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汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中的克隆和表达

目的:汉坦病毒(Hantavirus,HV)是肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)的病原体,可导致人类两种疾病:HFRS和汉坦病毒肺综合症(Hantavirus Pulmonary Syndrom,HPS)。HV核蛋白(Nucleocapsid Protein,NP)是其主要的结构蛋白之一,本文旨在对编码NP蛋白的S基因在大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)中进行克隆和表达,并对表达产物进行鉴定。方法:以pGEM-T-L99S和pGEM-T-Z10S为模板,分别经PCR扩增L99S和Z10S的ORF,前者经EcoRI及XhoI双酶切,后者经SacI及XhoI双酶切,纯化后将二者与经相同双酶切所得的pET32a和pET28a载体大片段相连接,转入E.coli Top10感受态细胞中;在抗生素(pET32a为氨苄青霉素抗性,p  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>

《天津医药》2006年07期
天津医药

汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中的克隆及表达

汉坦病毒(Hantavirus,HV)属于布尼亚病毒科(Bunyaviridae)成员,为分节段的负链RNA病毒,病毒基因组由3个片段组成,分别编码病毒的RNA多聚酶、糖蛋白(GP)和核蛋白(NP)。到目前为止世界各地报道汉坦病毒至少有20多个基因型,一些新的汉坦病毒属成员还在不断被发现中。在我国主要有SEO和HTN两型,引起肾综合征出血热(hem-orrhagic fever with renal syndrome,HFRS)。S基因编码的NP是HV的主要结构蛋白,相对较保守,感染早期可以刺激机体产生很强的免疫反应,而且在感染的发病机制中也起重要的作用,很值得深入研究。笔者以HV SEO型L99株及HTN型Z10株为代表构建S基因原核表达系统并对其表达蛋白进行初步鉴定,为其深入研究奠定基础。1材料与方法1.1材料1.1.1质粒和菌株重组质粒pGEM-T-L99、pGEM-T-Z10及宿主菌E.coli Top10由本室保存,质...  (本文共3页) 阅读全文>>

《病毒学报》2004年03期
病毒学报

汉坦病毒受体

汉坦病毒感染可引起两种严重威胁人类生命的传染性疾病:肾综合征出血热(HFRS)和肺综合征出血热(HPS)[1,2],这两种疾病都与急性血小板减少和血管渗透性变化有关[3]。因此,弄清汉坦病毒与宿主细胞的相互作用及其机制,对控制汉坦病毒性疾病显得尤为重要。整合素对维持血管壁的渗透性和完整性具有重要作用。一种整合素可以在不同的细胞上表达,同一种细胞也可以表达多种不同的整合素,并且不同类型整合素的作用也各有不同。在汉坦病毒与内皮细胞相互作用研究中,细胞整合素受体起到了关键性的作用,致病性汉坦病毒通过细胞膜上β3整合素感染细胞,而非致病性汉坦病毒通过细胞膜上β1整合素感染细胞[4,5]。这些都为汉坦病毒的受体和发病机制研究奠定了一定的基础。本文拟对该研究近况作一综述,为汉坦病毒致病机制的深入研究提供参考。迄今发现的病毒受体大部分为糖蛋白。动物或人类细胞的病毒受体为细胞膜正常成份,有其正常的生理功能,但病毒与受体结合后将会影响受体的正常功...  (本文共3页) 阅读全文>>

《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》1988年06期
国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册

应用单克隆抗体鉴定汉坦病毒的特性

更,lV型为SR一n、TCH、GB一B株,分别分离自日本的实验室wistar大鼠、美国的揭鼠和英国的实验室lou/c大鼠。在上述实验中,McAbl、2与9株病毒皆有反应,作者认为这两种McAb具有广谱反应性,适合于迅速特异地检测细胞培养和感染动物器官中的汉坦病毒坑原。McAb3能与除PH株以外的病毒反应。有些McAb有株特异性,McAb6仅与111型病毒反应,McAb4仅与W型大鼠株反应,McAbs与GB一B以外的大鼠株反应,McAb7一12可检测主要血清型之间的微小差异。 作者观察到汉坦病毒不同血清型与分离的宿主种类相关,如I型(分离自胜)和W型(分离自大鼠)同一血清型病毒所致的疾病严重程度可因病毒的宿主而异,如111型汉坦病毒76一118株(分离自黑线姬鼠)引起的疾病危重,而CG38一83(分离自肚)主要引起轻微的疾病。 「作者用汉坦病毒76一11...  (本文共1页) 阅读全文>>

《病毒学报》1989年02期
病毒学报

从流行性出血热患者腹膜渗出细胞分离汉坦病毒

本文报道从一例危重型EHF患者第10病日的腹膜渗出细胞分离出一株病毒,定名为GH716,用抗姬鼠型和抗家鼠型汉坦病毒(HTNV)单克隆抗体(McAb),对其抗原型别进行了鉴定,并与HTNV了6一118株和R22株做了比较。同时检测了患者的血清坑体以及血淋巴细胞和尿细胞中的HTNV抗原。 一、病程及诊断 患者男,4G岁,系四川省广安县EHF高发区的农村公路养护工,l鸿7年12月8日发病,12日(第5病日)住院。入院时有高热、低血压、少尿、伴重度皮下出血和血尿症状。第10和15病日的血清特异性荧光抗体滴度是第5病日的32倍(表l),诊断为危重型流行性出血热〔0。常规治疗,第9~18病日进行腹嗅透析,从第10病日起收集腹水。腹膜渗出细胞中巨噬细胞占25.2%,淋巴细胞占74.8%。外周血总淋巴细胞的分离用Fiooll一HyPaque梯度法‘T、B细胞的制备月尼龙棉柱法〔2〕(有改进,资料待发表)。尿细胞取自患者的新鲜中段尿,其中主要是...  (本文共3页) 阅读全文>>

军事科学院
军事科学院

我国南方地区蝙蝠汉坦病毒的分子流行病学与血清学研究

汉坦病毒(Hantavirus)是重要的人兽共患病原,能够感染人引起两种严重的疾病:在亚欧大陆主要引起肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS),南北美洲引起汉坦病毒心肺综合征(Hantavirus cardiopulmonary syndrome,HCPS)。我国是受HFRS危害最为严重的国家,每年10~15万的HFRS病例中,90%以上发生在我国。汉坦病毒属于布尼亚病毒目(Bunyavirales)汉坦病毒科(Hantaviridae),病毒粒子呈球形或近球形,直径80~120nm,包裹着大(L)、中(M)、小(S)三个节段的单股负链的RNA片段组成的基因组,总大小约11.8 kb。最新的ICTV第10次分类报告中正汉坦病毒属共包括41个种(Species)。一直以来,啮齿动物被认为是汉坦病毒的自然宿主,但2012年至今,世界各地先后发现9种蝙蝠汉坦病毒,其宿主涉及...  (本文共150页) 本文目录 | 阅读全文>>

武汉大学
武汉大学

汉坦病毒对人胚肺成纤维细胞基因表达及细胞凋亡的影响

汉滩病毒(Hantaan Virus, HTNV)是肾综合征出血热(HFRS)的病原体,属于布尼亚病毒科汉坦病毒属,它能在原代和传代细胞中增殖,但一般不引起细胞病变效应。研究表明整合素可能充当了汉坦病毒细胞膜受体,与病毒侵入宿主细胞有关,而且汉坦病毒感染会引起宿主细胞形态结构、能量代谢等改变而影响感染细胞的生长,甚至能诱导传代人胚肾细胞和淋巴细胞凋亡,但其作用机制仍不明了。探讨汉坦病毒感染对人胚肺细胞的影响,能为阐明汉坦病毒与宿主细胞相互作用的分子机制提供依据。基因芯片技术的发展为研究病原体与宿主细胞的相互作用开辟了新的领域,表达谱基因芯片通过全面监测病原体感染机体后宿主及病原体基因表达的改变,可回答宿主细胞或器官是如何认识病原体,而且可揭示在何种水平上宿主能对不同因子进行辨别,以及宿主与病原体之间的交谈、潜在的治疗靶位和疾病转归的预后标志。因此,联合应用基因芯片技术、流式细胞术等方法和mRNA合成抑制剂对汉坦病毒感染细胞进行基...  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>