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生殖支原体MgPa重组蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

目的:构建生殖支原体(Mycoplasma genitalium,Mg)黏附蛋白MgPa的优势表位(1075~1364 aa)基因(MgPa′)的重组表达体,在大肠杆菌中进行诱导表达,纯化表达产物并进行免疫原性和免疫反应性分析,为探索MgPa重组蛋白在Mg血清学诊断中的应用价值和其生物学功能提供实验依据。方法:通过生物信息学分析,筛选并挑选MgPa基因优势抗原表位,以Mg G-37标准株基因组DNA为模板,高保真聚合酶链反应扩增目的片段,将其亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET-30a(+)/MgPa′,然后转化至表达宿主菌E.coliRosett~(TM)2(DE3)中进行诱导表达,利用SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定表达产物;用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,BCA法测定纯化蛋白浓度。用纯化的MgPa重组蛋白(rMgPa′)免疫新西兰兔,间接ELISA方法检测免疫兔血清中  (本文共53页) 本文目录 | 阅读全文>>

南华大学
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生殖支原体MgPa特异性结合多肽的筛选、鉴定与人尿道上皮细胞cDNA文库的构建

生殖支原体(Mycoplasma genitalium,Mg)是介于病毒与细菌之间、缺乏细胞壁、呈高度多型性,可在无生命培养基中繁殖的原核细胞型微生物,可引起泌尿生殖系统感染,被归类于性传播疾病病原体之一。近年来,Mg感染率呈现上升趋势,但目前仍然没有满足临床需要的药物和疫苗可供使用。Mg最关键的外膜粘附蛋白为生殖支原体粘附素蛋白(Mg Pa),其C端具有较强的免疫原性,自发性的无细胞黏附活性的Mg突变株则缺乏Mg Pa,因此,Mg Pa在Mg的致病性方面起着至关重要的作用。本研究利用构建好的原核表达载体PET-30a(+)/Mg Pa在大肠杆菌中诱导表达Mg Pa的重组蛋白(r Mg Pa),采用噬菌体展示随机肽库技术筛选Mg Pa重组蛋白的特异性结合多肽,并对筛选到的特异性多肽进行鉴定。本研究目的:1、利用课题组前期构建好的含生殖支原体粘附素蛋白(Mg Pa)优势表位(1 075~1 364 aa)的重组载体,表达并纯化Mg...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国免疫学杂志》2010年11期
中国免疫学杂志

生殖支原体粘附素蛋白MgPa的表达及其多克隆抗体的制备与纯化

目的:制备并纯化生殖支原体(Mg)粘附素蛋白(MgPa)的多克隆抗体,为进一步探讨MgPa的生物学功能及其在Mg的临床诊断与预防方面的应用提供实验基础。方法:构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达生殖支原体粘附素蛋白(rMgPa′),重组蛋白经Western blot鉴定后用Ni-NAT亲和层析柱纯化,然后免疫新西兰兔以制备兔抗rMgPa′血清。用饱和硫酸铵法和溴化氰活化的琼脂糖4B亲和层析柱纯化...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中南医学科学杂志》2014年01期
中南医学科学杂志

基于MgPa模拟表位的MAP的制备、纯化与鉴定

目的制备含有生殖支原体黏附蛋白(MgPa)模拟表位的多抗原肽(MAP),为研制基于模拟表位的MAP用于Mg的诊断与预防提供前期实验基础。方法以多聚赖氨酸为核心基质,采用Fmoc方法合成含有MgPa模拟表位的八分枝MAP,反...  (本文共4页) 阅读全文>>

南华大学
南华大学

生殖支原体MgPa模拟表位的筛选与鉴定及其MAP免疫效果的观察

研究背景生殖支原体(Mycoplasma genitalium, Mg)是近年新明确的一种性病病原体,研究表明,Mg可能引起泌尿生殖道感染,与盆腔炎、呼吸道感染、关节炎等疾病有关,并可导致不育。另外,Mg还是引起艾滋病患者发生机会感染的主要病原体之一,被称为AIDS相关支原体。对于Mg的感染,目前仍然没有满足临床需要的疫苗可供使用,临床上急需安全、有效的疫苗以用于预防Mg的感染。生殖支原体粘附素蛋白(MgPa)是位于其尖形结构的一种主要的粘附素,其C端具有很强的免疫原性(最强区位于第1248~1364aa)。因此,MgPa是一种重要的中和抗原,在Mg的诊断和预防中起着重要的作用。本研究拟利用噬菌体展示随机肽库技术筛选MgPa的模拟表位,采用多抗原肽(MAP)的设计方案,制备并纯化含有模拟表位的八分枝MAP,并对其免疫原性进行研究。研究目的表达并纯化含生殖支原体MgPa优势表位(1075~1364aa的重组蛋白(rMgPa),制备...  (本文共123页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国现代医学杂志》2016年12期
中国现代医学杂志

生殖支原体16SrRNA基因和MgPa基因TaqMan荧光聚合酶链反应检测的比较研究

目的对生殖支原体(Mg)16Sr RNA基因和Mg Pa基因Taq Man荧光聚合酶链反应(PCR)检测结果进行比较,选取敏感度更高的靶基因进行Taq Man荧光PCR检测。方法选取Mg 16Sr RNA基因和Mg Pa基因为靶基因,根据已报道文献设计合...  (本文共3页) 阅读全文>>