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人参愈伤组织细胞表达人干扰素α 2b的研究

目前,干扰素是国际上公认的治疗乙肝和丙肝以及部分肿瘤的首选药物,动物试验表明,口服干扰素具有较好的应用前景。本研究拟用人参愈伤组织表达干扰素期望为进一步提高口服干扰素的疗效打下基础。我们应用PCR 和:DNA 重组技术构建出含有人干扰素a 2b 基因的植物细胞表达载体pBIFN,然后转化根癌农杆菌LBA4404,利用农杆菌介导的转化法将人干扰素a 2b 基因导入人参愈伤组织细胞并整合到其基因组中。用G418 培养基筛选出抗性细胞株;以筛选的抗性细胞DNA 为模板进行:PCR,产物经DNA 测序表明人干扰素a 2b 基因已成功整合到人参愈伤组织细胞基因组中;经用RT-PCR.和琼脂糖凝胶电泳证明存在人干扰素a 2b 基因的转录产物;用WISH-VSV 系统检测分析表明表达的人干扰素a 2b 具有一定的生物学活性。说明我们已成功构建了含有人干扰素a 2b 基因的植物细胞表达载体并通过农杆菌介导的转化方法获得了能够表达人干扰素a 2b  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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人参愈伤组织细胞表达CTB-hIFN-α2b融合蛋白的研究

人干扰素α2b(hIFN-α2b)具有多种生物学功能,包括广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞增殖和免疫调节的作用,在临床上主要用于治疗病毒性肝炎及肿瘤性疾病。目前,临床应用的干扰素制剂主要是从大肠杆菌表达系统获得的基因工程重组蛋白,并以注射给药为主。由于干扰素在血液中的半衰期短,静脉注射后很快从血中消失,故很难维持较高的血药浓度,在临床应用上只能以提高用药频率和用药量来解决,这样就很容易诱发干扰素抗体的产生及增加毒副作用。因此,如何改进给药途径是其开发的一个重要方向。霍乱毒素B亚单位(CTB)是霍乱毒素的无毒结合亚基,具有载体蛋白的特性,并且由于CTB本身具有很强的免疫原性,能剌激血液和肠道产生特异性保护抗体,与其他抗原共同使用还具有免疫佐剂的作用,能增强抗原蛋白的免疫效力和免疫特异性。人参是一种珍贵的药用植物,具有独特的营养和药用价值。近年来,利用转基因植物作为生物反应器生产药用蛋白正得以深入研究,多方面的报道证明植物可以高水平表达具有...  (本文共110页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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人参愈伤组织细胞表达HBsAg-rhIFNα-2b融合蛋白的研究

乙肝病毒表面抗原(HBsAg)基因已相继在大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞和昆虫杆状病毒体系中表达。其中产业化的有酵母和CHO系统两种。由于这两种系统表达的HBsAg制备的疫苗仍然有5-10%的人群不产生抗体,因此,人们一直在探索能够更有效刺激机体产生HBsAg抗体的新型疫苗。重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)是治疗乙肝最有效的药物,在人参细胞中表达其与HBsAg的融和蛋白做为抗原,借助人参皂甙的免疫增强作用,有可能使机体产生更强的细胞免疫和体液免疫,并获得治疗性乙肝疫苗。本研究构建了携带HBsAg-rhIFNα-2b融合基因的植物细胞表达载体,采用农杆菌感染方法将其整合到人参愈伤组织细胞的染色体上,得到了能够表达HBsAg-IFNα-2b融合蛋白的人参愈伤组织细胞系(150)。在试验中还建立了固体和液体培养两种培养系统。该细胞系不仅可以表达HBsAg-IFNα-2b融合蛋白,而且可以产生具有增强疫苗免疫效果作用的人参皂甙。...  (本文共157页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国免疫学杂志》2006年09期
中国免疫学杂志

人干扰素基因植物表达载体的构建及其在人参愈伤组织细胞中的表达

目的:利用组织培养人参愈伤组织细胞表达人干扰素,探讨用植物细胞表达人类基因的可行性。方法:用PCR从pBV889扩增人干扰素α2b(hIFN-α2b)编码基因,将其克隆于pMD18-T载体和pBI121,进而构建植物细胞表达载体pBIFN。用冻融法将pBIFN导入根瘤农杆菌LBA4404,经卡那霉素和利福霉素筛选后利用农杆菌介导的转化法将hIFN-α...  (本文共4页) 阅读全文>>

东北林业大学
东北林业大学

喜树愈伤组织形成过程的细胞学研究

本文利用光学显微镜和透射电子显微镜分析技术,对喜树叶片及半木质化枝条愈伤组织形成过程进行观察研究。研究结果表明:利用喜树种子萌发的幼苗,取不同生长时间的叶片进行组织培养,愈伤组织形成时间差别不大,一般在十天左右,愈伤组织形态、质地、物理性状相似,白色,易于分散。显微结构观察显示:喜树叶片置于培养基一天以后即发生细胞分裂,叶片切口处叶肉细胞最早活化分裂,随后分裂逐渐遍及整个培养材料,分裂方式为有丝分裂,愈伤组织起源于叶肉细胞。超微结构观察显示:以喜树叶片为外植体诱导愈伤组织过程中,叶绿体中积累大量淀粉,基质中淀粉粒数量逐渐增多,叶绿体产生原质体芽和原质体,是叶肉细胞脱分化过程的中间演变阶段。在愈伤组织形成过程中,线粒体、内质网分布于叶绿体及质膜周围,数量较多,内质网为粗面内质网。细胞质在愈伤组织形成过程中逐渐减少,胞间隙在愈伤组织形成过程中逐渐增大,为裂生型胞间隙。利用喜树半木质化枝条扦插过程中,切口上端周皮处可见愈伤组织,它们来...  (本文共48页) 本文目录 | 阅读全文>>

《核农学报》2019年04期
核农学报

玉米单倍体胚性愈伤的诱导与鉴定

为建立一套适合玉米单倍体胚性愈伤培养和快速筛选体系,以单倍体诱导系MT-1为父本,18-599红为母本进行单倍体诱导,设置暗培养、全光照培养和光暗周期培养3种光照培养方式,均分别培养0、1、5、10、20、40 h后,观察幼胚形态和颜色。结果表明,自交系18-599红的单倍体和二倍体幼胚均能正常诱导形成胚性愈伤组织;不同光照培养方式对紫色(二倍体)愈伤率的检出效果依次为光培养光暗周期培养暗培养。通...  (本文共7页) 阅读全文>>

《安徽农业大学学报》2019年03期
安徽农业大学学报

欧洲卫矛愈伤组织分化及其生理生化特性

以欧洲卫矛生长健壮的叶片愈伤组织为材料,通过不同激素配比筛选出适宜其分化的培养基,将愈伤组织置于不同条件下培养。结果表明,适宜欧洲卫矛愈伤组织分化的培养基为MS+1.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA;欧洲卫矛愈伤...  (本文共6页) 阅读全文>>