔者对目前研究应用比较多的再生体系的优缺点进行了综述。1胚轴再生体系胚轴作为外植体,是目前研究应用较多的农杆菌转化受体。有许多成功的转化事例,早在1983年陈云昭等就以大豆上胚轴和下胚轴为外植体培养出再生植株[2]。徐香玲等和苏彦等分别将Bt基因,SMV-CP基因、几丁质酶基因通过...  (本文共4页) 阅读全文>>

《沈阳农业大学学报》1999年03期
沈阳农业大学学报

大豆不同外植体组织培养及再生研究

60年代开始,人们对大豆组织培养进行研究,但大豆植株再生仍十分困难,近年研究进展有所加快。国内最早报道的是中国农科院植物所和黑龙江省农科院从大豆下胚轴诱导出再生幼苗,之后陈云召等(1983)从大豆下胚轴和小真叶离体培养成再生植株’‘3I,卫志名等(1988)培养大豆6个品种顶芽组织,也形成了完整的小植株‘’。Barwale(1986),周思君等(1989)通过大豆幼胚培养,经过细胞发生和组织培养获得再生植株‘’q。薛仁镐等(1994)培养幼胚、幼胚子叶、成熟子叶节、成熟子叶等再次获得高频率再生‘’。但当前应用于大豆遗传转化某些方面的操作难度很大,诱导植株再生频率低,重复性差,是大豆基因工程的障碍因素之一。本研究利用大豆不同品种的顶芽、下胚轴、子叶节、子叶、叶片等做为外植体,在不同的培养基上进行了诱导植株再生实验,以促进大豆植株再生技术日臻完善,不断提高植株再生频率,为大豆遗传转化、突变体筛选等奠定基础。l材料与方法1.l供试品种...  (本文共5页) 阅读全文>>