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肺炎支原体P30粘附素基因的原核表达和初步应用

第一部分 肺炎支原体 P30 蛋白的原核表达及初步分析目的:通过体外扩增 MP 的 P30 粘附素基因,构建 P30 基因的原核表达质粒,在 E.coli 中表达并鉴定;用亲和层析法分离纯化 rP30 蛋白;以纯化的 rP30 蛋白为抗原建立间接 dolt-ELISA 法,用临床病例评价 rP30 蛋白在 MP 感染免疫学诊断中的价值;为探讨 MP 的致病机制和临床血清学诊断提供新的依据。方法:用引物修饰法将 P30 基因中唯一的“UGA”码突变为“UGG”后作为上游引物,并带上 BamH I 的酶切位点,下游引物带 Sal I 位点;以 MP 基因组 DNA 为模板,用 PCR 方法扩增 P30 基因,将其定向克隆入 pET32a(+)质粒,构建 pET32a(+)/P30 重组体;测序鉴定正确后用重组体转化 BL21(DE3)菌,在 IPTG 诱导下进行表达;表达产物经SDS-PAGE 鉴定后用阳性 MP 感染患儿血清做 W  (本文共68页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国病原生物学杂志》2008年11期
中国病原生物学杂志

弓形虫昆山分离株P30蛋白的纯化、复性和鉴定

弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患病,全世界大约有25%~50%的人感染弓形虫[1],我国弓形虫的感染率为5%~10%。目前,弓形虫病的诊断仍然以免疫学诊断为主,诊断抗原的选取及其纯度关系到试剂盒质量的好坏。为研究弓形虫主要膜蛋白P30在免疫学诊断上的价值,本实验用pET28b-P30转化大肠埃希菌以表达该蛋白,并对其进行纯化、复性和鉴定。材料和方法1材料1.1弓形虫虫株弓形虫昆山分离株由江苏省寄生虫病研究所王崇功研究员惠赠。1.2质粒与菌株pET28b-P30由本室构建保存[2];大肠埃希菌BL21(DE3)由本室保存。1.3主要试剂His TraptmHP为Amersham公司产品;BAC蛋白测定试剂盒购于碧云天公司;其余试剂为国产分析纯。2方法2.1 P30蛋白的表达按分子寄生虫学实验指南[3]进行。2.2包涵体的纯化与溶解用6 ml PBS重悬细菌(0.3~0.4 g湿重),冻融5次,超声裂菌,10 000 r/...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国人兽共患病杂志》2001年04期
中国人兽共患病杂志

弓形虫昆山分离株P30抗原基因的克隆与表达

在已知众多的弓形虫抗原中 ,P30具有高度的免疫原性和免疫保护性 ,是最有希望成为疫苗的候选抗原。为获得大量的P30抗原 ,进行疫苗的研究 ,我们从弓形虫昆山分离株的cDNA文库中克隆到P30基因并在大肠杆菌中进行了表达。1 材料和方法1.1 虫株、cDNA文库、菌株和质粒 弓形虫昆山分离株由江苏省寄生虫病防治研究所保种 ,弓形虫病人血清由江苏省人民医院妇产科王海琦教授提供 ,弓形虫昆山分离株速殖子期cDNA文库由本实验室构建保存 ,大肠杆菌菌株XL1-Blue、及质粒pBluescriptIISK( - )购自Stratagene公司 ,表达载体pGEX - 5X - 3和大肠杆菌菌株BL2 1购自Amer shamPharmaciaBioech公司。1.2 酶及主要试剂 限制性内切酶及连接酶购自Takara公司 ,Glutathionesepharose 4B购自Amer shamPharmaciaBioech公司。其余试剂...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国法医学杂志》1988年02期
中国法医学杂志

100例健康人精液中P30含量的检测

P3O是人精浆中的一种特异蛋白,是由前列腺分泌随精液排出体外的一种糖蛋白,分子量约3。,000。P30具有良好的种属和人体器官的特异性,仅存在于人精液中,所以近年来国外已把检出P30做为确定人精液的一种可靠的方法。P30在人精液中的含量国外已有报道,但中国人精液中的含量至今未见报告。我们应用本实验室制备的高特异性,高效价的抗P30血清以单向琼脂扩散法对10。例健康人精浆中的P30做定量检测。现报告如下。 各不同浓度的P30标准品经多次重复实验,由所测得的各沉淀环直径平均值与标准P3。含量计算出直线回归方程式,并画出标堆曲线。以样品所测得的沉淀环直径,在标谁曲线上查出P30含量的对数,在反对数表上查出原数,再乘以精浆的稀释倍数,即得精浆中每毫升P30的含量。 结果一、标准曲线如图。其回归系数b=0.3079。氛友g︵省\望︶碉如。g材料和方法 1.精浆的收集和保存:收集健康成年人新鲜精液200份,分别经3,ooor/min离心15...  (本文共2页) 阅读全文>>

《华西医科大学学报》1989年02期
华西医科大学学报

应用抗p30血清检验人类精斑的研究

自Sensabaughci〕用抗pso血清检验人类精斑以来,国外学者已将p30检洲法与某些检洲精斑的方法,如酸性礴酸酶、丫一谷氮酸转肚醉等进行了比较〔卜8〕,但将p30检测法与精子检出法作系统比较,在所查国内外文献中尚未见报道。作者用自制的抗p30血清检验人类精斑,并与精子检出法进行了比较,现报道如下:材料与方法 1.精应检材共136份,包括下列4种:①人类精斑98份,从本实验室收存的人类精斑中随机抽得,包括精斑73份、精液与阴道液混合斑18份,精液与唾液混合斑7份,②人类无精子精斑10份,用本院门诊检验室提供的无精子精液制备,⑧动物精斑20份,用猪、狗、牛、羊、兔、大鼠、小鼠和鸡等8种动物精液制成;④强奸案可疑精斑8份,由成都市、乐山地区和金堂县公安局提供。 2.非精斑检材81份,从本室收存的样本中随机抽得,包括下列3种:①人类体液及分泌液斑25份,包括阴道分泌液、睡液、泪液、鼻涕、痰液、初乳、血液及尿液斑,②人体组织浸液斑4...  (本文共3页) 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗免疫效果研究及弓形虫ROP2-P30基因工程复合抗原的构建

本课题基于本室与复旦大学生化与分子生物学实验室共同研制成功弓形虫P30乳酸球菌(Lactococcus lactis/P30)口服疫苗基础上的延伸工作,在研究的第一部分对弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗的实际免疫效果进行考察,第二部分利用基因工程手段构建弓形虫ROP2-P30复合抗原。目的:1.课题研究的第一部分观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗(L.lactis/P30)的免疫效果。首先确定L.lactis/P30免疫小鼠产生免疫保护性的适宜剂量,在此剂量下考查L.lactis/P30口服免疫在小鼠体内诱导的体液免疫反应,以及产生的保护性效果,进一步分析L.lactis/P30口服免疫诱导小鼠产生的细胞免疫效果和抗体IgG的动态发生过程,最后观察L.lactis/P30口服免疫鼠血清中,细胞因子IFN-γ、IL-2及NO分子的变化情况。2.本研究课题的第二部分致力于弓形虫病复合型疫苗的研制,以进一步提高弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗的...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>