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TIMP-1抑制高糖引起的大鼠肾小球系膜细胞凋亡

目的:探讨TIMP-1是否影响高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及其作用机制。方法:1)大鼠肾小球系膜细胞分别经含5mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、30 mmol/L、40 mmol/L葡萄糖及含30mmol/L甘露醇的1640培养基培养24h、48h、72h后用流式AnnexinV/PI双染法检测凋亡率。2)用脂质体将正、反义人TIMP-1及空载体转染到肾小球系膜细胞中,建立体外的人TIMP-1高表达和低表达系统。PCR检测人TIMP-1的整合;RT-PCR检测人TIMP-1的表达及转染人 TIMP-1后对大鼠内源性鼠TIMP-1表达的影响。3)描绘各组细胞的生长曲线。4)高糖刺激24小时后丫啶橙染色,荧光显微镜下观察。5)用含30mmol/L葡萄糖的1640培养液作用系膜细胞24h。RT-PCR检测bax和bcl-2的表达;CaspACETM Assay System,Colorimetic试剂盒检测Casp  (本文共48页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国实用内科杂志》2006年20期
中国实用内科杂志

ERK1/2通路在TIMP-1抑制大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路是否参与基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)抑制大鼠肾小球系膜细胞的凋亡。方法选择大连医科大学附属第一医院2005年8月至2006年2月应用人正、反义TIMP-1转染大鼠肾小球系膜细胞,分别用高糖(25mmol/L)和MEK1特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激24h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)观察细胞外信号调节激酶信使RNA(ERK1 messenger RNA)的表达;酶联免疫吸附实验(ELIS...  (本文共4页) 阅读全文>>

大连医科大学
大连医科大学

TIMP-1抑制肾小球系膜细胞凋亡及与ERK1/2 MAPK通路的关系

肾脏固有细胞的增殖、分化和凋亡及细胞外基质的合成和降解在肾脏的正常发育和肾脏疾病的发生发展中都有至关重要的作用。组织金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)是MMPs的天然抑制剂。TIMP-1是TIMPs家族的主要成份,我们前期的工作表明: TIMP-1对肾脏的影响主要包括对细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响和对肾小球系膜细胞凋亡的影响,但其作用机制尚不清楚。RNA干扰技术(RNA interference,RNAi),是近几年出现的一种利用小的干扰RNA(small interference RNA,siRNA)高效、特异地阻断体内特定基因表达,促使细胞表现出特定基因缺失表型的技术。本研究的第一部分旨在通过RNA干扰技术探讨TIMP-1 shRNA(small hairpin RNA,shRNA)对TIMP-1基因的沉默效果...  (本文共67页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华肾脏病杂志》2006年09期
中华肾脏病杂志

ERK1/2 MAPK通路在TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路在基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用。方法将人正义、反义TIMP-1用脂质体法转染大鼠肾小球系膜细胞,并将细胞分为正常对照组、未转染组、空载体组、正义转染组和反义转染组。各组细胞分别用高糖(25 mmol/L)和(或) MEK(ERK1/2通路中的MAPK激酶)特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激24 h。应...  (本文共5页) 阅读全文>>

大连医科大学
大连医科大学

TIMP-1抑制大鼠肾小球系膜细胞凋亡与PI3K/AKT通路的关系

目的:探讨 PI3K/AKT 通路在 TIMP-1 抑制高糖引起大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程中的作用和机制。 方法:⑴脂质体法将正、反义人 TIMP-1(hTIMP-1)及空载体转染到大鼠肾小球系膜细胞;⑵MTT 法检测加与不加 PI3K 抑制剂 LY294002时,高糖诱导 24 小时后细胞生存率;⑶流式检测凋亡率;⑷试剂盒检测 Caspase 9 活性;⑸RT-PCR 检测 Bcl-2 mRNA;⑹Western blot 检测BAD、phospho-BAD、AKT 、phospho-AKT 水平。 结果:通过 MTT 及流式检查发现,与对照组相比,正义转染组细胞的生存率高而凋亡率降低(P0.05),反义转染组生存率降低而凋亡率显著提高(P0.05),LY294002 的加入可部分抵消 TIMP-1 的抗凋亡作用。正义转染组、反义转染组和未转染组细胞的 Bcl-2 mRNA 表达较对照组均有升高,但三者之间无差异,LY2940...  (本文共40页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

MMP-9及TIMP-1在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制剂-1(TIMP-1)在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及其与浸润和转移的相关性,分析恶性黑色素瘤发生、发展的机制。方法 应用免疫组化S-P(Streptavidin perioxidase)法检测56例皮肤恶性黑色素瘤、20例色素痣组织中MMP-9和TIMP-1的蛋白表达。结果 56例皮肤恶性黑色素瘤中MMP-9和TIMP-1蛋白阳性表达率为75.0%、73.2%;20例皮肤色素痣细胞内MMP-9和TIMP-1阳性表达率为65.0%、55.0%。两组比较无统计学差异:MMP-9(X~2=0.74,P0.05);TIMP-1(X~2=2.26,P0.05)。MMP-9和TIMP-1的阳性表达率随恶性黑色素瘤浸润程度的加深而增高,但无显著性差异(x~2=0.24—3.25,P0.05)。有淋巴结转移者MMP-9阳性表达率为88.0%,无淋巴结转移者为68.2%,两组比较有显著性差异(x~2...  (本文共42页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

冠心病患者血清基质金属蛋白酶9及其抑制物TIMP-1水平及其意义

目的:观察冠心病患者血清MMP-9及TIMP-1水平,探讨MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1在冠脉粥样硬化发生、发展中的作用及其测定的临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法对30例健康对照者和90例冠心病患者(其中心肌梗塞组30例,不稳定心绞痛组30例,稳定心绞痛组30例)血清MMP-9及TIMP-1水平进行检测,分析其与冠心病的关系。同时还测定了CRP、LDL-C等冠心病相关指标,分析其与MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1之间的相关性。结果:冠心病患者血清MMP-9、TIMP-1水平及MMP-9/TIMP-1比值与对照组比较显著升高(P0.05),且随着病变程度呈逐步升高趋势,MMP-9与MMP-9/TIMP-1、CRP、LDL-C呈正相关(P0.05)。TIMP-1与MMP-9/TIMP-1、CRP、LDL-C呈负相关(P0.05)。结论:认为MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1参与...  (本文共45页) 本文目录 | 阅读全文>>