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人CD81基因克隆与真核表达载体的构建及其在细胞内的表达

丙型肝炎病毒(HCV)感染呈全球性分布,目前全球感染率约3%,该病原常可引起持续感染,并且与肝硬化和肝细胞肝癌的发生密切相关,是当前严重危害人类健康的重要传染病。由于HCV体外培养尚未成功,至今仍无满意的细胞和动物感染模型,极大地限制了HCV的研究及丙型肝炎的防治工作。HCV感染致病机制尚未完全阐明。HCV为一单股正链RNA病毒,属于黄病毒属嗜肝病毒科,其基因组编码的糖蛋白E1、E2构成了其高度有序的表面结构,其上可能存在与宿主细胞受体结合的配体表位。业已证明,病毒与细胞表面相应受体的结合是病毒感染复制过程中的始动环节,是决定病毒的宿主特异性、组织嗜性及致病性的主要因素之一。Pileri等报道他们找到同E2结合的细胞表面分子,并经测序证明为CD81,推测CD81是HCV的受体。因此,设想利用HCV受体或受体配体的模拟分子阻断HCV入胞,可望为抗病毒治疗提供新策略,并且可依据这种相互作用设计疫苗。然而,目前国内尚无较为完整的人CD  (本文共73页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京协和医学院
北京协和医学院

miR-122、CD81和Occludin转染树齣骨髓间充质干细胞建立HCV易感细胞模型的研究

丙型肝炎病毒(HCV)是1989年发现的导致非甲非乙型肝炎的主要病原体,其严重危害人类健康。据2017年WHO全球肝炎报告,目前全球HCV感染者已达7.1亿人,每年感染人数还在不断递增。目前HCV治疗的药物主要是2013年12月经美国食品药品监督管理局(FDA)批准在美国上市的索菲布韦(Sofosbuvir),是首个无需联合干扰素就能安全有效的治疗某些类型丙肝的药物,但其价格极其昂贵,需花费8.4万美金/疗程,普通患者难以支付天价药费。中国有2016年上市的长效干扰素派格宾,但目前还没有针对HCV的疫苗,其主要原因是缺乏合适的细胞模型和动物模型用于HCV疫苗及药物有效性和安全性评价。目前对HCV研究主要的细胞模型有淋巴细胞模型、原代肝细胞模型、肝癌细胞系模型和诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)起源的肝样细胞模型;动物模型主要有黑猩猩模型、小鼠模型和大鼠模型。但这些细胞模型对抗H...  (本文共130页) 本文目录 | 阅读全文>>

昆明理工大学
昆明理工大学

CD81、Occludin分子介导HCV对猕猴骨髓间充质干细胞感染的研究

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)属黄病毒科(Flaviviridae)、丙型肝炎病毒属。HCV自1989年被发现以来,全球感染人口已经超过2亿人,其中每年新增病例3.5万。丙型肝炎病毒主要感染途径是血液传播、母婴传播和性传播等。一经感染,85%的感染者会转为慢性感染,其中约20%会引起肝纤维化、硬化,5%会发展成为肝癌。长效干扰素PEG-IFNα/利巴韦林联合已在临床广泛使用,DAA蛋白酶抑制剂--博赛匹韦或特拉匹韦、干扰素联合利巴韦林的三联治疗,已取得较好的治疗效果。最近,核苷类RdRp酶抑制剂sofosbuvir和NS5A抑制剂velpatasvir被美国FDA批准使用,并在此基础上发展了 Sovaldi(Sofosbuvir)和velpatasvir联合使用的Epclusa,此类药物对无肝硬化或代偿肝硬化(轻度肝硬化)患者均有较好疗效。但以上药物价格昂贵,有些已出现耐药突变,而针对丙型肝炎的疫苗也...  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中科技大学
华中科技大学

抗CD81抗体对星形胶质细胞的增殖抑制作用

CD81分子,即抗增生抗体识别的靶抗原(Target of the Antiproliferative Antibody-1, TAPA-1),从其结构上来看属于四跨膜区蛋白( tetraspanin )超家族成员,含有4个跨膜转膜区和2个胞外区,在除红细胞、血小板和神经元以外的其它细胞中表达,可影响细胞的粘附、激活、增殖和分化,有改变细胞形态、抑制合胞体形成、参与信号传导等生物学功能。星形胶质细胞是具有增殖能力的细胞,许多细胞因子和生长因子参与了星形胶质细胞增殖与分化的调节。有文献报道:在不同分化状态的星形胶质细胞中CD81的表达也不同。本室的研究也发现体外培养的星形胶质细胞在未汇合时CD81的表达较低,随着星形胶质细胞密度的不断增加至细胞汇合时,CD81的表达也逐渐增强。这表明CD81影响了星形胶质细胞的增殖,但究竟有何影响尚不清楚。本课题的第一部分对星形胶质细胞进行了培养,通过绘制星形胶质细胞的生长曲线和增殖指数曲线,探讨...  (本文共45页) 本文目录 | 阅读全文>>

《国外医学(免疫学分册)》2001年03期
国外医学(免疫学分册)

CD81与免疫应答

CD8 1(TAPA 1)是一种分子量为 2 6KD的非糖基化膜蛋白 ,属干四跨膜区蛋白 (tetraspanin)超家族成员 ,含有 4个跨膜转膜区和 2个胞外区 ,在除红细胞和血小板以外的其它组织中表达 ,可影响细胞的粘附、激活、增殖和分化 ,有改变细胞形态、抑制合胞体形成等生物学功能[1] 。本文主要就CD81对免疫应答影响的研究进展作一阐述。1 CD81与免疫细胞的分子相关性不同类型细胞表面的CD81可以影响不同的相关蛋白 ,它可能改变蛋白的相关性 ,使它们同其他的结构或信号蛋白相关 ,也可能增强CD81同相关蛋白的亲合力 ,增强与结构蛋白的相互作用或维持对阳性或阴性信号的刺激。通过免疫沉淀等实验发现 ,B淋巴细胞表面CD81以分子复合体的形式存在 ,包括CD19、CD2 1和干扰素可诱导性抗原Leu 13[2 ] ,它们构成了B细胞抗原受体 (BCR)的共同受体。BCR中CD19是免疫球蛋白超家族成员 ,而CD2 1属...  (本文共3页) 阅读全文>>

辽宁师范大学
辽宁师范大学

七鳃鳗CD81的表达、抗体制备及相关功能的研究

CD81属于四跨膜蛋白超家族,广泛表达于细胞表面,是细胞内外信号传递的重要桥梁。CD81以分子复合物的形式存在与B细胞表面,在T细胞表面与CD4和CD8相关,CD81参与形成免疫突触,在适应性免疫和先天免疫中都起到重要的作用。因CD81具有HCV-E2的结合位点,而成为HCV的受体,进而成为研究HCV的靶向位点,为预防和诊疗提供科学依据。目前,针对CD81的研究主要局限于高等脊椎动物,而在古老的脊椎动物中研究甚少。七鳃鳗作为无颌类脊椎动物,一直被看作是研究低等脊椎动物的重要生物。因在幼体七鳃鳗中发现了可变淋巴受体VLRs(VLRA、VLRB、VLRC)的存在更受到广泛关注,可变淋巴受体可能是适应性免疫的起源。因此,研究七鳃鳗体内的CD81对于探讨七鳃鳗免疫应答相关过程具有重要意义。本文中,因蛋白酶切和纯化需要,将表达载体pCold TF进行改造,利用多点突变的方法将载体上原有的His标签替换掉,在七鳃鳗体内克隆得到的Lja-CD...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>