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D-海因酶的分离纯化及其固定化初步研究

本实验将Burkholderic cepecia 1003 菌株发酵产菌经过粗分离(细胞破碎、(NH_4)_2SO_4沉淀)、层析纯化(Phenyl CL-4B疏水层析、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析)等步骤后得到纯化好的D-海因酶,其纯化倍数为25.11,酶活回收率为11.87%。SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,D-海因酶亚基相对分子质量约33KD。对上述部分步骤进行优化,结果表明:超声波细胞破碎条件为破碎时间20s、间隙时间15s、功率600W、温度25℃,全程10min;(NH_4)_2SO_4分级沉淀条件为加入固体(NH_4)_2SO_4至饱和度40%,静置、高速离心后收集上清液,继续加入固体(NH_4)_2SO_4至饱和度60%,静置、高速离心后收集沉淀。D-海因酶的酶学性质研究表明:催化反应最适底物(D,L-苄基海因)浓度为1.7mg/mL,最适pH为9.0,最适温度为40℃,pH稳  (本文共74页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京工业大学
南京工业大学

环氧化法固定化海因酶及性质研究

由于D-型氨基酸具有自身显著的特性,它正在被广泛的应用于医药、食品等领域。D-海因酶是海因酶法生产D-型氨基酸的关键酶之一,海因酶法制备D-型氨基酸的工艺具有低成本,高效率的优点,非常适合工业生产的要求。且固定化D-海因酶比游离的D-海因酶更适合工业生产的连续操作。本文对Burkholderia cepecia njut01产D-海因酶,特别是固定化D-海因酶的性质进行了研究。具体研究内容如下:(1)纯化部分包括:菌悬液的配制,细胞破碎,(NH_4)_2SO_4分级沉淀,Phenyl Sepharose CL-4B疏水作用层析,DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换层析等步骤。纯化倍数19.94,活力收率30.95%。较好的活力回收率表明D-海因酶在此纯化过程中具有较好的稳定性。SDS-PAGE电泳可以确定D-海因酶的亚基分子量约为33KD左右。(2)通过对苄基海因(BH)和甲硫乙基海因(MH)两种底物进行转化...  (本文共54页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京工业大学
南京工业大学

D-海因酶固定化的初步研究

随着医药工业的发展,D-苯丙氨酸作为一种重要的化工医药原料,其用途不断拓宽,具有较好的应用前景。目前可采用许多方法来生产 D-苯丙氨酸,其中尤以海因酶法备受关注,该法具有产物光学纯度高、酶催化活性高等优点。“一酶一酸法”作为海因酶法的一种改进方法,是利用微生物产生的 D-海因酶水解苄基海因得到 N-氨甲酰-D-苯丙氨酸(Nc-D-Phe),然后通过酸水解 N-氨甲酰-D-苯丙氨酸,获得 D-苯丙氨酸。在该法中,由于酸水解反应非常迅速,且产物收率高(95%以上),故此时酶转化制备中间体 N-氨甲酰-D-苯丙氨酸的过程成了整个工艺的关键。但目前单批发酵的游离细胞只用一次即行抛弃,而固定化细胞或酶作为生物催化剂具可多次重复利用、稳定性、操作简单和产物易于分离纯化等优点。因此利用固定化的方法生产中间产物 N-氨甲酰-D-苯丙氨酸对于促进D-苯丙氨酸的产业化进程,具有重要意义。本论文采用固定化方法生产中间产物 N-氨甲酰-D-苯丙氨酸,包...  (本文共74页) 本文目录 | 阅读全文>>

《食品与生物技术学报》2016年12期
食品与生物技术学报

产D-海因酶微生物的筛选及其催化特性

D-氨基酸是一类重要的非天然氨基酸,广泛分内酰胺键开环生成N-氨甲酰氨基酸,再经去氨甲布在自然界中,如细菌细胞壁的肽聚糖[1],抗菌肽[2]。酰作用得到相应的D-氨基酸。近年来,国内市场对此外,动物体内也存在游离态D-氨基酸,且具有一D-氨基酸,尤其是生产β-内酰胺类抗生素所需的定的生理功能,如老鼠大脑中含有D-丝氨酸[3]。D-D-对羟基氨基苯甘氨酸和D-苯甘氨酸需求量很氨基酸及其衍生物是医药、农药、和食品等精细化大,而目前主要依赖进口。由于发酵法或微生物转工中的重要原料,例如:D-对羟基苯甘氨酸是β-内化法具有周期短、效率高、成本低等优点备受关注。酰胺类抗生素的重要手性中间体,D-缬氨酸可应用通过筛选具有高对映选择性和催化活性的D-海因于合成杀虫剂,而D-丙氨酸是生产人造甜味剂—酶产生菌株,构建用于D-氨基酸生产的高效生物阿斯巴甜的重要原料[4]。鉴于D-氨基酸的重要作转化体系意义深远。已有文献报道农杆菌、假单胞用,目前已有...  (本文共8页) 阅读全文>>

《高考》2017年Z1期
高考

素材五 孙继海退役:足坛传奇落幕

成绩属于过去,希望属于将来。雄关漫道真如铁,而今迈步素材展示从头越。既然孙继海退役了,那么,我们就祝福孙继海继续2016年12月11日上午,中甲北京人和俱乐部通过官创造人生的辉煌,相信孙继海未来的人生一定更加出彩!方微博宣布,球队队长,前国脚孙继海因伤病困扰及未来创此素材适用于与“表现突出”“过去与将来”“无上业发展需要正式向俱乐部提出退役申请,将告别征战22载荣耀”“辉煌人生”“实力展示”“传奇人生”“职业生涯”“绝的绿茵场。在现在中国足球发展并不好的时候,我们只能追对主力”“心灵热爱”等话题有关的作文。运用时,充分把忆“中国太阳”的峥嵘岁月,可以说,孙继海有3点是其他握素材内涵,比如下面“素材速用”中的三个范例,分别从“实中国球员未能做到的。力展示”“传奇人生”“心灵热爱”的角度引申开来。素材孙继海1977年9月30日出生于辽宁省大连市,曾多中的人物家喻户晓,在运用时既可以放在开头,以简要的语次入选中国国家队,并代表国足征战...  (本文共2页) 阅读全文>>

权威出处: 《高考》2017年Z1期
《饲料工业》2012年08期
饲料工业

2012海因特研讨会满圆结束

~~2012海因特研讨会满圆结束$广州海因特生物技术有限...  (本文共1页) 阅读全文>>

《生物加工过程》2007年04期
生物加工过程

嗜热菌Bacillus fordii3-2海因酶的纯化及性质

海因酶催化水解DL-5’-取代海因的内酰胺键生成D-型或L-型N-氨甲酰基-氨基酸,后者在由N-氨甲酰水解酶催化生成D-氨基酸或L-氨基酸。海因酶法是继发酵法之后的重要氨基酸工业制备方法,特别是在难发酵生产的氨基酸及非蛋白氨基酸的制备上尤显优势。海因酶法制备L-色氨酸[1]、L-蛋氨酸[2]、L-高苯丙氨酸[3]、D-苯丙氨酸[4]、D-对羟基苯甘氨酸[5]等均取得了突破。由于海因酶法制备光学纯氨基酸实用价值,引起了人们的极大关注。在新型及高效海因酶的探索、分子改造及性质研究方面均得到了很大的进展。根据现有的报道:大多数海因酶为同源四聚体,亚基相对分子质量在5×104~6×104[6-8]之间,Chung等[9]从Methanococcus jannaschii中分离纯化得到了L-海因酶,其相对分子质量为2·4×104,亚基相对分子质量为6·2×104,该酶具有较好的热稳定性,90℃时仍保持较高的活性,Mn2+对该酶有激活作用。...  (本文共5页) 阅读全文>>