分享到:

产核黄素枯草芽孢杆菌ccpA基因敲除及其发酵特性的研究

B.subtilis24/pMX45是核黄素工业发酵菌株,但葡萄糖的存在引起强烈的碳分解代谢物阻遏作用(CCR),高浓度的葡萄糖严重消弱菌株生产核黄素的能力。CcpA蛋白作为全局调控因子介导由葡萄糖引起的CCR作用。采用插入失活的方法破坏B.subtilis24/pMX45的ccpA基因,得到ccpA基因敲除菌株B.subtilis24A1/pMX45。摇瓶发酵比较显示:B.subtilis24A1/pMX45能够在8%葡萄糖的培养基中正常生长,糖耗速率显著提高,溢流代谢产物积累量明显降低,核黄素合成能力完全恢复。在10%蔗糖发酵培养基中,发酵液中葡萄糖和果糖的积累量和积累方式发生改变。这一结果表明ccpA基因的缺失,在一定程度上解除了葡萄糖引起的CCR效应,使中心代谢发生了有利于核黄素合成的改变; 同时影响了糖的跨膜运输。采用正交实验,对B.subtilis24A1/pMX45发酵培养基的氮源进行了优化; 并采用工程平均估计法  (本文共69页) 本文目录 | 阅读全文>>

《混凝土世界》2012年04期
混凝土世界

2012年,中国混凝土与水泥制品行业发展将会如何?CCPA会长们——纵论市场风云 前瞻发展形势

一年之计在于春,一日之计在于晨。转眼之间,2012年已过去四分之一。新年初始,中国混凝土与水泥...  (本文共6页) 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对荚膜多糖的调控研究

目的肺炎链球菌荚膜(Capsule CPS)是肺炎链球菌的一种重要的毒力因子,在细菌定植、粘附中发挥重要作用,可保护细菌免受宿主的吞噬杀伤作用。肺炎链球菌荚膜合成基因为一操纵子结构,即cps基因座,其表达水平受其上游启动子的调控,但目前尚不清楚有哪些蛋白可通过该启动子调控这些基因及CPS的合成。我们前期研究通过DNA pulldown实验筛选到CcpA可能与肺炎链球菌荚膜多糖(CPS)基因座启动子区域结合,且CcpA(catabolite control protein A, CcpA)是一种与糖代谢相关的转录调控因子,调控了肺炎链球菌多种基因的表达。本研究拟通过EMSA实验验证CcpA与cps启动子序列的结合,并进一步研究其对荚膜的调控作用,为了解肺炎链球菌荚膜合成的分子机制提供新的实验证据。方法利用大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)工程菌原核表达CcpA蛋白,使用Ni2+亲和层析的方法纯化目的...  (本文共57页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

变形链球菌耐氟菌株中耐酸相关基因ccpA突变的检测

龋病是一种由口腔中以细菌为主多种因素复合作用所导致的牙齿硬组织慢性进行性破坏性病损,表现为无机质的脱矿和有机质的分解。随着病程的发展而有一色泽变化到形成实质性病损的演变过程。一般平均龋患率可在50%左右,是口腔最主要的常见病,也是人类最普遍的疾病之一。致龋的多种因素,主要包括细菌和牙菌斑、食物以及牙齿所处的环境等。牙菌斑中的致龋细菌是龋的主要病原菌。变形链球菌是最重要的致龋菌,是龋病的始发因素。变形链球菌为革兰染色阳性的球菌,是口腔天然菌群中占比例最大的链球菌属中的一种。经反复研究证实,变形链球菌可以造成啮齿类动物和灵长类动物实验性龋的动物模型,同时也有证据表明该菌与人类龋病密切相关。变形链球菌有强的致龋性主要取决于其产酸性和耐酸性。在菌斑中生存的变形链球菌能迅速发酵多种碳水化合物产生多量酸,可使局部pH下降至5.5以下。变形链球菌耐酸性强,在pH4.5时仍能继续生活并产酸。变形链球菌不仅是冠部龋病的主要致病菌,也是根部龋的主要...  (本文共38页) 本文目录 | 阅读全文>>

河南科技学院
河南科技学院

CcpA途径介导麦芽糊精调节枯草芽孢杆菌产α-淀粉酶机制研究

α-淀粉酶是一种重要的工业用酶,广泛应用于食品、纺织和造纸等行业,但是由于枯草芽杆菌在发酵过程中存在的碳代谢阻遏现象会对发酵产物α-淀粉酶的积累产生重要的影响。为了揭示该种现象的作用机理,本课题利用实验室保存的B.subtilis168和B.subtilis1.769为研究对象,一方面分析了枯草芽孢杆菌产淀粉酶差异性所在,阐明了该菌株产α-淀粉酶的某些内在原因,另一方面利用基因重组技术构建了一株能在一定程度上缓解代谢阻遏的重组菌株,最后通过Red基因敲除技术成功获得了CcpA和Hprk基因缺失的突变体,通过发酵实验验证这两个基因对调控CCR效应有着直接的关联。主要研究如下:1.首先,在研究枯草芽孢杆菌的核酸图谱中发现编码淀粉酶的起始位点是从和EσARNA聚合酶的启动子区域有着50%相似度的一段下游序列中的第8号位碱基位点开始。对EσARNA聚合酶的启动子的研究可以进一步的鉴定枯草芽孢杆菌表达淀粉酶的类型。无论在枯草芽孢杆菌中包含...  (本文共82页) 本文目录 | 阅读全文>>

《微生物学报》2015年06期
微生物学报

肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对荚膜多糖的调控作用

【目的】研究肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对肺炎链球菌荚膜多糖(CPS)的调控作用。【方法】利用大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)工程菌原核表达CcpA蛋白,使用Ni2+亲和层析的方法纯化蛋白。利用纯化后的CcpA蛋白免疫昆明小鼠并制备多克隆抗体;采用ELISA法测定抗CcpA抗体效价。随后,利用Westertn blot方法分析CcpA蛋白在肺炎链...  (本文共7页) 阅读全文>>