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花生白藜芦醇合酶cDNA的克隆及其对植物、酵母的遗传转化

白藜芦醇(Resveratrol,简称Res)是一种植物抗毒素,是存在于数十种食物和药物中的一种具有保健功能的成份。Res主要具有抗癌,保护心血管,雌激素调节,抗增殖、诱导细胞凋亡,抗菌等作用。然而,在自然的条件下,Res在植物体内的含量是非常低的,要用传统的提取方法得到高丰度的Res非常困难,并且成本较高。白藜芦醇合酶(Resveratrol synthase,简称RS)是Res合成途径中最后一个起作用的关键酶,也是唯一必须的合成酶,本实验通过分子生物学手段,得到RScDNA,分别对植物和酵母进行遗传转化,已经取得了如下进展:利用引物悬挂延伸PCR技术从花生总DNA中扩增出带有Kozak序列的RScDNA,然后将其重组到克隆载体中。通过测序证明,所获得的RScDNA基因,与登陆号为AB027606的序列进行比对,同源性达到95%。此序列推测的氨基酸序列与登陆号为p20178的氨基酸比对,同源性达到98%以上。证明应用引物悬挂延  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国农业科技导报》2013年06期
中国农业科技导报

细菌Ⅲ型聚酮合酶研究进展

Ⅲ型聚酮合酶(PKS)被认为是结构最简单的聚酮合酶,这一类酶广泛存在于植物细菌和真菌中。随着基因组学的发展,细菌中Ⅲ型聚酮合酶引起越来越多的关注。Ⅲ型聚酮合酶在不同细菌中表现出不同的功能,其产物的结...  (本文共11页) 阅读全文>>

《安徽科技学院学报》2010年06期
安徽科技学院学报

虎杖芪合酶基因保守区的克隆及序列分析

芪合酶是白藜芦醇合成的关键酶。本文分别以传统CTAB法、传统SDS法和改良SDS法对虎杖基因组DNA进行提取,获得符合分子...  (本文共6页) 阅读全文>>

广西医科大学
广西医科大学

罗汉果鲨烯合酶分子结构和生物化学特征及表达研究

罗汉果学名Siraitia grosvenorii(Swingle)C.Jeffery ex lu et Z.Y.Zhang,为主要分布于中国广西北部的葫芦科多年生草质藤本植物。罗汉果以果实入药,味甘性凉,归肺、大肠经,有润肺止咳,生津止渴的成效,适用于肺热或肺燥咳嗽,百日咳及暑热伤津口渴等,此外还有润肠通便的作用。罗汉果的主要药用成分为罗汉果苷化合物,其中罗汉果甜苷V是低热量、纯天然的甜味剂,还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、降血糖等作用。但罗汉果苷目前还不能化学合成,主要依靠从植物中提取获得,产量受到罗汉果种植环境及条件的制约。因此研究罗汉果苷生物合成途径关键酶的异源表达,可为提高罗汉果苷类在植物中生物合成产量,为利用植物基因工程、细胞工程工业化生产罗汉果苷奠定理论基础。其次对罗汉果鲨烯合酶结构的分析,研究影响酶活性的关键基团,促进罗汉果苷化合物的生物合成研究。第一章罗汉果鲨烯合酶基因的克隆及酶分子结构分析目的:克隆罗汉果鲨烯合...  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)
中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)

ATP合酶的结构与功能及其在细胞光自养过程中的活性变化

F1Fo ATP合酶是能量代谢的关键酶,它利用跨膜的质子动力势合成生物体内的能量通货—ATP。叶绿体ATP合酶是由突出于膜外的CF1和嵌于膜内的CF0两部分组成的。CFo形成跨膜的质子通道,并为CF1提供膜上的结合位点。CF1上具有核苷酸结合和催化位点。体外培养的光自养细胞也是研究光合机构形成的一种新材料,其最重要的优点是其生理条件和生长速率的调节及其组织分化容易控制。本文实验工作主要集中在叶绿体ATP合酶(亚基的结构与功能研究、光自养型愈伤组织的诱导培养及其自养过程中光合特性和光合磷酸化活力的变化等方面。叶绿体ATP合酶(亚基定点突变对其功能的影响利用突变引物和PCR方法将菠菜叶绿体ATP合酶(亚基N端第三位的亮氨酸(Leu)分别突变为异亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)、苏氨酸(Thr)、精氨酸(Arg)、谷氨酸(Glu)和脯氨酸(Pro)。(亚基及其突变体基因均能在 E.coli中正常表达。检测突变对(亚基功能和ATP合...  (本文共106页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

一. 中国红豆杉紫杉醇生物合成基因的研究 二. 银杏二萜环化酶克隆的初步研究

紫杉醇是从太平洋红豆杉树皮中分离得到的有效抗肿瘤药物。紫杉醇生物合成第一个重要的中间体是由紫杉烯合酶催化牻牛儿基牻牛儿基二磷酸(GGDP)环化形成的紫杉烯(taxa-4(5),11(12)-diene);紫杉烯经细胞色素P450单氧合酶催化的羟基化反应,伴随着双键重排形成5α-紫杉烯醇(taxa-4(20),11(12)-diene-5α-ol),再经氧合、酰基化及环氧丙烷环生成等一系列反应形成紫杉醇。前期工作分别得到中国红豆杉紫杉烯合酶3′-端和5′-端的2个cDNA片段,由于这2个片段只能应用Pvu Ⅰ位点进行定向克隆,而载体上也有2个Pvu Ⅰ酶切位点,不能进行拼接。本研究将克隆载体氨苄抗性盒中Pvu Ⅰ位点消除,构建了含四环素抗性盒的载体pTTB。通过PCR获得5′-端和3′-端cDNA片段,应用Pvu Ⅰ位点拼接在一起,并亚克隆到构建的克隆载体pTTB中,得到长2,712 bp的cDNA片段,该片段具有一个2,586个...  (本文共118页) 本文目录 | 阅读全文>>