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尿酸酶菌种筛选、提取、发酵优化、分离纯化及性质研究

本论文主要包括四个方面的内容:产尿酸酶菌种的筛选;发酵条件的优化;提取条件的研究和酶的分离纯化与基本性质研究四部分。主要研究结果如下:(1) 经过筛选,从19株菌株中选取产朊圆酵母2.281作为尿酸酶生产菌种,其产酶活性达到0.85U/ml。(2) 以产朊圆酵母2.281作为研究对象,对此菌株尿酸酶形成条件进行研究表明:蔗糖和葡萄糖是酶形成的适合碳源;蛋白胨和酵母膏是产酶的适合氮源。尿酸、黄嘌呤和鸟嘌呤对酶形成起诱导作用,底物尿酸是适宜的诱导物。另外,也研究了部分金属离子对酶产量的影响。对它的摇瓶液体发酵条件进行优化得到其液体发酵的最佳条件为:以24小时种龄的种子液接种10%液体发酵培养基,在28℃,pH为6.0条件下发酵;培养基的组成为:3%蔗糖,2%蛋白胨,0.5%酵母膏,0.05%尿酸,0.05%KCl。在250ml三角瓶中装50ml培养液,在200r/min的摇床上28℃振荡培养23h,尿酸酶活性达到11U/ml。(3)  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

《微生物学报》1989年01期
微生物学报

假丝酵母尿酸酶形成条件

尿酸酶(EC 1 .7.3.3)是一种以氧作为受体的氧化酶,它能够催化尿酸氧化生成尿囊素、二氧化碳和过氧化氢。在康酸临床诊断中,此酶专一性强,反应效率高,是重要的诊断分析用酶。一_二_ Sehittenhelm首先发现此酶存在于牛肾中川。以后,从各种来源,例如细菌〔2·3,、霉菌〔4]、假丝酵母户,6]等,猪肝‘7]中也发现了尿酸酶,并进行了酶的提纯及性质的研究。最近,有人对尿酸酶产生菌进行了广泛的筛选比较,其中以黑曲霉和假丝酵母产较高的尿酸酶活性〔8J。假丝酵母发酵可产生底物诱导性胞内酶o.4u/ml发酵液【,J。 本文报道产阮假丝酵母As2.11.7产尿酸酶的诱导和发酵条件的研究结果。材料和方法 (一)菌种 产肮假丝酵母(caod,da“tili‘)As 2.117 (二)试剂 尿酸为·\ldrich公司产品,生物素为Merek公司产品,次黄嚷吟为sigm:公司产品,其余试刊均为国产分析纯和化学纯。 (三)培养甚 1.斜面培...  (本文共6页) 阅读全文>>

《临床检验杂志》1989年03期
临床检验杂志

测定尿酸的一种简易酶比色法

尿酸测定的酶紫外法,在特异性、抗干扰等方面均较好,但需特殊仪器,不能在常规实验室推广.报告的一些尿酸酶比色法虽不需特殊仪器,但酶用量大,成本高,而不为一般实验室所承受.我们在参考国内外有关尿酸酶比色法测定的基础上,对缓冲液种类、,pH、色源及辣根过氧化物酶(POD)的用量,用正交试验进行筛选。同时我们对尿酸酶比色法在减低维生素C干扰,尿酸标准液的保存等方面作了探讨,现报告如下。 一、实验材料 采用Boehringer4010光度计:尿酸酶用Boehringer微生物酶,POD:上海生化试剂研究所;尿酸:M.CHROME;2,4一二氯酚:E.MERCK;Tris、4一氨基安替比林、低铁氛化钾等均为AR级. 二、浦定原理 尿酸酶催化标本中的尿酸形成尿囊素、CO:和H:02,产生的H:O:用Trinder反应测定之。 三、试荆配制 1.尿酸标准液(500卜mol/L):精确称取尿酸16.80mg置于20oml容量瓶中,另称取碳酸侄10...  (本文共3页) 阅读全文>>

华南理工大学
华南理工大学

核桃源降尿酸肽靶向抑制黄嘌呤氧化酶活性的构效机制研究

高尿酸血症是与尿酸密切相关的代谢疾病,然而,治疗药物别嘌呤醇和非布司他等会产生一系列毒副作用,如过敏反应、皮疹、发热和肾病。核桃是一种兼具高蛋白营养价值和生物活性的食物来源。本文以脱脂核桃粉为研究对象,通过高尿酸血症动物模型来评价其降尿酸功效,并以黄嘌呤氧化酶(XO)抑制活性作为导向对核桃蛋白肽进行分离纯化、结构鉴定和功能评价。同时采用分子对接技术对20种氨基酸、400种二肽和8000种三肽进行XO抑制活性肽高通量筛选和构效关系分析,并对核桃蛋白肽进行结构改良设计,进一步对多肽的XO抑制活性和抗氧化活性进行相关性和功能分析。此外,以核桃蛋白肽作为研究对象,进行体外模拟消化和吸收功效研究。结果表明:在体内高尿酸血症大鼠降尿酸功效评价中,脱脂核桃蛋白酶解物(WMH)和脱脂脱酚核桃蛋白酶解物(DWMH)都具有一定的降尿酸功效,且具有保护肾组织功能结构免受尿酸过多所造成的损伤作用。其中,DWMH比WMH在体内降尿酸、体外XO抑制、尿素氮...  (本文共159页) 本文目录 | 阅读全文>>

华南理工大学
华南理工大学

天然植物功能因子对尿酸代谢酶调控作用机制研究

本文以药食同源植物葛根、蒲公英,可用于保健食品的中草药大蓟,可食用植物洋蓟、芹菜籽,以及苗药黑骨藤为原料,采用水提、醇提两种工艺进行天然成分提取,检测提取物的组成成分、抗氧化活性、体外黄嘌呤氧化酶(XO)抑制活性,并构建高尿酸细胞模型应用于所得产物降尿酸活性检测。以尿酸代谢酶为靶点,采用分子对接技术模拟评价小分子化合物的生物活性,计算小分子的分子描述符,以分子描述符为自变量,酶结合活性为因变量构建构效关系模型,可广泛用于降尿酸功能因子高效、快速地预测筛选。采用沸水浸提、乙醇浸提两种不同方式对六种天然植物原料进行功能成分提取,检测12种提取物中黄酮类、多酚类、多糖类、蛋白质类等活性成分的含量,发现活性成分含量与植物原料种类、提取工艺等参数密切相关。采用DPPH·清除率检测提取物的抗氧化活性,优化酶标仪法测定DPPH·清除率实验条件为:吸收波长517 nm、DPPH·浓度0.2 mg/m L、温度37°C、反应时间20 min,测得...  (本文共133页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

不同浓度尿酸对肾小球内皮细胞炎症及氧化应激指标的影响

目的:通过体外细胞培养,探讨不同浓度尿酸对人肾小球内皮细胞炎症因子IL-1、TNF-α及氧化应激指标SOD_2表达的影响。方法:以体外培养的人肾小球内皮细胞作为研究对象,用不同浓度尿酸(0mg/dl、4mg/dl、8mg/dl、16mg/dl)与人肾小球内皮细胞共培养24小时,利用显微镜观察人肾小球内皮细胞形态,采用CCK-8法测定细胞的增殖情况,从而确定尿酸的作用浓度,用Real-time PCR法测定IL-1、TNF-α、SOD_2 mRNA的相对表达量。结果:1.与空白对照组(尿酸浓度为0mg/dl)相比较,生理浓度尿酸组(尿酸浓度4mg/dl)、高浓度尿酸组(尿酸浓度分别为8mg/dl、16mg/dl)IL-1 mRNA的相对表达量显著增多,差异有统计学意义(P0.05)。与生理浓度尿酸组(尿酸浓度4mg/dl)比较,高浓度尿酸组(尿酸浓度分别为8mg/dl、16mg/dl)IL-1 mRNA的相对表达量显著增多,差异有...  (本文共46页) 本文目录 | 阅读全文>>