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人肝细胞可回复永生化逆转录病毒载体的初步研究

背景和目的:肝细胞材料已成为限制生物人工肝(bioartificial liver, BAL)及肝细胞移植(hepatocytes transplantation, HTX)发展的瓶颈问题,这一问题的解决必将大大提升BAL及HTX的临床实用价值。理论上讲,人肝细胞(包括成人肝细胞及人胎肝细胞)最为理想,但成人供肝来源极其有限且仅用于肝移植,加之成人肝细胞在体外增殖能力差,故大量获得成人肝细胞是不可能的。胎肝的利用因涉及伦理问题,亦难以推广应用。使用动物肝细胞又存在发生免疫反应及传播动物病毒的危险。肝细胞株(如HepG2、C3A、HHY41、HepZ等)分化功能较原代肝细胞差,且多为瘤源性或由原代肝细胞经病毒转染获得,存在安全性问题。可回复性永生化程序为解决细胞材料问题提供了新的思路及手段。其基本原理是先将永生化基因猿猴病毒40大T抗原基因(simian virus 40 large T antigen gene, SV40T)导  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

《国外医学.流行病学传染病学分册》1987年05期
国外医学.流行病学传染病学分册

HBV在成人肝细胞培养系统中复制

本文报道,通过局部灌流和振荡方法从外科肝活检标本分离成人肝细胞和进行原代培养的技术,用乙型肝炎病毒(HBV)接种培养的肝细胞,以证明HBV在此培养系中复制。 从血清HBsAg和抗一HBc阴性的肝胆疾病、肿瘤或外伤患者获得肝脏活检标本,置于冰冷的培养液中,于37℃以含‘0.smMEDTA的无钙Hanlcs液用导管通过门静脉分枝灌注肝块5分钟。以此法去除血细胞后,再以。,肠肠胶原酶溶液(每升含NaCI8 .09,KCI 0 .49 CaCI 0 .569,Narl,PO、o,789,Na:HPO、·12H,0 0.159和I一Iepes2.389,试用前调至pH了.5)于37℃灌注,流量为50ml/分。胶原酶溶液灌注30、40分钟后,将肝块置于1 ocm塑料培养皿上,切成小片,于37℃在胶原酶溶液中振荡(90次/分)15分钟,然后用吸管吹打,分离细胞,以不锈钢筛一60滤过细胞悬液,于509离心2分钟,再将细胞团混悬于无血清Willi...  (本文共2页) 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

NO信号上调人肝细胞内源FⅧ的表达

目的:通过对人永生化正常肝细胞LO2中凝血因子Ⅷ(coagulation factor Ⅷ,FⅧ)启动子区域组蛋白乙酰化和去乙酰化的研究,探索NO信号激活LO2细胞中FⅧ高表达的分子机制。方法:建立L-精氨酸激活人肝细胞L02内源凝血因子FⅧ高表达的分子细胞模型。取对数生长期人类永生化肝细胞LO2随机分为:对照组和L-精氨酸组、组蛋白乙酰化抑制剂组和组蛋白去乙酰化抑制剂组。L-精氨酸组(L-精氨酸的终浓度10mM),对照组用同等体积的PBS取代L-精氨酸,组蛋白乙酰化抑制剂组(C646的终浓度25uM),组蛋白去乙酰化抑制剂组(SAHA的终浓度50nM),分别培养0h、12h、24h、36h、48h、60h。用RT-PCR方法检测各组中人FⅧ基因的转录水平。用染色质免疫共沉淀(ChIP)分别检测对照组,L-精氨酸组,组蛋白乙酰化抑制剂组,组蛋白去乙酰化抑制剂组FⅧ基因启动子区域组蛋白乙酰化水平。构建核转录因子(Nuclear f...  (本文共45页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

胰高血糖素样肽-1对正常人肝细胞作用机制的研究-PI3K通路

目的:1.体外培养正常人肝细胞L02系。2.研究胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)对正常人肝细胞的作用机制-PI3K通路。3.为GLP-1有效的降糖、降低体重以及改善胰岛素抵抗等临床治疗提供初步的理论依据。方法:1.体外培养正常人肝细胞L02系,通过倒置显微镜形态学观察。2.将培养的正常人肝细胞随机分为7组:Ctrl组,GLP-1(10nmol/l)组,GLP-1(1nmol/l)组,INS组(10nmol/1),INS组(1 nmol/l), GLP-1 (10nmol/l)+INS(10nmol/1)组,GLP-1(1nmol/l)+INS (1nmol/l)组,分别干预48小时。观察各组细胞的形态学变化,并用MTT法检测GLP-1、INS对正常人肝细胞存活数量和活力的影响,观察两种不同浓度的GLP-1与INS对人肝细胞的生长促进作用的差别。3.将培养的正常人肝细胞随机分为6组...  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>

南方医科大学
南方医科大学

多点穿刺灌流法分离成人肝细胞及其体外功能的实验研究

研究背景:人工肝支持系统是目前公认治疗各种急性肝功能衰竭的最有效方法,以肝细胞为基础的生物型人工肝(Bioartificial Liver,BAL)更是未来治疗各种急慢性肝病的希望所在。生物型人工肝以体外培养的具有生物活性的肝细胞为主要构成,因而具有类似肝的解毒、分泌、合成及转化等功能,其核心部分便是执行肝功能的肝细胞。随着近代细胞工程学的进展,细胞生物学、组织培养技术、生物学技术的迅猛发展,肝细胞作为构建生物人工肝的生物部分,作为细胞移植治疗急慢性肝衰竭的种子细胞以及作为药物筛选的靶细胞,成为目前研究的热点。而制备和培养高活力的肝细胞,尤其是人肝细胞的制备,正是这些研究的最基本环节。肝细胞分离方法有多种:机械分离法、鳌合法和酶消化法等。最初的机械分离法始于半个多世纪前,1956年Sorrentino第一次用机械的方法分离新鲜肝组织制成匀浆,并在体外进行药物解毒试验,但机械分离法获得的肝细胞,细胞数量少、活性差,逐渐被弃用。19...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《江苏大学学报(医学版)》2007年04期
江苏大学学报(医学版)

染料木黄酮对人肝细胞C-反应蛋白表达的影响

C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)属于系统发育上十分古老,结构高度保守的穿透素(pentrax-in)蛋白家族成员。1930年,由洛克菲勒大学的Tillett和Francis博士在由肺炎链球菌引起的肺炎患者血中发现。CRP主要由肝脏合成,离体与在体实验均证实[1],白介素-6(interleukin-6,IL-6)是CRP基因表达的主要诱导者。传统观点认为,CRP是天然免疫系统的重要组分和炎症标志物。越来越多的医学基础与临床研究显示[2-6]:CRP可以直接诱导炎症,并且是心血管疾病最为有力的预示因子与最重要的危险因子,可以直接参与动脉粥样硬化(ath-erosclerosis,AS)病理发生的各个重要阶段,促进疾病的发生、发展。目前,甾体类雌激素用于临床激素替代治疗,能使绝经后妇女的冠心病发病率降低约44%~50%,但长期使用,又会产生乳腺癌、子宫内膜癌等不良反应,故其临床应用受到限制。近年的研究发现:...  (本文共4页) 阅读全文>>