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SARS相关冠状病毒S1基因片段真核表达载体的构建及其免疫活性测定

目的:根据GeneBank登录的BJ01株SARS-CoV核酸序列合成801bp S1基因片段(22382bp~23182bp),构建SARS-CoV相关冠状病毒S1基因片段真核表达载体,并肌注免疫BALB/c小鼠,观察小鼠所产生的体液免疫和细胞免疫应答水平,从而为SARS-CoV生物学活性的研究及核酸疫苗的研制提供实验依据。方法:用PRIMER5.0引物设计软件设计引物,聚合酶链反应(PCR)扩增S1基因片段801bp。将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接,经蓝白斑筛选、双酶切鉴定及序列分析后,亚克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中;阳性克隆经双酶切鉴定后转染HeLa细胞,免疫细胞化学法与Western-Blotting鉴定其在真核细胞中的表达;以pcDNA3.1(+)/S1肌注免疫6周龄BALB/C小鼠,PCR与免疫组化法检测SARS相关冠状病毒S1基因在小鼠股四头肌的表达,ELISA法检测抗SARS-CoV Ig  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

RT-PCR检测马冠状病毒方法的建立和初步应用

马冠状病毒病是由冠状病毒科的马冠状病毒(Equine coronavirus,ECV)引起的新生幼驹水样腹泻、发烧等症状的疾病,本研究参考Genbank发表的马冠状病毒(Equine Coronavirus,ECV)的核蛋白基因序列,设计合成一对针对马冠状病毒基因片段特异的引物,对马冠状病毒基因组进行RT-PCR扩增。PCR产物经琼脂糖电泳分析,获得一条约425bp的阳性条带。通过退火温度、延长温度及时间等条件的优化,建立了RT-PCR检测马冠状病毒的方法。利用所建立的方法,对近年来保存的幼驹腹泻病料进行马冠状病毒感染进行RT-PCR检测。检测结果发现,在所检测的30份样品中,有3份呈阳性反应,进一步验证了该方法在临床应用的可行性。将获得到的Autrailia-1株的PCR产物克隆到pGEM-T载体中,并测序,与Gene Bank中公布的马冠状病毒(AF251144)序列进行比对,同源性为98%,证明所得到的cDNA确为马冠状病...  (本文共36页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国预防兽医学报》2019年06期
中国预防兽医学报

猪德尔塔冠状病毒侵入宿主细胞的途径:内吞体途径和细胞膜途径

冠状病毒是目前自然界已知的最大RNA病毒,能够感染人、哺乳动物和禽类,引起呼吸系统、消化系统和神经系统疾病。冠状病毒分为4个属,分别是Alph...  (本文共1页) 阅读全文>>

《首都食品与医药》2018年01期
首都食品与医药

我国在SARS冠状病毒起源与进化研究中取得新进展

近日,中国科学院武汉病毒研究所石正丽课题组在SARS冠状病毒起源与进化研究中取得新进展,该团队在我国云南省发现了一处蝙蝠SARS样冠状病毒的天然基因库,揭示了SA...  (本文共2页) 阅读全文>>

《新农村》2018年03期
新农村

SARS冠状病毒研究有新进展

最近,中国科学院武汉病毒研究所石正丽研究团队在SARS冠状病毒起源与进化研究中取得新进展。专家在云南发现了一处蝙蝠SAR...  (本文共1页) 阅读全文>>

《兽医导刊》2018年09期
兽医导刊

日本猪δ冠状病毒的遗传特征及致病性

一、介绍冠状病毒亚科的冠状病毒传统上分为3个属,即α冠状病毒,β冠状病毒和γ冠状病毒。最近增加了另一种新型属,δ冠状病毒。在不同的宿主物种中发...  (本文共4页) 阅读全文>>