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抗虫基因表达载体的构建及农杆菌介导转化烟草的研究

虫害是危害农作物高产的主要原因之一。用化学杀虫剂来控制害虫,成本较高,还会造成环境污染。使用生物技术可将外源基因导入农作物,使其具有抗虫性。蝎毒基因与昆虫几丁质酶基因都是重要的抗虫基因。普通烟草(Nicotiana tabacum L.)由于其组织培养的易操作性和较强再生能力,是植物基因工程的模式植物。利用烟草这一模式植物研究外源基因在转基因植物中的协同表达,对抗虫基因工程研究有一定理论意义。本研究将含有几丁质酶基因和蝎毒基因双价抗虫基因的重组质粒pBI101-Chi-BmK ITS经酶切连接后,筛选得到两个含单价抗虫基因的重组质粒pBI101-BmK ITS与pBI101-Chi,分别含有蝎毒基因和几丁质酶基因。利用冻融法将三个重组质粒pBI101-Chi-BmK ITS、pBI101-Chi与pBI101-BmK ITS分别转化农杆菌LBA4404中,经过遗传标记筛选,PCR鉴定,获得含有目的基因的农杆菌。大量培养烟草无菌苗  (本文共47页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

Bt和CpTI双价抗虫基因共转化菘蓝提高对害虫抗性的研究

本研究构建分别带有CryIA(c)基因和CpTI基因两表达盒的植物表达载体pGBI121S4ABC。采用农杆菌介导转化菘蓝。双基因转化的阳性率二倍体子叶是14.75%,四倍体子叶是16.67%。Southern杂交分析,结果转基因菘蓝出现预期的杂交带,未转化植株没有杂交信号,并都呈单一拷贝。ELISA检测基因的蛋白质表达量,发现CryIA(c)基因蛋白表达量可高达436.33 ng/g, CpTI可达158.31 ng/g。用转基因菘蓝叶片饲喂目标害虫小菜蛾,有两株能完全杀死目标害虫,有4株能部分杀死目标害虫,40%以上的转基因植株具有明显抑制害虫生长的作用。转抗虫基因菘蓝前后有效部位成分含量没有明显变化。  (本文共133页) 本文目录 | 阅读全文>>

新疆农业大学
新疆农业大学

Bt基因与ARA基因双价抗虫基因表达载体的构建及转化油菜研究

本实验将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白的基因(Bacillus thuringiesis,简称Bt)与反枝苋菜凝集素基(Amaranthus retroflexus agglutinin, ARA)构建成双价基因的表达载体,编码两种蛋白,既能抗鳞翅目害虫,又能抗同翅目害虫。将双价基因载体转化油菜。构建ARA基因原核表达载体pET-ARA和Bt基因原核表达载体pET-Bt,经IPTG诱导后,pET-ARA/E coli BL21表达出分子量为36kDa的特异蛋白,pET-Bt/E coli BL21表达出分子量为73.7kDa的特异蛋白,与理论计算的分子量大小相符。随着诱导时间的延长,表达蛋白的积累量也增加。这说明Bt基因和ARA基因在微生物中能够表达,而且阅读框架完整,未发生提前终止现象。构建双价抗虫基因的植物表达载体pBI-Bt-BA,Bt基因表达单元中的CaMV35s和?序列为带增强子的35启动子序列,ARA基因表达单元的启动子...  (本文共67页) 本文目录 | 阅读全文>>

《山地农业生物学报》2010年03期
山地农业生物学报

植物凝集素及其在抗虫基因工程中的应用

植物凝集素是一类具有高度特异性糖结合活性蛋白,其糖结合特异性主要针对外源寡糖,主要生理功能是介导...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中国生物工程杂志》2008年11期
中国生物工程杂志

植物来源抗虫基因的研究进展

植物抗虫基因工程为农林业生产中的害虫防治提供了新的途径,随着研究的不断深入,已经获得了很多抗虫基因。综述了目前源于植物...  (本文共6页) 阅读全文>>

《河北林果研究》2006年03期
河北林果研究

转双抗虫基因741杨嫩枝扦插苗抗寒性的研究

为研究转双抗虫基因741杨不同时期扦插苗的抗寒性,以5月、6月、7月、8月嫩枝扦插苗为试验材料,进行低温处理,测定生理反应和恢复生长能...  (本文共3页) 阅读全文>>

《河北农业大学学报》2003年02期
河北农业大学学报

青杨双价抗虫基因转化系统研究

利用农杆菌介导法,对青杨进行含部分改造的BtCryAc基因(Bt基因)和慈姑蛋白酶抑制...  (本文共4页) 阅读全文>>