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纤溶酶产生菌的发酵条件优化及酶学性质初探

血栓性疾病是目前临床上死亡率最高的疾病之一,寻找高效、安全的溶血栓药物一直是世界医药行业关注的热点。溶栓疗法是这类疾病重要的治疗方法之一,由于现用溶栓药物或多或少都存在一些缺陷,因此人们一直都在研制开发新型的溶血栓药物。本实验采用自行设计的筛选方法,从土壤中筛选分离到两株具有产高活性纤溶酶的优势菌株HFZ-1A和HFZ-2D,系统的优化了两菌株产纤溶酶的液体发酵条件(培养基、接种量、菌龄、pH、溶氧量、营养、时间、摇床转速等),确定了最适液态发酵条件,对发酵液进行了初步的分离提纯,得到了粗酶M-1A和M-2D,初步研究了两种酶的酶学性质,纤溶作用方式和体外溶栓效果,并做了小白鼠灌胃M-1A和M-2D新鲜酶液的急性毒性试验。为进一步进行体内溶栓实验,开发成为新型溶栓类药物提供了有用的参数。1.利用单因素实验和正交分析方法相结合,对HFZ-1A、HFZ-2D两菌株产纤溶酶液体发酵条件进行了优化,得出如下结果:(1) HFZ-1A菌株  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

《科学中国人》2017年03期
科学中国人

王祖农菌酯酶基因表达蛋白EstA酶学性质分析

1前言酯酶主要包括脂肪酶(Lipase,triacylglyserol hydrolases,EC3.1.1.3)和羧酸酯酶(carboxylesterases,arboxyl ester hydrolases EC3.1.1.1),两者在底物特异性上有区别,前者倾向于水解或合成酰基碳链长度大于10的甘油脂类,而后者倾向于水解或合成酰基碳链长度小于10的甘油脂类[1-4]。酯酶催化反应具有广泛的底物特异性,在催化底物合成和水解时不需要辅助因子,在有机溶剂中也有很高的稳定性,因此在食品加工[5-7]、精细化工[8]、环境治理[9-10]等各类行业中应用广泛。利用PCR技术从Zunongwangia profunda克隆出了酯酶基因est A,对其蛋白Est A进行表达及纯化,进一步研究该酯酶的酶学性质,探究其商业价值。为得到准确酶活数据,本研究所用的酶活测定方法采用为ρ-NP比色法[11]2材料与方法2.1材料图1 Est A的最...  (本文共3页) 阅读全文>>

《微生物学报》1988年01期
微生物学报

右旋糖酐酶产生菌的筛选及其酶学性质的比较研究

右旋糖醉酶(Dextranase,a一D一l,6-Gluean6一D一Glucanohydrolase,EC3·2.1.11)是专一性地裂解右旋糖醉(Dextran)分子中的。一1,6一葡萄糖糖昔键的水解酶。由于它在龋齿防治方面具有一定功效L1]、在制糖工业中能消除产生的“蔗饭”(即右旋糖醉,工厂俗称葡聚糖)、提高生产效率和产品质量闭,并能应用于临床用右旋糖醉的生产川。近年来国外对该酶的研究日益广泛深人。一,]。丹麦Novo公司、美国M滋s公司等都有商品右旋糖醉酶制品出售。在国内此项工作开展甚少,也无该酶制剂生产。 我们从分离纯化和收集到的3162株真菌中初步筛出具有右旋糖醉酶活力的菌株528株,从中选出活力较高而又略具特色的46株菌进行复筛,最终确定5株。经鉴定,它们分属黄柄白曲霉(击Posill“,扛a“P。:)、肉色曲霉(A,P.caroeus)、焦曲霉(月;P.“。u,)和淡紫拟青霉(Pa‘10-m,c‘5ll’laci...  (本文共11页) 阅读全文>>

《植物生理学通讯》1989年01期
植物生理学通讯

高等植物几丁酶研究进展

几丁酶(E.C.3.2.1.14)广泛存在于自然界,在降解几丁质(聚N-乙醉胺基葡萄糖)中起作用。此酶亦普遍存在于高等植物中,但有意思的是人们至今还未发现植物中存在几丁酶的底物。由于许多危害植物的病原菌(尤其是霉菌)的细胞壁的主要成分之一是几丁质,因而人们自然联想到高等植物几丁酶在防御病原菌侵染中的可能作用。从本世纪30年代发现高等植物中的几丁酶活性,至今,研究者们已做了大量工作,使得人们对高等植物几丁酶的结构和功能都有了越来越清晰的了解。 高等植物中几丁醉的分布及性质 1.分布 1934年,Gr田泪刃nann首先报道了甜杏的外泌液中存在几丁酶活力的结果山。Pown迈g于60年代测定了11个科的植物种子中几丁酶活性,结果全为阳性田。卫浴Uer测定了6个科植物的叶片,也发现皆有几丁酶活力即。植物的茎部和根部也存在几丁醉t’,幻。这些结果都表明几丁酶普遍存在于高等植物中。 ,.物理性质 由于使用了亲和层析方法,植物几丁酶的纯化变得较...  (本文共6页) 阅读全文>>

中国海洋大学
中国海洋大学

Alteromonas sp.nov. SY37-12菌株产生的琼胶酶酶学性质及酶解产物的分析

本文以开发海洋活性寡糖为最终目标,以筛选具有优良性状的产琼胶酶菌株以及用酶法降解琼胶获得不同聚合度的寡糖为基本目的和出发点,研究了产酶菌株的生理生化特征,不同因素对菌株发酵产酶的影响和酶的分子量及基本性质,分析了琼胶酶降解琼胶底物产生的寡聚糖产物的结构和组成,对琼胶寡糖的生物活性进行了初步的探讨。(1) 从自然界中筛选一株具有优良性状、产琼胶酶能力高的菌株Alteromonas sp. nov. SY37-12,长杆状,0.5~0.6μm×1.8~2.1μm。端生单鞭毛。Alteromonas sp. nov. SY 37-12在2216E培养基上培养24h,菌落圆形,乳白色。菌株在增殖的同时,可使菌落周围的琼胶培养基形成较深的釜底形凹陷,并且具有较大的透明圈,直径约为10mm。该菌株氧化酶阳性,过氧化氢酶阳性,不积累聚羟丁酸盐颗粒作为胞内贮存物,生长不需要有机因子,在没有NaCl存在时菌体不能生长。根据伯杰氏手册第九版确定其...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建师范大学
福建师范大学

来自深海热液口脂水解酶的克隆表达以及酶学性质的研究

深海热液区具有独特的高温生境,蕴藏着丰富的极端特性的微生物以及酶资源。因而,深海热液口逐渐成为酶资源开发的新热点。本研究以东太平洋海隆地区深海热液口沉积物样品的宏基因组数据作为基础,利用蛋白相邻类聚簇的COG编码(COG2267)为切入点,以活性中心保守区域GXSXG和氧洞保守区域HGX作为突破口,选取了 8个疑似脂水解酶基因进行深入研究。利用现代酶基因挖掘技术对脂水解酶est-OK系列基因进行克隆、表达以及酶学性质的研究。首先,利用序列驱动的方法在东太平洋海隆深海热液口挖掘了八个潜在新型脂水解酶基因est-OK系列,通过生物信息学的方法对脂水解酶基因est-OK系列进行分析,结果表明est-OKH、est-OKJ、est-OKK、est-OKN和est-OKO为脂水解酶家族Ⅴ的蛋白;est-OKM为脂水解酶家族Ⅷ的蛋白;est-OKL为脂水解酶家族Ⅱ的蛋白;est-OKI为脂水解酶家族Ⅲ的蛋白。跨膜区预测结果表明est-OKJ...  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>