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N-糖酰胺酶F的性质及脱糖基化作用的研究

N-糖酰胺酶F(Peptide-N~4-(N-acetyl-β-D-glucosaminyl)asparigine amidase; PNGase F; EC 3.5.1.52)能够在温和的条件下从糖肽、糖蛋白上面完整切下N-连接的寡糖链(N-糖苷),将寡糖链和蛋白部分分开。糖酰胺酶F具有广泛的底物专一性,对所有类型的N-寡糖链都有作用。这些特性使糖酰胺酶F在糖链结构分析、糖链在生物体内的作用和糖链对糖蛋白的作用的研究中起到了重要的作用。现在商业化的N-糖酰胺酶F主要从脑膜炎脓杆菌(Flavobacterium meningosepticum)中提取。提取和纯化N-糖酰胺酶F是一个十分耗费和耗时的工作,因此市场价格十分昂贵,这大大限制了N-糖酰胺酶的广泛利用和N-糖链大规模制备。为了获得大量廉价的N-糖酰胺酶F,本论文研究的主要内容为根据目的基因N-糖酰胺酶F的cDNA序列设计引物,以F.meningosepticum菌株的基因  (本文共67页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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酵母N-糖酰胺酶(Png1p)脱糖基化性质及其改造

N-糖酰胺酶(Peptide-N~4-(N-acetyl-β-D-glucosaminyl)asparigine amidase;Peptide:N-Glycanase;EC 3.5.1.52)是一类可以水解N-连接的糖肽或糖蛋白的β-天冬胺酰葡糖胺键,释放出完整的寡糖链,并生成天冬氨酸残基的酶。在真核生物中,N-糖酰胺酶(Png1p)与蛋白酶依赖的蛋白降解系统相联系,对从内质网反转运到细胞质的错误折叠的糖蛋白进行脱糖基化处理。Png1p广泛地存在于真核生物体内,主要存在于细胞质中内质网的周围。真核生物中的N-糖酰胺酶(Png1p)能够区分天然的和非天然的糖蛋白。在本论文中首先研究底物的结构同N-糖酰胺酶脱糖基化活性之间的关系。将核糖核酸酶B用两种方法不同程度变性之后,使用圆二色光谱检测其结构。同时,在体外研究大肠杆菌表达的酵母N-糖酰胺酶对核糖核酸酶B的脱糖基化活性与底物结构之间的关系。结果证实底物的结构确实能够影响N-糖酰胺...  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国冶金工业医学杂志》2010年03期
中国冶金工业医学杂志

脲酰胺酶法和邻甲酚酞络合酮法检测血清钙的方法学比较

血清钙浓度检测在检验医学中具有重要的临床价值。目前临床上采用的邻甲酚酞络合酮法(OCPC),灵敏度高但易受内...  (本文共1页) 阅读全文>>

《生物工程学报》2006年04期
生物工程学报

诺卡氏菌酰胺酶基因的分子克隆及在大肠杆菌中表达的初步研究

酰胺酶是一种重要的工业酶。利用生物信息学手段,在和已知酰胺酶基因序列分析比对的基础上,首次从Ncordiasp.YS-2002中成功地克隆得到酰胺酶基因ami,并对其基因序列及氨基酸序列的性质进行了分析。结果表明,所得酰胺酶基因ami片段大小共为1446b...  (本文共4页) 阅读全文>>

江南大学
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D. tsuruhatensis R-酰胺酶基因鉴定、表达及其在西司他丁合成中的应用

R-酰胺酶[EC 3.5.1.4]可以催化R/S-2,2-二甲基环丙基甲酰胺的拆分反应得到高光学纯度的S-异构体,S-2,2-二甲基环丙基甲酰胺是合成西司他丁钠的关键手性前体。因此R-酰胺酶及其工业化应用是西司他丁钠/亚胺培南绿色化工工艺改造的重要内容。论文研究了R-酰胺酶的高效制备、酶学性质和分子特性及其在R/S-2,2-二甲基环丙基甲酰胺拆分反应中的应用,取得了以下主要结果:首先研究了D. tsuruhatensis CCTCC M 205114 R-酰胺酶的高效制备方法。D. tsuruhatensis CCTCC M 205114对环境中的酰胺底物有着非常敏感却又十分节俭的诱导表达控制模式,该酶受2,2-二甲基环丙基甲酰胺诱导产生量以1 h内分解环境中的酰胺胁迫为度;该酶的诱导具有饱和效应,当诱导浓度超过1.2 g/L后,酶的表达受到严重抑制。因此要提高D. tsuruhatensis CCTCC M 205114的R-...  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江工业大学
浙江工业大学

Delftia tsuruhatensis酰胺酶立体选择性和催化特性研究

酰胺酶(EC 3.5.1.4)作为腈转化酶家族中重要一员,由于其广泛的底物谱、专一立体选择性,在制备手性药物和农用化学品中间体中具有广阔应用前景。在腈水合酶/酰胺酶的双酶体系中,立体选择性主要产生于酰胺水解反应。本实验室已经利用Delftia tsuruhatensisZJB-05174酰胺酶选择性地水解R-2,2-二甲基环丙甲酰胺动力学拆分得到西司他丁关键中间体——S-2,2-二甲基环丙烷甲酰胺。而对该酰胺酶立体选择性的调控研究,有利于构建以腈水合酶/光学选择性酰胺酶为基础的生物催化法制备手性药物和农用化学品中间体的技术平台。本文先利用分子生物学手段克隆到来自Delftia tsuruhatensis ZJB-05174酰胺酶基因,并将其在重组大肠杆菌中高效表达,再围绕酰胺酶的催化特性及立体选择性进行研究,为其工业化应用提供理论基础。以 D.tsuruhatensis ZJB-05174全基因组为模板,利用PCR方法获得了大小...  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

江南大学
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Nocardia farcinica聚酰胺酶的表达及锦纶改性应用研究

酰胺酶(EC3.5.1.4)是一类能够催化水解酰胺键生成相应氨基和羧基的水解酶,在工业上主要应用于丙烯酸、烟酸等重要化工原料的生产。近几年发现来源于Nocardiafarcinica的聚酰胺酶能够催化水解锦纶(polyamide,PA),在PA表面改性方面具有潜在应用价值。但是目前野生菌酰胺酶产量很低,发酵周期长,无法实现工业化应用,因此通过基因工程手段,提高聚酰胺酶的产量,是实现聚酰胺酶工业化生产和应用的必由之路。本研究主要对诺卡氏菌N.farcinicaCGMCC4.1166的聚酰胺酶基因进行克隆表达,并对重组酶进行分离纯化及酶学定性;对重组聚酰胺酶应用于PA表面改性的效果进行了深入研究;进一步研究聚酰胺酶的空间结构,初步探究了聚酰胺酶能够水解PA的原因。主要研究结果如下:(1)确定N.farcinica CGMCC4.1166来源的聚酰胺酶对PA的表面改性效果。与磷酸缓冲液、Cnamidase相比,聚酰胺酶和处理后PA的吸...  (本文共51页) 本文目录 | 阅读全文>>